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草鱼TAB2与TAK1蛋白互作鉴定及其对两种抗菌肽基因表达的影响
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作者 杨文飞 郭佳静 +1 位作者 赵文平 李槿年 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期131-140,共10页
为了探究草鱼TAB2(Ci TAB2)与Ci TAK1能否互作及其对2种草鱼抗菌肽基因(Cihepcidin与Ciβ-defensin1)表达的影响,实验首先采用实时荧光定量PCR(qPCR)方法分析拟态弧菌感染后Citab2和Citak1在草鱼免疫相关组织中的时空表达模式。然后利... 为了探究草鱼TAB2(Ci TAB2)与Ci TAK1能否互作及其对2种草鱼抗菌肽基因(Cihepcidin与Ciβ-defensin1)表达的影响,实验首先采用实时荧光定量PCR(qPCR)方法分析拟态弧菌感染后Citab2和Citak1在草鱼免疫相关组织中的时空表达模式。然后利用荧光共定位、免疫共沉淀及Western blot技术鉴定Ci TAB2与Ci TAK1在细胞内共定位及相互作用情况。最后将过表达质粒pEGFP-N1-Citak1与pEGFP-N1-Citab2共同转染草鱼肾细胞(CIK细胞),检测Cihepcidin与Ciβ-defensin1的相对mRNA表达水平。结果显示,拟态弧菌感染能够显著改变Citab2和Citak1的相对表达水平,前者于感染后不同时间在各检测组织中表现出不同的时空表达模式,而后者均呈现先上调后下调的表达模式;荧光显微镜下观察到Ci TAB2与Ci TAK1共定位于转染后的HEK293T和CIK细胞的胞质中,且在HEK293T细胞内能够形成Ci TAB2-Ci TAK1蛋白复合物;共同过表达Ci TAB2与Ci TAK1后,CIK细胞内Cihepcidin与Ciβ-defensin1的相对mRNA表达水平在各检测时间点均显著上调。结果表明,Ci TAB2与Ci TAK1存在互作关系且二者互作能够促进上述两种抗菌肽的转录表达。本研究从蛋白互作调控抗菌肽表达的角度为防治鱼类弧菌病提供了新策略。 展开更多
关键词 草鱼 转化生长因子-β激活激酶1(TAK1) TAK1结合蛋白2(TAB2) 蛋白互作 抗菌肽基因表达
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光照与温度对拟南芥tak基因表达与LHC磷酸化的影响 被引量:6
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作者 蒋佳宏 王东 +2 位作者 胡源 高秀 杜林方 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第9期1202-1207,共6页
TAK1和TAK2是拟南芥核基因编码的蛋白激酶,TAK1可能参与植物状态转换中LHCⅡ蛋白磷酸化的调控.根据TAK1蛋白序列,合成了一段含12个氨基酸残基的亲水短肽,与牛血清白蛋白(BSA)偶联并免疫家兔得到TAK1抗体.经免疫双扩散和蛋白质印迹检测,... TAK1和TAK2是拟南芥核基因编码的蛋白激酶,TAK1可能参与植物状态转换中LHCⅡ蛋白磷酸化的调控.根据TAK1蛋白序列,合成了一段含12个氨基酸残基的亲水短肽,与牛血清白蛋白(BSA)偶联并免疫家兔得到TAK1抗体.经免疫双扩散和蛋白质印迹检测,该多肽抗体效价和特异性较高.借助TAK1抗体以及磷酸化抗体进行杂交试验,结合特异引物进行半定量PCR,研究了光照与温度对拟南芥tak1和tak2基因表达的影响.结果表明,光强与温度调节LHCⅡ蛋白磷酸化,也会在转录水平和蛋白质水平上影响tak1和tak2基因表达.LHCⅡ蛋白磷酸化对光响应趋势与TAK1蛋白水平变化相同.此外,低光照促进tak2基因表达,tak2基因转录表达受温度的影响较小.tak1和tak2基因表达调控方式不同,可能与启动子响应元件的不同相关. 展开更多
关键词 TAK1 tak2 LHC Ⅱ磷酸化 合成多肽 基因表达 光照与温度影响
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IL-6/JAK2/STAT3对口腔鳞状细胞癌生物学行为的影响 被引量:2
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作者 仝向娟 周晓 +2 位作者 钟慧 彭子文 单振锋 《中国耳鼻咽喉颅底外科杂志》 CAS 2022年第1期89-97,共9页
目的观察白细胞介素6抗体(IL-6)/蛋白酪氨酸激酶2抗体(JAK2)/信号传导和转录激活因子3抗体(STAT3)对口腔鳞状细胞癌(简称口腔鳞癌)细胞生物学行为的影响。方法对口腔鳞癌细胞系进行慢病毒转染敲低IL-6基因,设立两组对照,一组为未干预组... 目的观察白细胞介素6抗体(IL-6)/蛋白酪氨酸激酶2抗体(JAK2)/信号传导和转录激活因子3抗体(STAT3)对口腔鳞状细胞癌(简称口腔鳞癌)细胞生物学行为的影响。方法对口腔鳞癌细胞系进行慢病毒转染敲低IL-6基因,设立两组对照,一组为未干预组,另一组为空白载体组。通过CCK8实验和克隆形成实验检测IL-6对口腔鳞癌细胞增殖情况的影响,通过流式细胞术检测细胞周期变化,通过Transwell实验检测IL-6对口腔鳞癌细胞侵袭和迁移能力的影响。利用实时荧光定量PCR以及Western blot方法检测口腔鳞癌细胞中IL-6基因表达下调后其下游通路基因p-STAT3、p-JAK2与肿瘤血管新生有关的蛋白VEGFA、细胞周期调控蛋白Cyclin B1、细胞基质沉积相关蛋白MMP2、细胞凋亡抑制蛋白Survivin、上皮向间质转化相关蛋白Snail和E-Cadherin的表达情况。结果敲低IL-6的口腔鳞癌细胞与对照组细胞比较,增殖率受到明显抑制,差异具有统计学意义(F=13.06,P=0.006);敲低IL-6的口腔鳞癌细胞中G1期细胞百分比下降,G2期细胞百分比上升,差异具有统计学意义(F=5.53,P<0.05);敲低IL-6的口腔鳞癌细胞与对照细胞比较,侵袭能力和迁移能力明显下降,差异具有统计学意义(F=23.59/53.11,P<0.01);口腔鳞癌细胞IL-6表达下调后,JAK2、STAT3、VEGFA、Cyclin B1、MMP2、Snail表达随之明显下降,而E-Cadherin表达显著增加,差异具有统计学意义(P均<0.05)。结论IL-6基因敲低后可明显抑制口腔鳞癌细胞的生长与增殖能力,可能诱导细胞G2期阻滞;抑制STAT3、JAK2、VEGFA、Cyclin B1、MMP2、Snail和Survivin表达,促进E-Cadherin蛋白表达。 展开更多
关键词 口腔鳞状细胞癌 白细胞介素6 蛋白酪氨酸激酶2 信号传导和转录激活因子3 细胞增殖
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干扰TAK1通过下调TAB2/3来抑制肺成纤维细胞的增殖、侵袭、迁移和纤维化
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作者 章艳菊 周小娣 夏云飞 《临床肺科杂志》 2023年第10期1523-1530,共8页
目的探讨转化生长因子β激活激酶1(TAK1)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞(HFL-1)的增殖、侵袭、迁移和纤维化的影响及其与TAK1结合蛋白(TAB)2/3的关系。方法将细胞分组分为Control组(未处理HFL-1)、TGF-β1组(10ng/mL... 目的探讨转化生长因子β激活激酶1(TAK1)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞(HFL-1)的增殖、侵袭、迁移和纤维化的影响及其与TAK1结合蛋白(TAB)2/3的关系。方法将细胞分组分为Control组(未处理HFL-1)、TGF-β1组(10ng/mL TGF-β1诱导HFL-1)、TGF-β1+si-NC组(转染si-NC+TGF-β1诱导)、TGF-β1+si-TAK1组(转染si-TAK1+TGF-β1诱导)、TGF-β1+si-TAK1+pcDNA3.1组(转染si-TAK1+pcDNA3.1+TGF-β1诱导)、TGF-β1+si-TAK1+pcDNA3.1-TAB2组(转染si-TAK1+pcDNA3.1-TAB2+TGF-β1诱导)、TGF-β1+si-TAK1+pcDNA3.1-TAB3组(转染si-TAK1+pcDNA3.1-TAB3+TGF-β1诱导)。采用Western Blot和RT-qPCR检测TAK1和TAB2/3的表达。CCK-8检测细胞增殖。Transwell和细胞划痕实验检测细胞的侵袭和迁移能力。Western Blot检测迁移和纤维化相关蛋白的表达。免疫共沉淀验证TAK1和TAB2/3之间的关联。结果与Control组比,TGF-β1诱导后TAK1及TAB2/3表达升高(P均<0.05)。TGF-β1+si-TAK1组与TGF-β1+si-NC组相比其增殖、侵袭、迁移能力明显下降,迁移及纤维化相关蛋白表达明显下降(P均<0.05)。TGF-β1+si-TAK1+pcDNA3.1-TAB2/3组与TGF-β1+si-TAK1+pcDNA3.1组比增殖、侵袭、迁移能力上升,迁移及纤维化相关蛋白表达上升(P<0.05)。结论干扰TAK1通过下调TAB2/3来抑制TGF-β1诱导的肺成纤维细胞的增殖、侵袭、迁移和纤维化。 展开更多
关键词 转化生长因子β激活激酶1 TAK1结合蛋白2/3 肺纤维化 侵袭 迁移
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