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题名甘薯TD-SSR-PCR反应体系的优化
被引量：3
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作者
南文卓
郑丹炜
朱国鹏
张小贝
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机构
海南大学园艺园林学院
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出处
《热带作物学报》
CSCD
北大核心
2017年第1期89-93,共5页
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基金
热作无公害生产技术集成与示范推广
优质富硒菜用甘薯周年生产技术示范与推广
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文摘
为探索甘薯最佳TD-SSR-PCR体系,利用L16(43)正交设计研究2×PCR Mix、引物、模板DNA等主要影响因素的适宜浓度,并在此基础上对扩增程序和聚丙烯酰胺凝胶电泳上样量进行优化。结果表明,优化后的TD-SSR-PCR反应体系包括:10μL 2×PCR Mix、100 ng模板DNA、0.4μmol/L引物,1μL甘油,总体积20μL;优化后的扩增程序为:94℃预变性4 min,94℃变性45 s、Tm+5℃~Tm-5℃(每循环退火温度下降0.5℃,Tm选用一对引物中的较小Tm值)退火30 s(退火时间因扩增片段大小而异)、72℃延伸1 min共20个循环,94℃变性45 s、Tm-5℃退火30 s、72℃延伸1 min共15个循环,最后72℃延伸7 min,4℃保存;聚丙烯酰胺电泳上样量以1.5~2μL为宜。在此条件下,利用引物Z37对10份甘薯材料进行PCR扩增,得到的条带清晰、多态性高,表明此条件适用于甘薯的TD-SSR-PCR反应体系。
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关键词
甘薯
td-ssr-pcr
正交设计
2×PCR
MIX
最佳上样量
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Keywords
sweet potato
td-ssr-pcr
orthogonal design
2xPCR Mix
the best sample amount
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分类号
Q945
[生物学—植物学]
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