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细胞穿膜肽TAT和L17E以融合方式递送蛋白质的能力比较
1
作者 黄芸 张晶 华子春 《药学学报》 北大核心 2025年第10期3085-3090,共6页
细胞穿膜肽(cell-penetrating peptides,CPPs)如TAT和L17E在药物递送领域展现出显著潜力,特别是在蛋白质递送方面。已有研究表明TAT融合蛋白的递送效果比非融合蛋白效果更好;在非共价结合方式下递送EGFP,L17E的递送能力强于TAT。因此,... 细胞穿膜肽(cell-penetrating peptides,CPPs)如TAT和L17E在药物递送领域展现出显著潜力,特别是在蛋白质递送方面。已有研究表明TAT融合蛋白的递送效果比非融合蛋白效果更好;在非共价结合方式下递送EGFP,L17E的递送能力强于TAT。因此,本文探究TAT与L17E以融合连接方式递送目标蛋白的能力及其作用机制。首先表达纯化融合蛋白TAT-EGFP、L17E-EGFP,采用流式细胞检测法和荧光显微镜观察在细胞水平上两者进入B16-F10细胞的能力,发现TAT-EGFP的穿膜能力更强,且递送能力与融合蛋白浓度呈现正相关。使用AlphaFold3模拟蛋白发现,TAT-EGFP结构具有两条向外伸展的疏水侧链,这种结构特征可能显著增强其与细胞膜的相互作用,从而提高穿膜效率。L17E-EGFP的侧链向内收缩及其与主体之间的静电作用可能导致其与细胞膜的结合位点减少、接触面积降低,从而削弱穿膜效果。本研究表明,TAT、L17E类阳离子穿膜肽的结构特征(侧链构象、疏水性与电荷分布)是影响其递送效率的关键因素,为优化穿膜肽设计及其介导的蛋白质药物开发提供了重要依据。 展开更多
关键词 细胞穿膜肽 tat L17E 融合递送 穿膜能力
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Self肽与Tat肽协同修饰阿霉素脂质体的制备及其抗肿瘤作用
2
作者 段学辉 刘含笑 +4 位作者 李旭 任甜莹 杜燕 楚新垒 唐宜轩 《广东药科大学学报》 2025年第4期23-31,共9页
目的采用CD47蛋白衍生的Self肽提高Tat肽修饰脂质体的免疫生物相容性和内皮细胞渗透性,以提升其包载阿霉素后的抗肿瘤疗效。方法通过薄膜水化法制备常规脂质体(Lip)、Self肽修饰脂质体(S-Lip)、Tat修饰脂质体(T-Lip)及双肽共修饰脂质体(... 目的采用CD47蛋白衍生的Self肽提高Tat肽修饰脂质体的免疫生物相容性和内皮细胞渗透性,以提升其包载阿霉素后的抗肿瘤疗效。方法通过薄膜水化法制备常规脂质体(Lip)、Self肽修饰脂质体(S-Lip)、Tat修饰脂质体(T-Lip)及双肽共修饰脂质体(ST-Lip),并通过主动载药法包载阿霉素。采用透射电镜和动态光散射表征形貌与粒径并测定包封率。通过荧光显微成像评估巨噬细胞体外摄取,利用流式细胞术分析脂质体与脾脏免疫细胞的相互作用,并进一步考察脂质体与内皮细胞的相互作用及体内抗肿瘤疗效。结果多肽修饰未显著改变脂质体形貌与粒径,各组药物包封率均>80%。ST-Lip相较T-Lip显著抑制巨噬细胞内吞(P<0.01),体内免疫识别结果显示ST-Lip组脾脏巨噬细胞和B细胞的脂质体阳性比例相比T-Lip分别降低了约16.7%及39.0%。此外,Self肽与Tat肽产生协同效应,使内皮细胞摄取量相比Lip提高1.77倍,对荷瘤小鼠抑瘤率达87%。结论CD47衍生Self肽可协同增强Tat修饰脂质体的免疫相容性及内皮细胞渗透能力,为肿瘤靶向递送系统开发提供新策略。 展开更多
关键词 脂质体 细胞穿膜肽 tat肽 Self肽 阿霉素
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HIV-1病毒蛋白gp120、tat和炎症因子参与艾滋病患者围手术期神经认知功能障碍发展的临床研究
3
作者 熊绍军 杜云飞 付苏红 《首都食品与医药》 2025年第14期25-28,共4页
目的研究HIV-1病毒蛋白gp120、tat和炎症因子在艾滋病患者围手术期神经认知功能障碍发展过程中的作用机制。方法选取我院2022年1月-2023年12月期间收治的行手术治疗的艾滋病患者61例作为参研组,同期进行体检的健康人群61例作为对照组,... 目的研究HIV-1病毒蛋白gp120、tat和炎症因子在艾滋病患者围手术期神经认知功能障碍发展过程中的作用机制。方法选取我院2022年1月-2023年12月期间收治的行手术治疗的艾滋病患者61例作为参研组,同期进行体检的健康人群61例作为对照组,采用蒙特利尔认知评估量表(Montreal cognitive assessment,MoCA)对参研组患者术后认知情况进行检测,根据是否发生围术期神经认知障碍(Perioperative neurocognitive disorders,PND)分为PND组(MoCA<26分)(n=24)与非PND组(MoCA≥26分)(n=37),检测并对比炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IFN-γ)以及病毒表面糖蛋白(gp120)、转录反式激活因子(trans-activator of transcription,tat)水平。结果参研组手术治疗前的炎症因子各数据均高于对照组,水平存在显著差异(P<0.05);与非PND组相比,PND组的病毒蛋白gp120、tat以及炎症因子水平显著更高,且MoCA得分更低(P<0.05);通过Spearman法分析显示,艾滋病患者病毒蛋白gp120、tat、炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IFN-γ)均与MoCA呈负相关(r=-0.642、-0.663、-0.483、-0.463、-0.439、-0.460、-0.446,P<0.001)。结论艾滋病患者发生PND时,机体内HIV-1病毒蛋白gp120呈现表达上调的趋势,tat蛋白表达亦显著增加,并且炎症因子水平存在明显的异常升高变化。鉴于此,在艾滋病患者围术期阶段,可借助对gp120、tat以及炎症因子水平的监测与调控,从而实现对其PND发生发展情况的科学管理与合理干预,以改善患者的预后状况,并提升围术期的医疗质量与安全性。 展开更多
关键词 围术期神经认知障碍 艾滋病 GP120 tat 炎症因子
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PDCA在检验科改进TAT时间中的应用
4
作者 贺永焕 王贵娟 王昌胜 《医学检验与临床》 2025年第2期78-81,共4页
目的:使用PDCA工具对检验科TAT时间进行持续改进。方法:统计2022年9-12月的检验科血常规、尿常规TAT时间合格率及中位数,利用PDCA工具对此段时间进行分析改进,然后统计2023年1-4月份检验科血常规、尿常规TAT时间合格率及中位数,以此验证... 目的:使用PDCA工具对检验科TAT时间进行持续改进。方法:统计2022年9-12月的检验科血常规、尿常规TAT时间合格率及中位数,利用PDCA工具对此段时间进行分析改进,然后统计2023年1-4月份检验科血常规、尿常规TAT时间合格率及中位数,以此验证PDCA在检验科改进TAT时间中的有效应用。结果:检验科2023年1-4月份的血常规、尿常规TAT时间合格率比2022年9-12月的血常规、尿常规TAT时间合格率明显提高,TAT中位数改进后明显缩短,通过t检验分析,发现实行PDCA前后血、尿TAT合格率及中位数差异显著(P<0.05)。结论:PDCA工具在检验科改进TAT时间中有非常重要的作用,能提高检验科工作效率,增强检验科的服务能力。 展开更多
关键词 ISO15189 检验科 tat时间 PDCA循环
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PDCA循环管理方法提高检验前TAT符合率的应用效果
5
作者 江萍 《医学检验与临床》 2025年第3期70-72,共3页
目的:验证PDCA循环管理法用于提高检验前周转时间(TAT)符合率的实际应用效果。方法:回顾性分析中山市骨科医院2022年7月-2023年3月期间住院患者标本检验前TAT符合率和2023年4月-2023年12月使用PDCA循环法进行管理后住院患者标本检验前TA... 目的:验证PDCA循环管理法用于提高检验前周转时间(TAT)符合率的实际应用效果。方法:回顾性分析中山市骨科医院2022年7月-2023年3月期间住院患者标本检验前TAT符合率和2023年4月-2023年12月使用PDCA循环法进行管理后住院患者标本检验前TAT符合率,进行统计对比分析。结果:运用PDCA管理后住院患者标本检验前TAT符合率由之前的66.46%逐步提高至91.36%,效果明显,前后对比差异有统计学意义(P<0.001)。结论:使用PDCA循环法,能有效提高住院患者标本检验前TAT符合率,提高检验时效性,是临床检验质量管理的有效手段。 展开更多
关键词 PDCA循环法 检验前周转时间(tat) 检验质量管理
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胎盘早剥孕妇血浆t-PAIC、TAT水平的变化意义及其与病情严重程度、弥散性血管内凝血的关系 被引量：1
6
作者 张雪 赵刚 +2 位作者 毛会 王海艳 牛艳华 《现代生物医学进展》 CAS 2024年第22期4379-4381,共3页
目的:分析胎盘早剥孕妇血浆t-PAIC、TAT水平的变化意义及其与病情严重程度、弥散性血管内凝血的关系。方法:选择自2018.6-2023.6接受规律产检的105例胎盘早剥孕妇为观察组,根据严重程度分为轻型组和重型组;另选同期的105例正常妊娠孕妇... 目的:分析胎盘早剥孕妇血浆t-PAIC、TAT水平的变化意义及其与病情严重程度、弥散性血管内凝血的关系。方法:选择自2018.6-2023.6接受规律产检的105例胎盘早剥孕妇为观察组,根据严重程度分为轻型组和重型组;另选同期的105例正常妊娠孕妇纳入对照组。检测指标并分析相关性、诊断价值。结果:观察组血浆t-PAIC、TAT水平均高于对照组(P<0.05);重型组血浆t-PAIC、TAT水平均高于轻型组(P<0.05);胎盘早剥孕妇血浆t-PAIC、TAT水平均与其分娩出血量呈正相关(P<0.05);血浆t-PAIC联合TAT预测重型胎盘早剥的敏感度为89.43%、特异度为61.23%、AUC为0.901;血浆t-PAIC联合TAT预测胎盘早剥孕妇发生弥散性血管内凝血的敏感度为92.56%、特异度为60.47%、AUC为0.920。结论:胎盘早剥孕妇血浆t-PAIC、TAT水平均升高,与其病情严重程度有关,联合应用可进一步提高对继发弥散性血管内凝血的预测效能。 展开更多
关键词 胎盘早剥 t-PAIC tat 严重程度 弥散性血管内凝血
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大肠杆菌Tat转运酶的研究进展 被引量：2
7
作者 张静 张明 《生物学杂志》 CAS CSCD 2006年第6期1-3,共3页
TatA、TatB和TatC是大肠杆菌Tat转运酶的组成成分。研究表明各Tat蛋白具有不同的功能区域,TatA和TatB蛋白功能重要的位点位于N末端的穿膜片断、其后的双极性α-螺旋和铰链区。TatC的序列保守性低,N末端穿膜片断和位于胞质内的第一环区... TatA、TatB和TatC是大肠杆菌Tat转运酶的组成成分。研究表明各Tat蛋白具有不同的功能区域,TatA和TatB蛋白功能重要的位点位于N末端的穿膜片断、其后的双极性α-螺旋和铰链区。TatC的序列保守性低,N末端穿膜片断和位于胞质内的第一环区对转运是必需的。Tat转运酶各成分相互结合成复合物形式并相互依赖。TatA在细胞中高表达并自身聚合形成数量不等的同聚物,具有稳定TatBC复合物的作用,TatB有稳定TatC的功能,TatB和TatC两者结合形成二聚体。实验表明,TatA复合物形成转运通道,TatBC复合物通过TatC蛋白识别底物的信号肽并与底物结合,再在TatB介导下与TatA复合物结合形成具有活性的转运酶。 展开更多
关键词 大肠杆菌 tat蛋白质转运系统 tat转运酶 tat蛋白质
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羊种布鲁氏菌Tat系统底物蛋白ErfK的抗原性和免疫原性研究
8
作者 吴瑶 焉鑫 +14 位作者 孙明军 屈海龙 郭晓涵 闫昊 张培培 孙世雄 李嘉琪 孙翔翔 刘蒙达 张皓博 南文龙 邵卫星 王方昆 樊晓旭 孙淑芳 《中国动物检疫》 CAS 2024年第5期96-103,共8页
为分析羊种布鲁氏菌双精氨酸转运系统(twin-arginine translocation system,Tat system)毒力相关底物蛋白L,D-转肽酶ErfK诱导宿主产生的免疫应答情况,首先对布鲁氏菌M28毒株ErfK基因序列(WP_002963714.1)进行生物信息学分析,参考序列设... 为分析羊种布鲁氏菌双精氨酸转运系统(twin-arginine translocation system,Tat system)毒力相关底物蛋白L,D-转肽酶ErfK诱导宿主产生的免疫应答情况,首先对布鲁氏菌M28毒株ErfK基因序列(WP_002963714.1)进行生物信息学分析,参考序列设计引物,构建表达载体pET-30a(+)-ErfK,经IPTG诱导表达、亲和层析和镍柱纯化获得目的蛋白;利用SDS-PAGE和Western blot对重组ErfK(rErfK)蛋白进行抗原性鉴定;将rErfK蛋白免疫小鼠,分别在免疫后15、30和45 d收集血清和脾脏,检测蛋白免疫后小鼠的细胞免疫应答和体液免疫应答情况。生物信息学预测结果显示,ErfK蛋白无跨膜结构,为亲水性蛋白,有多个T细胞和B细胞抗原表位;SDS-PAGE和Western blot均可获得25 kDa的蛋白条带,重组蛋白可与布鲁氏菌阳性血清发生反应,证明rErfK有良好的抗原性;小鼠免疫试验结果显示,rErfK组小鼠脾脏CD8^(+)T细胞含量相比PBS组显著上升(P<0.05),且脾脏Th1型细胞因子IL-2、TNF-α、IFN-γ和Th2型细胞因子IL-4转录水平均显著上升(P<0.05),此外,rErfK免疫也能极显著诱导小鼠血清中总IgG和特异性IgG的产生(P<0.01)。上述结果表明,经大肠杆菌表达的布鲁氏菌rErfK蛋白可诱导小鼠产生良好的体液免疫和细胞免疫应答。本研究为基于ErfK蛋白的布鲁氏菌病诊断试剂和亚单位疫苗研发提供了参考依据。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 tat系统底物蛋白L D-转肽酶ErfK 抗原性 免疫原性
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TAT-β-半乳糖苷酶对小鼠生物膜穿透性的研究 被引量：1
9
作者 严世荣 严洁 +1 位作者 龚坚 李蓓 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2002年第4期343-345,350,共4页
为寻找介导外源蛋白质进入组织细胞的生物学方法 ,本研究构建了pET2 8a TAT LacZ重组表达子 ,纯化得到TAT β Gal融合蛋白 ,通过腹腔注射到小鼠体内观察TAT β Gal能否穿过各组织生物膜及达到各组织的时间、浓度。结果发现TAT β Gal在... 为寻找介导外源蛋白质进入组织细胞的生物学方法 ,本研究构建了pET2 8a TAT LacZ重组表达子 ,纯化得到TAT β Gal融合蛋白 ,通过腹腔注射到小鼠体内观察TAT β Gal能否穿过各组织生物膜及达到各组织的时间、浓度。结果发现TAT β Gal在短时间内可到达各组织。该研究证明在生物大分子的N 末端加上TAT具有穿透力的蛋白转导区肽段形成的融合蛋白可穿过生物膜到达各组织 ,这一发现为肽类。 展开更多
关键词 tat-β-半乳糖苷酶 小鼠 生物膜穿透性 pET28a-tat-LacZ重组表达子 tat-β-Gal融合蛋白 蛋白转导区
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血清FM、TAT、MIP-1α与产后静脉血栓栓塞症的关系及其预测价值研究 被引量：3
10
作者 张珊珊 孟侠 +3 位作者 王静依 彭燕 陈国艳 杨智玲 《现代生物医学进展》 CAS 2024年第11期2164-2168,2110,共6页
目的:探讨血清纤维蛋白单体(FM)、凝血酶-抗凝血酶复合物(TAT)、巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)与产后静脉血栓栓塞症(VTE)的关系及其预测价值研究。方法:选取2021年12月-2023年12月在成都医学院第二附属医院分娩后有VTE的产妇纳入VTE组... 目的:探讨血清纤维蛋白单体(FM)、凝血酶-抗凝血酶复合物(TAT)、巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)与产后静脉血栓栓塞症(VTE)的关系及其预测价值研究。方法:选取2021年12月-2023年12月在成都医学院第二附属医院分娩后有VTE的产妇纳入VTE组(n=45),根据1:4配对方法选择我院同期分娩后无VTE的产妇纳入非VTE组(n=180)。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清FM、TAT、MIP-1α、D-二聚体(D-D)水平。多因素Logistic回归分析产后发生VTE的影响因素,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清FM、TAT、MIP-1α、D-D水平对产后VTE的预测价值。结果:与非VTE组比较,VTE组血清FM、TAT、MIP-1α、D-D水平升高(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,年龄增加、剖宫产和FM、TAT、MIP-1α、D-D升高为影响产后VTE的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清FM、TAT、MIP-1α、D-D水平联合预测产后VTE的曲线下面积为0.911,大于血清FM、TAT、MIP-1α、D-D水平单独预测的0.748、0.755、0.722、0.592。结论:血清FM、TAT、MIP-1α水平升高是产后VTE的独立危险因素,血清FM、TAT、MIP-1α联合D-D对产后VTE的预测价值较高。 展开更多
关键词 FM tat MIP-1Α 产后 静脉血栓栓塞症
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TAT蛋白介导生物活性蛋白到达缺血灶的研究
11
作者 严洁 余绍祖 范华燕 《中国新药与临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期172-174,共3页
目的 :以 β 半乳糖苷酶 (β Gal)为目的蛋白 ,观察TAT蛋白介导其到达缺血灶的情况、及有无血脑屏障 (BBB)的破坏。方法 :构建TAT β Gal融合基因表达质粒 ,转染大肠杆菌BL2 1(DE3)。利用鏊合金属亲合层析法纯化蛋白。将 36只SD大鼠随... 目的 :以 β 半乳糖苷酶 (β Gal)为目的蛋白 ,观察TAT蛋白介导其到达缺血灶的情况、及有无血脑屏障 (BBB)的破坏。方法 :构建TAT β Gal融合基因表达质粒 ,转染大肠杆菌BL2 1(DE3)。利用鏊合金属亲合层析法纯化蛋白。将 36只SD大鼠随机分为 3组。其中 2组 ,采用经颈外动脉血管内直接线栓闭塞法 ,建立可复流的大脑中动脉闭塞(MCAO )模型 ,分别腹腔注射TAT β Gal 5mg·kg- 1,β Gal 5mg·kg- 1,并同时注射Evan’s蓝。另一组为假手术组 ,腹腔注射TAT β Gal 5mg·kg- 1。3组分别于给药后 30min ,2h ,4h断头取脑、快速冰冻切片 ,脑切片间隔行x Gal及TTC染色。结果 :MCAO模型SD大鼠 ,腹腔注射TAT β Gal融合蛋白后 ,30min时脑组织各个区域及缺血灶区即可检测到外源性 β Gal的活性 ,4h达高峰 ,同时BBB没有被破坏。而对照组 ,脑组织各个区域未检测到外源性β Gal的活性。结论 :TAT蛋白能有效地介导生物活性蛋白通过BBB进入缺血灶区在脑组织内达到有效浓度。 展开更多
关键词 基因 基因tat 基因产物tat 血脑屏障 脑缺血 再灌注 再灌注损伤 基因产物tat融合蛋白
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血栓弹力图联合血浆t-PAIC、TAT在产后静脉血栓疾病中的表达意义及其对疾病发生的影响
12
作者 屈明利 史小莺 +2 位作者 王钱 徐慧双 王云 《现代生物医学进展》 CAS 2024年第23期4490-4492,4505,共4页
目的:探讨血栓弹力图联合血浆t-PAIC、TAT在产后静脉血栓疾病中的表达意义及其对疾病发生的影响。方法:选取我院2019.1-2023.12共81例产后静脉血栓疾病患者为观察组,另选取同期81名产后未发生静脉血栓疾病的产妇作为对照组。对比两组相... 目的:探讨血栓弹力图联合血浆t-PAIC、TAT在产后静脉血栓疾病中的表达意义及其对疾病发生的影响。方法:选取我院2019.1-2023.12共81例产后静脉血栓疾病患者为观察组,另选取同期81名产后未发生静脉血栓疾病的产妇作为对照组。对比两组相关指标,分析血栓弹力图、血浆t-PAIC、TAT对产后静脉血栓疾病的预测价值。结果:观察组生产后α值、Ma值高于对照组,Ly30值、R值、K值低于对照组(P<0.05);观察组孕早期及生产后t-PAIC、TAT水平高于对照组(P<0.05);血栓弹力图联合血浆t-PAIC、TAT的诊断灵敏度为71.57%,特异度为83.56%,联合诊断明显高于单一指标诊断(P<0.05);logistic回归分析结果表明:孕早期血栓弹力图中Ma值、t-PAIC、TAT对产后静脉血栓疾病具有独立预测价值(P<0.05)。结论:血栓弹力图联合血浆t-PAIC、TAT对于产后静脉血栓疾病的预测与诊断具有重要价值,可考虑对孕妇孕早期、生产后进行检测从而对产后静脉血栓疾病的识别与判断提供参考意见。 展开更多
关键词 血栓弹力图 t-PAIC tat 产后静脉血栓
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TAT-PTD融合蛋白可能存在的跨膜递送作用机制 被引量：12
13
作者 何火聪 刘树滔 +4 位作者 潘剑茹 傅蓉 陈菁 陈躬瑞 饶平凡 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期704-710,共7页
为探讨TATPTD融合蛋白的跨膜递送作用机制,采用DNA重组技术构建pGEXTATGFP表达质粒.在E.coliBL21表达GST-TAT-GFP,并用谷胱甘肽(glutathione)Sepharose4B亲和柱进行纯化.GST-TAT-GFP在不同条件下与细胞的作用结果表明,GST-TAT-GFP能有... 为探讨TATPTD融合蛋白的跨膜递送作用机制,采用DNA重组技术构建pGEXTATGFP表达质粒.在E.coliBL21表达GST-TAT-GFP,并用谷胱甘肽(glutathione)Sepharose4B亲和柱进行纯化.GST-TAT-GFP在不同条件下与细胞的作用结果表明,GST-TAT-GFP能有效进入HeLa、SMMC7721、L02和BEL7402细胞,GST-TAT-GFP在递送时对时间和浓度有依赖关系.同时,温度对GST-TAT-GFP跨膜作用具有明显的影响,GST-TAT-GFP的跨膜作用受代谢抑制剂的影响很小,肝素的存在能明显抑制GST-TAT-GFP跨膜进入细胞的能力,GST-TAT-GFP对细胞活性没有影响.这些结果说明,TATPTD可能是通过与细胞表面的硫酸乙酰肝素等受体相结合介导融合蛋白跨膜递送进入细胞的. 展开更多
关键词 tat-PTD 跨膜递送 GST-tat-GFP
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pET28a-TAT-LacZ重组子的构建 被引量：3
14
作者 严世荣 龚坚 +1 位作者 严洁 邱云城 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期141-144,共4页
为了构建高表达pET28a-TAT-LacZ重组子,观察表达的融合蛋白TAT-β-Gal能否穿过生物膜,使用人工合成编码TAT蛋白转导区的DNA片段,插入载体pET28a组氨酸编码区后再连接lacZ基因,组成pET28a-TAT-LacZ重组表达子,转化大肠杆菌,利用组氨酸亲... 为了构建高表达pET28a-TAT-LacZ重组子,观察表达的融合蛋白TAT-β-Gal能否穿过生物膜,使用人工合成编码TAT蛋白转导区的DNA片段,插入载体pET28a组氨酸编码区后再连接lacZ基因,组成pET28a-TAT-LacZ重组表达子,转化大肠杆菌,利用组氨酸亲和层析柱纯化TAT-β-Gal融合蛋白,将融合蛋白加入培养的平滑肌细胞。得到高度纯化的、有活性的TAT-β-Gal融合蛋白,TAT-β-Gal在短时间内进入体外培养平滑肌细胞,成功地构建了高表达pET28a-TAT-LacZ重组子,并在体外培养的细胞中证实TAT-β-Gal融合蛋白穿透生物膜的能力,为肽类、生物大分子药物进入组织细胞内发挥治疗作用提供了理论基础。 展开更多
关键词 pET28a质粒 tat蛋白转导区 tat-β-Gal融合蛋白 平滑肌细胞
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HIV-1 tat基因改造及其蛋白表达、纯化与抗体制备 被引量：5
15
作者 齐香荣 张相民 +4 位作者 高瑛瑛 邓瑶 闫克夏 李仁清 阮力 《生物技术通讯》 CAS 2006年第2期142-145,共4页
目的:为了方便实验室工作中HIV-1B'/C亚型及C亚型Tat蛋白的检测,制备了相应的Tat蛋白及其抗体。方法:将我国HIV-1B'/C亚型流行株tat基因的第1个外显子和HIV-1C亚型tat基因的第2个外显子融合在一起,将密码子替换为大肠杆菌的优... 目的:为了方便实验室工作中HIV-1B'/C亚型及C亚型Tat蛋白的检测,制备了相应的Tat蛋白及其抗体。方法:将我国HIV-1B'/C亚型流行株tat基因的第1个外显子和HIV-1C亚型tat基因的第2个外显子融合在一起,将密码子替换为大肠杆菌的优势密码子,通过合成引物、PCR拼接的方法,获得目的基因序列;在原核系统中与pET32a+载体中的His·Tag、Trx·Tag及S·Tag进行融合表达;目的蛋白经Ni+金属螯合层析柱纯化后,用于免疫家兔,制备多克隆抗体。结果:PCR拼接获得306bp的目的基因序列;在原核系统中融合表达得到相对分子质量约31000的融合蛋白,占菌体总蛋白的21%。纯化后的融合蛋白免疫家兔,制备了多克隆抗体,Western印迹结果显示,获得的多克隆抗体与HIV-1B'/C亚型的Tat蛋白反应良好;间接免疫荧光结果表明,获得的多克隆抗体与HIV-1B'/C亚型和C亚型的Tat蛋白都能产生特异性反应。结论:制备的多克隆抗体能够使用间接免疫荧光方法检测HIV-1C亚型的Tat蛋白,使用Western印迹方法和间接免疫荧光方法都能检测HIV-1B'/C亚型的Tat蛋白。 展开更多
关键词 HIV-1 tat基因 tat蛋白 原核表达 多克隆抗体
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人免疫缺陷病毒1型TAT突变蛋白及反义TAT RNA对TAT反式激活作用的抑制 被引量：2
16
作者 白龙川 袁建刚 强伯勤 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期6-12,共7页
Ｔａｔ（Ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｏｒ）是人免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）基因组编码的反式激活因子，突变分析表明它含有几个重要的功能域。为寻找控制ＨＩＶ复制的途径，构建了以ＨＩＶ－１ＬＴＲ（－１５８－＋８０）为启动子的Ｔａｔｃ... Ｔａｔ（Ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｏｒ）是人免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）基因组编码的反式激活因子，突变分析表明它含有几个重要的功能域。为寻找控制ＨＩＶ复制的途径，构建了以ＨＩＶ－１ＬＴＲ（－１５８－＋８０）为启动子的ＴａｔｃＤＮＡ全长反义表达质粒ｐＡＳ－Ｔａｔ，并用已经构建的以ＨＩＶＬＴＲ－１５８到＋８０为启动子，具有不同突变点的突变Ｔａｔ基因表达质粒，以荧光酶基因为报告基因，共转染Ｊｕｒｋａｔ细胞，结果发现无论是反义Ｔａｔ表达质粒还是突变Ｔａｔ表达质粒，在瞬时转染体系中均能不同程度地抑制Ｔａｔ的活性，其中以ｐＭ５（５２位Ａｒｇ由Ｌｅｕ替代）和反义ＴａｔＲＮＡ的抑制效果最好。结果说明。 展开更多
关键词 艾滋病毒I型 反义tat RNA 突变tat蛋白
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东华大学与TATA品牌共创:“苗绘”艺术的跨界融合
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《工业设计》 2024年第9期16-16,共1页
苗绣是贵州苗族非物质文化遗产,苗银图案及其精湛技艺底蕴深厚。东华大学携手TATA品牌,推出了一系列龙年主题鞋款,让传统图腾与现代时尚完美交融。这一系列首发的“万物有灵”系列,涵盖了板鞋与乐福鞋两大品类,以丰富的“龙”元素为核心... 苗绣是贵州苗族非物质文化遗产,苗银图案及其精湛技艺底蕴深厚。东华大学携手TATA品牌,推出了一系列龙年主题鞋款,让传统图腾与现代时尚完美交融。这一系列首发的“万物有灵”系列,涵盖了板鞋与乐福鞋两大品类,以丰富的“龙”元素为核心,展现了深厚的文化底蕴与时尚创新的和谐共生。 展开更多
关键词 跨界融合 现代时尚 非物质文化遗产 万物有灵 贵州苗族 和谐共生 tat
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穿膜肽TAT修饰的自噬诱导肽Beclin 1抗肿瘤的初步研究 被引量：1
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作者 余倩雯 胡关莲 +2 位作者 王蛘 高会乐 何勤 《华西药学杂志》 CAS CSCD 2017年第2期163-166,共4页
目的研究自噬诱导肽Beclin 1及其经穿膜肽TAT修饰后所得TAT-Beclin 1对乳腺癌的体外自噬诱导作用及体内外疗效。方法采用透射电子显微镜、eGFP-LC3细胞转染技术和蛋白免疫印迹法综合对比评价Beclin 1和TAT-Beclin 1对4T1细胞自噬流的影... 目的研究自噬诱导肽Beclin 1及其经穿膜肽TAT修饰后所得TAT-Beclin 1对乳腺癌的体外自噬诱导作用及体内外疗效。方法采用透射电子显微镜、eGFP-LC3细胞转染技术和蛋白免疫印迹法综合对比评价Beclin 1和TAT-Beclin 1对4T1细胞自噬流的影响,通过体外细胞毒性和体内抑瘤实验评价其抗肿瘤疗效。结果 TAT-Beclin 1能显著提高Beclin 1在4T1细胞上的自噬诱导能力;TAT-Beclin 1在体内具有一定的抗4T1肿瘤能力。结论 TAT-Beclin 1较Beclin 1能更有效地诱导自噬并发挥治疗乳腺癌的效果。 展开更多
关键词 tat-Beclin 1 tat 自噬诱导肽 穿膜肽 自噬流 4T1细胞 凋亡 乳腺癌
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河南HIV感染者的HIV-1 B型株tat基因的克隆及序列分析
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作者 孙薏 徐勤枝 +4 位作者 李敬云 隋建丽 李韩平 吴松峰 周平坤 《生物技术通讯》 CAS 2005年第3期245-248,共4页
克隆河南人免疫缺陷病毒(HIV)感染者HIV-1B型株tat基因完整编码框序列,并分析比较其编码产物的序列结构特点。使用重叠PCR技术,从河南省1名HIV-1感染者外周血标本中扩增出tat基因第一和第二外显子并重组为完整的tat基因序列。获得的HIV... 克隆河南人免疫缺陷病毒(HIV)感染者HIV-1B型株tat基因完整编码框序列,并分析比较其编码产物的序列结构特点。使用重叠PCR技术,从河南省1名HIV-1感染者外周血标本中扩增出tat基因第一和第二外显子并重组为完整的tat基因序列。获得的HIV-1B病毒株tat基因,第一外显子为263bp,第二外显子为214bp。将该基因编码产物与其他HIV-1株Tat蛋白经DNA软件编辑并翻译成蛋白质,使用ClustalX1.81进行多序列对比分析发现,第一外显子编码产物的3个保守区域的氨基酸组成大致相同,只有少数氨基酸存在差异。由于Tat蛋白不同病毒株间有高度保守的Cys富集区、核心区和碱性氨基酸富集区,tat基因的克隆为研究其功能并以其为靶点设计和筛选抗艾滋病的药物奠定了基础。 展开更多
关键词 HIV-1 tat 序列分析 克隆 感染 B型 人免疫缺陷病毒 第二外显子 tat蛋白 PCR技术 氨基酸组成 碱性氨基酸 结构特点 分析比较 基因序列 软件编辑 基因编码 对比分析 病毒株 富集区 产物 外周血 河南省 蛋白质 DNA 保守区
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Tat介导外源蛋白引入活细胞
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作者 陈亚兵 温龙平 《国外医学（免疫学分册）》 北大核心 1996年第5期243-247,共5页
本文在介绍外源大分子引入细胞的方法及ＨＩＶ－１反式激活因子Ｔａｔ蛋白的结构基础上概述了Ｔａｔ蛋白介导的外源蛋白进入活细胞的方法，并进一步地对其作用机制进行了探讨，认为Ｔａｔ介导的外源大分子引入细胞系统在研究细胞生命活... 本文在介绍外源大分子引入细胞的方法及ＨＩＶ－１反式激活因子Ｔａｔ蛋白的结构基础上概述了Ｔａｔ蛋白介导的外源蛋白进入活细胞的方法，并进一步地对其作用机制进行了探讨，认为Ｔａｔ介导的外源大分子引入细胞系统在研究细胞生命活动及临床医学上有重要的意义。 展开更多
关键词 tat蛋白 介导 tat嵌合体 运送
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