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Sequence Analysis of Type III Effector tccP and tccP2 Genes in Escherichia coli O157:H7 from Chinese Water-chestnut
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作者 张雪寒 叶青 +1 位作者 刘亚栋 何孔旺 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2013年第2期202-205,共4页
[Objective] This study aimed to analyze the type III effector tccP and tccP2 genes in Escherichia coli O157:H7 from Chinese water-chestnut. [Method] Gene-specific and locus-specific primers were utilized to amplify t... [Objective] This study aimed to analyze the type III effector tccP and tccP2 genes in Escherichia coli O157:H7 from Chinese water-chestnut. [Method] Gene-specific and locus-specific primers were utilized to amplify tccP/tccP2 and their flanking regions for sequence analysis. [Result] E. coli O157:H7 CWN11 harbored intact tccP and tccP2 genes, however, the number of proline-rich repeats in tccP gene was only one that probably resulted in biological incapability, whereas, the tccP2 gene consisted of five and half proline-rich repeats and could encode functional protein. [Conclusion] Here, we reported the first sequence of tccP gene that consisted of only one proline-rich repeat and tccP2 was assumed to play a crucial role in colonization and subsequent signaling cascades. 展开更多
关键词 EHEC O157:H7 Chinese water-chestnut tccp gene tccp2 gene proline-rich repeats
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肠出血性大肠杆菌O157:H7 TCCP蛋白研究进展 被引量:1
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作者 顾江 毛旭虎 《微生物学免疫学进展》 2009年第1期77-80,共4页
TCCP(內膜素受体偶联细胞骨架蛋白,Tir couple cytoskeleton protein)是近年研究新发现的EHEC(肠出血性大肠杆菌)O157∶H7致病分子,它经大肠杆菌Ⅲ型分泌系统转导入宿主细胞内,结合并活化宿主蛋白N-WASP(神经威奥综合症蛋白),引起肌动... TCCP(內膜素受体偶联细胞骨架蛋白,Tir couple cytoskeleton protein)是近年研究新发现的EHEC(肠出血性大肠杆菌)O157∶H7致病分子,它经大肠杆菌Ⅲ型分泌系统转导入宿主细胞内,结合并活化宿主蛋白N-WASP(神经威奥综合症蛋白),引起肌动蛋白的聚集,最终诱导特征病理改变黏附、擦拭(A/E)损伤的形成。本文就近年来对它的研究情况作一简要综述。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌O157∶H7 tccp 黏附与擦拭损伤
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肠出血性大肠杆菌O157∶H7 Intimin和Tir-Tccp蛋白质对小鼠的免疫保护性
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作者 赵攀登 张雪寒 +13 位作者 何孔旺 姜平 卢维彩 栾晓婷 叶青 温立斌 倪艳秀 李彬 王小敏 郭容利 周俊明 吕立新 俞正玉 茅爱华 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第6期1300-1304,共5页
为了研究不同浓度的肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7 Intimin和Tir-Tccp蛋白质对接受1010 CFUEHEC O157∶H7小鼠的免疫保护作用,将Intimin和Tir-Tccp蛋白质和佐剂充分乳化后,通过皮下多点注射免疫小鼠,对照组注射等量的磷酸盐缓冲液。... 为了研究不同浓度的肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7 Intimin和Tir-Tccp蛋白质对接受1010 CFUEHEC O157∶H7小鼠的免疫保护作用,将Intimin和Tir-Tccp蛋白质和佐剂充分乳化后,通过皮下多点注射免疫小鼠,对照组注射等量的磷酸盐缓冲液。共免疫2次,间隔14 d,末次免疫后14 d攻毒1只小鼠EHEC O157∶H7 1010CFU。每次免疫后的14 d通过断尾采血,用间接ELISA法检测血清抗体。攻毒后,观察小鼠精神状态,记录死亡数并检测排菌量。ELISA检测结果表明,Tir-Tccp蛋白质诱导小鼠产生IgG抗体水平明显升高,而Intimin诱导产生的IgG抗体升高不明显。攻毒后,各免疫组小鼠均死亡1只,存活14只,存活率为93.3%;对照组小鼠死亡4只,存活6只,存活率为60.0%。免疫组在攻毒后6 d,粪便中检测不到EHEC O157∶H7,对照组在攻毒后13 d仍有较高的排菌量。表明Intimin和Tir-Tccp蛋白质对小鼠起到了有效的免疫保护作用,能够减少EHEC O157∶H7在小鼠体内的定殖。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌O157∶H7 Intimin蛋白质 Tir-tccp蛋白质 免疫原性 小鼠
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tccP2基因在临床分离肠致病性大肠埃希菌中的特征分析
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作者 白莉 白雪梅 +2 位作者 赵爱兰 叶长芸 徐建国 《疾病监测》 CAS 2011年第2期96-99,共4页
目的分析2001-2003年某省儿童医院分离的268株大肠埃希菌tccP2基因的携带情况及该基因的分子特征。方法 PCR方法筛查临床分离的268株大肠埃希菌中EHEC、EPEC菌株;再筛查tccP2基因的携带情况,克隆阳性菌株tccP2基因,并进行核苷酸测序,同... 目的分析2001-2003年某省儿童医院分离的268株大肠埃希菌tccP2基因的携带情况及该基因的分子特征。方法 PCR方法筛查临床分离的268株大肠埃希菌中EHEC、EPEC菌株;再筛查tccP2基因的携带情况,克隆阳性菌株tccP2基因,并进行核苷酸测序,同时与GenBank数据库进行比对。结果 2001-2003年临床分离的菌株共检测到7株EPEC菌株,其中有2株菌tccP2基因阳性,长度分别为1458 bp,核苷酸和氨基酸的一致性为100%,与国际上公布的str.11128(O111∶H-)菌株的tccP2基因比对发现核苷酸一致性为61.3%;氨基酸序列比对,发现其N-端与str.11128(O111∶H-)菌株具有完全相同的特异的87个核苷酸序列,脯氨酸富集重复片段序列几乎一致,较str.11128(O111∶H-)菌株多4个重复片段。结论在中国临床分离的菌株中也存在具有tccP2基因的EPEC菌株,应进一步加大临床标本中该类菌株的分离与监测。 展开更多
关键词 基因特征 肠致病性大肠埃希菌 tccp2基因
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2005-2007年我国食品中大肠埃希菌O157分离株tccP1基因的分布研究
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作者 白莉 廖兴广 +3 位作者 张秀丽 申志新 张淑红 郭云昌 《中国食品卫生杂志》 北大核心 2011年第3期214-217,共4页
目的了解我国2005—2007年食源性疾病监测网分离的大肠埃希菌O157分离株中tccP1基因的分布情况及特点。方法对89株食源性大肠埃希菌O157分离株运用PCR方法进行检测。结果 tccP1基因的阳性率为55.1%。结论 tccP1基因广泛存在于O157∶H7... 目的了解我国2005—2007年食源性疾病监测网分离的大肠埃希菌O157分离株中tccP1基因的分布情况及特点。方法对89株食源性大肠埃希菌O157分离株运用PCR方法进行检测。结果 tccP1基因的阳性率为55.1%。结论 tccP1基因广泛存在于O157∶H7大肠埃希菌中,在O157:非H7中检出率很低。其分布与eaeA基因的携带情况具有一定的相关性,与志贺毒素基因携带没有相关性。 展开更多
关键词 大肠埃希菌O157 tccp1 粘附抹平效应
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肠出血性大肠埃希菌O157:H7 TCCP蛋白与宿主细胞IRTKS蛋白的相互作用 被引量:1
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作者 蒋明明 顾江 +6 位作者 王海光 鲁东水 张卫军 罗萍 童文德 邹全明 毛旭虎 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期149-153,共5页
目的通过体外结合实验验证EHEC O157:H7内膜素受体偶联细胞骨架蛋白重复片段与人肠上皮细胞IRTKS蛋白SH3结构域之间的相互作用,并制备二者蛋白复合体,为利用晶体学方法研究其相互作用奠定基础。方法将IRTKS蛋白的SH3结构域cDNA序列克隆... 目的通过体外结合实验验证EHEC O157:H7内膜素受体偶联细胞骨架蛋白重复片段与人肠上皮细胞IRTKS蛋白SH3结构域之间的相互作用,并制备二者蛋白复合体,为利用晶体学方法研究其相互作用奠定基础。方法将IRTKS蛋白的SH3结构域cDNA序列克隆至pET30a表达质粒,转化BL21(DE3),诱导表达纯化SH3(IRTKS)蛋白;制备TCCP重复片段TC-CP(3R)蛋白;将SH3(IRTKS)与TCCP(3R)按照不同比例混合后,非变性丙烯酰胺凝胶电泳鉴定两者相互结合后产物;利用分子筛层析收集标准蛋白、TCCP(3R)、SH3(IRTKS)和TCCP(3R)-SH3(IRTKS)复合体的出峰体积,回归计算复合物的分子量,分析蛋白相互结合的比例。结果成功克隆表达了SH3(IRTKS)重组质粒;并制备了高纯度的SH3(IRTKS)和TCCP(3R)蛋白;非变性丙烯酰胺凝胶电泳结果证实TCCP(3R)与SH3(IRTKS)发生相互作用形成了蛋白质复合体;复合体的分子量约为33 000,二者相互结合的比例约为1:1。结论本研究为TCCP重复片段与SH3(IRTKS)相互作用提供了直接证据,同时复合体的制备,为利用晶体学研究两者的相互作用奠定了基础。 展开更多
关键词 EHEC O157:H7 tccp IRTKS 重组表达 蛋白质复合体
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肠出血性大肠杆菌O157∶H7 TccP基因克隆、表达及其抗原性鉴定 被引量:3
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作者 杨琴 顾江 +4 位作者 毛旭虎 邹全明 宋方洲 丁红雷 王庆旭 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期319-322,共4页
目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7 Tir细胞骨架偶联蛋白(TccP)基因,并研究其抗原性。方法采用PCR法自EHEC O157∶H7 Sakai菌株基因组扩增TccP基因,构建TccP原核表达载体并在大肠杆菌中诱导表达。表达产物经初步纯化后,免疫... 目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7 Tir细胞骨架偶联蛋白(TccP)基因,并研究其抗原性。方法采用PCR法自EHEC O157∶H7 Sakai菌株基因组扩增TccP基因,构建TccP原核表达载体并在大肠杆菌中诱导表达。表达产物经初步纯化后,免疫新西兰白兔,制备兔抗TccP多克隆抗体。抗体效价及特异性用ELISA法和Western blotting法进行测定和分析。结果从EHEC O157∶H7 Sakai菌株中克隆出了1014bp的TccP基因。构建的重组质粒pET28a-TccP在大肠杆菌中获得了高效表达;以TccP免疫家兔获得了高效价多克隆抗体,Western blotting分析此抗体能与TccP发生特异性抗原抗体反应。结论在大肠杆菌中成功克隆表达了TccP基因,所获TccP具有良好的抗原性,为进一步研究TccP在EHEC O157∶H7致病机制中的作用奠定基础。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌O157:H7 Tir-细胞骨架偶联蛋白 基因表达 多克隆抗体
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肠出血性大肠埃希菌O157:H7 tccP基因敲除菌株的构建
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作者 肖大平 郭鹰 +4 位作者 张卫军 顾江 王海光 朱凤才 毛旭虎 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期875-878,共4页
目的构建肠出血性大肠埃希菌O157∶H7介导和宿主细胞的粘附与擦拭(A/E)损伤相关基因tccP敲除菌株。方法根据GenBank公布的肠出血性大肠埃希菌O157∶H7基因序列,设计PCR引物,分别扩增克隆tccP基因两端外侧的DNA片段,并与氯霉素耐药基因Ca... 目的构建肠出血性大肠埃希菌O157∶H7介导和宿主细胞的粘附与擦拭(A/E)损伤相关基因tccP敲除菌株。方法根据GenBank公布的肠出血性大肠埃希菌O157∶H7基因序列,设计PCR引物,分别扩增克隆tccP基因两端外侧的DNA片段,并与氯霉素耐药基因Cam连接后亚克隆于pBluescriptSKⅡ质粒,通过同源重组替换野生型tccP基因,采用PCR、RT-PCR以及Westernblot分别从DNA、RNA及蛋白质水平鉴定tccP基因是否被敲出。结果在DNA、RNA及蛋白质3个水平均证实Cam片段已成功替换tccP基因而整合进入O157∶H7基因组中。结论成功构建肠出血性大肠埃希菌O157∶H7tccP基因敲除菌株。 展开更多
关键词 肠出血性大肠埃希菌O157:H7 tccp 同源重组 基因敲除
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表皮蛋白基因TcCP14.6和TcLCPA3A参与介导赤拟谷盗对磷化氢的抗性形成 被引量:5
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作者 陈二虎 孟宏杰 +1 位作者 陈艳 唐培安 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期2150-2160,共11页
【目的】表皮蛋白是昆虫表皮重要的结构物质,大量研究已经证实表皮蛋白基因参与介导昆虫抗药性形成。以赤拟谷盗(Tribolium castaneum)为研究对象,解析表皮蛋白基因TcCP14.6(cuticle protein CP14.6)和TcLCPA3A(larval cuticle protein ... 【目的】表皮蛋白是昆虫表皮重要的结构物质,大量研究已经证实表皮蛋白基因参与介导昆虫抗药性形成。以赤拟谷盗(Tribolium castaneum)为研究对象,解析表皮蛋白基因TcCP14.6(cuticle protein CP14.6)和TcLCPA3A(larval cuticle protein A3A)在昆虫磷化氢抗性形成过程中的作用。【方法】采用联合国粮农组织(FAO)推荐的磷化氢熏蒸方法对采自5个省份赤拟谷盗的磷化氢抗性水平进行测定。基于赤拟谷盗基因组数据获得TcCP14.6和TcLCPA3A的cDNA序列,利用在线生物信息学分析软件预测其编码的氨基酸序列、信号肽和保守结构域。分别提取赤拟谷盗不同组织(头、胸、腹的表皮、翅、足、肠道、马氏管和脂肪体)、不同磷化氢抗性水平以及磷化氢胁迫后试虫的总RNA。以TcRPS和TcRPL为内参基因,运用RT-qPCR技术分析TcCP14.6和TcLCPA3A在赤拟谷盗不同组织、不同磷化氢抗性水平和药剂胁迫下的表达模式。最后,通过RNA干扰技术结合生物测定方法分析TcCP14.6和TcLCPA3A与赤拟谷盗磷化氢抗性的关系。【结果】生物测定结果表明,江苏(JS,RR=1.7)和云南(YN,RR=3.0)种群对磷化氢保持敏感,湖南种群(HN,RR=20.2)表现为中等抗性,四川(SC,RR=395.4)和广东(GD,RR=862.7)种群表现为极高抗。序列分析结果表明TcCP14.6和TcLCPA3A蛋白均包含信号肽和保守的几丁质结合域。RT-qPCR结果显示,TcCP14.6和TcLCPA3A均在赤拟谷盗表皮组织中高表达,而在内部器官(脂肪体、肠道、马氏管)中的表达量相对较低。此外,TcCP14.6表达量随磷化氢抗性水平的增加呈上调趋势,而TcLCPA3A表达量则呈下降趋势;赤拟谷盗经磷化氢熏蒸处理6 h,TcCP14.6和TcLCPA3A的表达量分别呈现上调和下调趋势。注射dsRNA分别干扰抗性(GD)和敏感(YN)种群两个基因的表达后再用LC30的磷化氢浓度处理试虫。与对照相比,TcCP14.6基因沉默后赤拟谷盗的死亡率显著升高,而TcLCPA3A基因沉默后试虫死亡率显著下降。【结论】表皮蛋白基因TcCP14.6和TcLCPA3A参与介导赤拟谷盗对磷化氢的抗性。 展开更多
关键词 赤拟谷盗 磷化氢抗性 表皮蛋白 tccp14.6 TcLCPA3A RNA干扰
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时间约束下任务关键系统的可调度性分析 被引量:2
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作者 陈莹 邢建春 +1 位作者 杨启亮 张孝鹏 《计算机工程》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期115-119,128,共6页
针对时间约束下工作流可调度性验证和修正策略不完善的问题,提出一种基于时间约束着色Petri网的任务关键系统(MCS)可调度性分析方法。根据系统中任务的性质将其划分为关键任务和非关键任务。对工作流中的活动进行可调度性验证,结合任务... 针对时间约束下工作流可调度性验证和修正策略不完善的问题,提出一种基于时间约束着色Petri网的任务关键系统(MCS)可调度性分析方法。根据系统中任务的性质将其划分为关键任务和非关键任务。对工作流中的活动进行可调度性验证,结合任务类别和时间约束修正不可调度的活动。实例分析结果表明,该方法具有较好的修正性能和运行效果,对时间约束下MCS的描述和建模具有一定应用价值。 展开更多
关键词 任务关键系统 时间约束着色Petri网 工作流 可调度性分析 修正策略
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Helicity-dependent time delays in multiphoton ionization by two-color circularly polarized laser fields
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作者 Qing-Hua Ke Yue-Ming Zhou +5 位作者 Yi-Jie Liao Jin-Tai Liang Yong Zhao Jia Tan Min Li Pei-Xiang Lu 《Frontiers of physics》 SCIE CSCD 2021年第5期3-9,共7页
By numerically solving the three-dimensional time-dependent Schrödinger equation,we have investigated multiphoton ionization of hydrogen atom in the two-color circularly polarized(TCCP)laser fields consisting of ... By numerically solving the three-dimensional time-dependent Schrödinger equation,we have investigated multiphoton ionization of hydrogen atom in the two-color circularly polarized(TCCP)laser fields consisting of a strong 400 nm and a much weaker 800 nm pulses.Due to the presence of perturbative 800 nm laser pulse,sideband peaks emerge between the above-threshold ionization rings in the photoelectron momentum distributions.Our numerical results show that the sideband peaks exhibit one-lobe structure in the co-rotating TCCP laser fields,while it displays the three-lobe structure in the counter-rotating TCCP laser fields.Moreover,the photoelectron yield of sidebands in the co-rotating TCCP fields is much higher than those of the counter-rotating TCCP fields.These phenomena could be well explained from the perspective of the photon-absorption channels via the selection rules.Interestingly,an obvious phase shift between the sidebands of different orders from the co-rotating and counter-rotating TCCP fields is observed.This shift indicates the helicity-dependent time delay in the one-photon continuum-continuum transition process. 展开更多
关键词 helicity-dependent time delay tccp multiphoton ionization
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