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舞花姜实时荧光定量PCR内参基因筛选
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作者 黄李珊 陈佩洵 +6 位作者 谭健俊 陈佳杨 钟敬桦 周熠玮 徐晔春 盛爱武 叶远俊 《广东农业科学》 2025年第9期29-40,共12页
【目的】筛选适用于不同品种舞花姜苞片及舞花姜‘白龙’不同部位研究试验的稳定内参基因,为后续舞花姜目的基因表达分析研究提供理论依据。【方法】从前期获得的不同品种舞花姜苞片转录组序列,根据相对表达量稳定性挑选苹果酸脱氢酶(M... 【目的】筛选适用于不同品种舞花姜苞片及舞花姜‘白龙’不同部位研究试验的稳定内参基因,为后续舞花姜目的基因表达分析研究提供理论依据。【方法】从前期获得的不同品种舞花姜苞片转录组序列,根据相对表达量稳定性挑选苹果酸脱氢酶(MDH)、肌动蛋白(Actin12)、转录延伸因子(EF1α2)、转录辅助蛋白(TAP46)、微管蛋白β(TUB7)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)的编码基因和18S核糖体RNA(18S rRNA)基因作为候选内参基因。利用9个不同颜色舞花姜品种的苞片和舞花姜‘白龙’的根、叶片、侧芽、苞片和小花5个部位样品作为材料,分别对7个候选内参基因进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR),通过BestKeeper、NormFinder和geNorm软件分析评估其作为不同品种舞花姜苞片组织和舞花姜‘白龙’不同部位组织内参基因的表达稳定性。【结果】7个候选内参基因的PCR产物经凝胶电泳检测显示条带单一清晰,与理论预测片段大小相符,熔解曲线为单一主峰,扩增效率介于92.91%~102.33%,线性相关系数r>0.990,表明引物特异性良好,适用于qRT-PCR试验。在不同品种舞花姜苞片中,Actin12在BestKeeper、NormFinder和geNorm软件程序评估中均排名第一。在舞花姜‘白龙’不同部位中,TAP46在BestKeeper和NormFinder软件的稳定性评估中排名第一,而在geNorm软件程序评估排名第四。【结论】综合3种软件分析结果表明,Actin12为不同品种舞花姜苞片qRT-PCR试验中最稳定的内参基因,TAP46为舞花姜‘白龙’不同部位qRT-PCR试验中最稳定的内参基因。 展开更多
关键词 实时荧光定量PCR 舞花姜 内参基因 Actin12 tap46 苞片 基因表达量
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