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靶向REST基因TALEN质粒的快速构建与活性检测 被引量：1
1
作者 张殿宝 赵峰 +4 位作者 张涛 林学文 王瑞 施萍 庞希宁 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期883-886,890,共5页
目的针对人REST基因设计并构建特异性类转录激活因子效应物核酸酶(TALEN)质粒,快速获得具有较高突变效率的TALEN。方法根据REST的序列信息设计TALEN靶位,使用单元组装的方法快速构建TALEN质粒,在293T细胞中进行活性检测并计算突变效率... 目的针对人REST基因设计并构建特异性类转录激活因子效应物核酸酶(TALEN)质粒,快速获得具有较高突变效率的TALEN。方法根据REST的序列信息设计TALEN靶位,使用单元组装的方法快速构建TALEN质粒,在293T细胞中进行活性检测并计算突变效率。结果针对REST设计并成功构建5个TALEN质粒,组成6对TALEN并实现基因打靶,其中L1和R3组合的突变效率达到60.9%。结论成功获得了靶向人REST基因的高效TALEN,为进一步研究REST的基因功能及其在相关疾病中的作用奠定基础。 展开更多
关键词 REST 类转录激活因子效应物核酸酶 质粒构建 活性检测
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TALEN表达载体构建技术研究进展 被引量：1
2
作者 杨潇 《西华大学学报（自然科学版）》 CAS 2014年第4期58-64,共7页
转录激活因子样效应蛋白核酸酶(TALEN)是最新出现的基因组定点修饰技术之一。该技术在应用过程中为保证靶点序列的特异性,编码转录激活因子样效应物(TALE)结构域的序列一般较长,这使得TALEN表达载体的构建成为该技术的一个关键步骤和应... 转录激活因子样效应蛋白核酸酶(TALEN)是最新出现的基因组定点修饰技术之一。该技术在应用过程中为保证靶点序列的特异性,编码转录激活因子样效应物(TALE)结构域的序列一般较长,这使得TALEN表达载体的构建成为该技术的一个关键步骤和应用中的主要瓶颈,为此发展了多种TALEN表达载体构建方法。本文主要对其中常见的Golden Gate法、REAL法、单元组装法、FLASH法、ICA法、LIC法等方法及其研究进展进行了总结。随着TALEN表达载体构建方法的进一步丰富和普及,该技术必将在生物基因功能研究、农作物和家畜性状改良、人类遗传疾病治疗方面展现出广阔的应用前景。 展开更多
关键词 转录激活因子样效应蛋白核酸酶 talen表达载体 构建技术
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水稻叶绿体TALEN载体的构建及在大肠杆菌中的表达
3
作者 方真 李丁 +2 位作者 沈春修 夏玉梅 曹孟良 《杂交水稻》 CSCD 北大核心 2015年第2期63-68,共6页
将类转录激活因子效应物核酸酶(Transcription activator-like effector nuclease,TALEN)打靶技术运用到水稻叶绿体转化体系中,有可能提高外源基因在水稻叶绿体基因组中的整合效率。根据叶绿体表达载体上的同源重组序列,构建了水稻叶绿... 将类转录激活因子效应物核酸酶(Transcription activator-like effector nuclease,TALEN)打靶技术运用到水稻叶绿体转化体系中,有可能提高外源基因在水稻叶绿体基因组中的整合效率。根据叶绿体表达载体上的同源重组序列,构建了水稻叶绿体TALEN载体,经分子检测和DNA测序分析证明载体构建成功;将该载体转化大肠杆菌,载体上携带的EGFP、hpt和Fok基因在大肠杆菌中得到成功表达,说明构建的水稻叶绿体TALEN载体能够在原核系统中有效表达。 展开更多
关键词 talen载体 水稻叶绿体 表达
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使用TALENs技术构建丁酰胆碱酯酶敲除小鼠模型研究
4
作者 胡婷婷 赵海山 +1 位作者 张昊 谭文 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第10期36-38,45,288-290,共7页
为了使用转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)技术构建丁酰胆碱酯酶(BChE)敲除小鼠模型,试验设计多对TALENs组合,合成相应的载体,并通过3T3细胞系对这些载体的活性进行检测,选择出活性最高的组合进行体外转录获得TALENs mRNA,并注射入... 为了使用转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)技术构建丁酰胆碱酯酶(BChE)敲除小鼠模型,试验设计多对TALENs组合,合成相应的载体,并通过3T3细胞系对这些载体的活性进行检测,选择出活性最高的组合进行体外转录获得TALENs mRNA,并注射入小鼠受精卵中,对子代小鼠进行基因测序并筛选,最终获得BChE基因敲除小鼠。结果表明:针对4个基因位点设计并构建了30对TALENs组合,选择最优3L3-3R1组合进行体外转录并注射入小鼠受精卵,获得4只携带突变的F0代嵌合体小鼠;通过杂交及筛选,最终获得4只携带移码突变的F1代小鼠,可用于交配繁殖。说明通过TALENs技术可以稳定可靠地制备BChE基因敲除小鼠,并用于后续BChE功能的研究。 展开更多
关键词 丁酰胆碱酯酶(BChE) 转录激活因子样效应物核酸酶(talens) 载体构建 小鼠 基因敲 除 纯合子
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mitoTALENs植物线粒体基因编辑载体的构建方法 被引量：1
5
作者 周家伟 武志强 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期172-180,共9页
【目的】mitoTALENs植物线粒体基因编辑技术能够高效地实现线粒体基因的敲除,进而有效实现线粒体基因功能的研究,但mitoTALENs载体构建过程非常的繁琐复杂且目前仍没有较为系统完整的载体构建方法作为参考。为解决这个问题,结合前人已... 【目的】mitoTALENs植物线粒体基因编辑技术能够高效地实现线粒体基因的敲除,进而有效实现线粒体基因功能的研究,但mitoTALENs载体构建过程非常的繁琐复杂且目前仍没有较为系统完整的载体构建方法作为参考。为解决这个问题,结合前人已发表的及本实验室摸索出的方法对mitoTALENs载体构建的完整过程进行了详尽描述,为之后利用mitoTALENs技术进行植物线粒体基因功能研究的研究者们提供重要参考。【方法】以水稻线粒体WA352基因作为目的基因,利用其序列特异性区域设计了靶点TAL,首先采用Platinum gate TALEN assembly的两步组装技术分别构建了mitoTALENs的TALEN-left和TALEN-right载体,然后利用multisite LR反应将TALEN-left、TALEN-right及含有其他功能元件的进入载体和目的载体进行反应,生成最终的表达载体。【结果】第一步组装构建10个载体,第二步组装构建2个载体,最后通过multisite LR反应构建1个终表达载体。【结论】详细介绍了mitoTALENs载体的构建过程,为该技术使用者提供重要参考,以促进植物线粒体基因编辑研究领域的发展。 展开更多
关键词 线粒体基因编辑 mitotalens载体 Platinum gate talen assembly multisite LR
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