期刊文献+
共找到442篇文章
< 1 2 23 >
每页显示 20 50 100
苹果炭疽叶枯病拮抗菌株T4、T7发酵条件的研究
1
作者 于占晶 侯晓杰 梁魁景 《河北果树》 2025年第1期11-13,共3页
采用单因素法对拮抗菌株T4、T7的发酵培养基和摇瓶培养的发酵条件进行测定,结果表明:T4的最适培养基为YSP液体培养基,OD值为1.829,且与LB、NB存在显著性差异;最佳培养条件接种量为0.5%时,OD值为1.834,但与接种量1.5%和2.5%无显著性差异;... 采用单因素法对拮抗菌株T4、T7的发酵培养基和摇瓶培养的发酵条件进行测定,结果表明:T4的最适培养基为YSP液体培养基,OD值为1.829,且与LB、NB存在显著性差异;最佳培养条件接种量为0.5%时,OD值为1.834,但与接种量1.5%和2.5%无显著性差异;p H值为6.0,OD值为1.849,且与pH值为8.0、10.0存在显著性差异;摇瓶培养温度为24℃,OD值为1.847,且与28、32℃存在显著性差异。T7的最适培养液为LB,OD值为1.615,且与YSP、NB存在显著性差异;最佳培养条件为1.5%的接种量,OD值为1.668,但与接种量为0.5%、2.5%无显著性差异;p H值为6.0,OD值为1.703,且与pH值为8.0、10.0存在显著性差异;摇瓶培养温度为32℃,OD值为1.762,且与24℃和28℃存在显著性差异。 展开更多
关键词 拮抗细菌 T4 t7 生物防治 发酵条件研究
在线阅读 下载PDF
T7噬菌体培养及纯化工艺研究
2
作者 李玲 祝博森 +5 位作者 朱婷 钟睿 孙田野 林晗 洪伟鸣 徐海 《安徽农业科学》 2025年第20期88-91,共4页
为降本增效,制备高品质T7噬菌体,分别开展培养及纯化工艺研究。绘制BL21大肠杆菌在3种培养基中的生长曲线,优化T7噬菌体最佳接种时间以及最佳接种MOI。大量扩增T7噬菌体,通过超滤浓缩和PEG沉淀纯化噬菌体颗粒,再经Triton X-114变温萃取... 为降本增效,制备高品质T7噬菌体,分别开展培养及纯化工艺研究。绘制BL21大肠杆菌在3种培养基中的生长曲线,优化T7噬菌体最佳接种时间以及最佳接种MOI。大量扩增T7噬菌体,通过超滤浓缩和PEG沉淀纯化噬菌体颗粒,再经Triton X-114变温萃取去除内毒素。结果显示,BL21在转接培养后2.5 h开始进入对数生长期,在对数后期以MOI=10-4接种T7噬菌体,子代噬菌体产量可达到6.47×10^(10)PFU/mL。通过超滤浓缩可以有效浓缩T7噬菌体颗粒,同时去除约90%的内毒素,PEG沉淀可从浓缩液中回收约90%的噬菌体颗粒,且有效去除大部分宿主蛋白,但不能完全去除内毒。经3次Triton X-114变温萃取,最终收获的T7噬菌体产物中内毒素含量降至55 UE/mL。研究结果表明,通过优化T7噬菌体的培养条件可以实现高效扩增,联合使用超滤、PEG沉淀和Triton X-114萃取等工艺能够制备高纯度T7噬菌体颗粒。 展开更多
关键词 t7噬菌体 培养工艺 纯化工艺 内毒素
在线阅读 下载PDF
T7 RNA聚合酶转录起始过程中嘌呤核苷酸结合机制
3
作者 谢昀 岳慧慧 +1 位作者 安然 梁兴国 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第8期166-174,共9页
转录起始是生物转录过程中的关键和限速步骤。为了探究转录起始过程中三磷酸核苷酸(NTP)嘌呤依赖性的具体机制,本文通过改变转录模板上起始序列+1和+2位的碱基(共16种碱基组合),研究T7 RNA聚合酶(T7 RNAP)对起始序列的偏好性,并通过将... 转录起始是生物转录过程中的关键和限速步骤。为了探究转录起始过程中三磷酸核苷酸(NTP)嘌呤依赖性的具体机制,本文通过改变转录模板上起始序列+1和+2位的碱基(共16种碱基组合),研究T7 RNA聚合酶(T7 RNAP)对起始序列的偏好性,并通过将产物的5′端与另一已知序列RNA的3′端连接以明确起始序列。研究发现,T7 RNAP在转录起始时对+1位有嘌呤依赖性,且对鸟嘌呤(G)的依赖性大于腺嘌呤(A);对于+1位由A起始的产物,其+2位必须为G才能被成功制备。目标产物+1位为非嘌呤时,无法从此位转录,但在这种情况下,若+2位为G,可从+2位起始转录,即产生长度缺失1个核苷酸的RNA产物,这可能是T7 RNAP通过弯折模板链进行的。研究还发现,T7 RNAP也可以通过结合嘌呤单核苷酸(如GMP)起始转录。综上所述,本文阐释了转录起始的机制:T7 RNAP先结合两个游离的核苷酸单体,当模板与其完全配对(同模板结合)时才催化形成第一个磷酸二酯键,且要求起始结合位是G或A。本研究阐明的转录起始新机制对深入研究遗传信息的表达具有重要指导意义。 展开更多
关键词 t7 RNA聚合酶 转录 启动子 序列偏好性 转录起始机制 核苷酸
在线阅读 下载PDF
多基因敲除联合T7表达系统构建高产L-苹果酸底盘菌株
4
作者 王瑶 王钊 +2 位作者 代真真 倪子富 王乐 《微生物学通报》 北大核心 2025年第10期4542-4557,共16页
【背景】L-苹果酸在生物医药、食品化工等领域应用广泛,但野生型大肠杆菌(Escherichia coli)苹果酸积累量低,同时T7表达系统具有严格控制和高水平诱导表达能力,但其应用受限于表达菌株是否存在T7 RNA聚合酶。【目的】构建可利用T7表达... 【背景】L-苹果酸在生物医药、食品化工等领域应用广泛,但野生型大肠杆菌(Escherichia coli)苹果酸积累量低,同时T7表达系统具有严格控制和高水平诱导表达能力,但其应用受限于表达菌株是否存在T7 RNA聚合酶。【目的】构建可利用T7表达系统的高产L-苹果酸底盘菌株。【方法】首先对E.coli MG1655进行苹果酸消耗途径多基因敲除,其次将T7 RNA聚合酶基因表达框引入E.coli MG1655染色体中,成功构建出高产L-苹果酸底盘菌株MG1655W(DE3)。【结果】该底盘菌株表达报告基因,荧光强度与E.coli BL21(DE3)相比,提高至114.0%。其L-苹果酸积累量为原始菌株的12.9倍,进一步利用T7表达系统过表达苹果酸脱氢酶,可将L-苹果酸产量提高至原始菌株的26.7倍。【结论】本研究成功构建可利用T7表达系统的高产L-苹果酸底盘菌株MG1655W(DE3),该菌株在生产苹果酸等代谢产物中表现较高的应用价值,为构建优良的苹果酸生产底盘菌株提供了新策略。 展开更多
关键词 基因敲除 t7表达系统 L-苹果酸 底盘菌株
原文传递
大肠杆菌Nissle 1917类T7表达系统的构建及应用
5
作者 郑烨 邓睿哲 +3 位作者 杨富荏 林艺娜 王辉 叶健文 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 北大核心 2025年第2期151-162,共12页
目的:在大肠杆菌Nissle 1917(Escherichia coli Nissle 1917,EcN)中构建类T7 RNA聚合酶的强诱导表达系统,实现目标蛋白的高效表达。方法:在EcN中构建不同诱导表达调控系统,并进行“剂量-响应”表征测试,筛选出低渗漏、高表达的诱导系统... 目的:在大肠杆菌Nissle 1917(Escherichia coli Nissle 1917,EcN)中构建类T7 RNA聚合酶的强诱导表达系统,实现目标蛋白的高效表达。方法:在EcN中构建不同诱导表达调控系统,并进行“剂量-响应”表征测试,筛选出低渗漏、高表达的诱导系统;通过构建基因组整合表达类T7 RNA聚合酶(T7-like RNA polymerase,MmP1)的菌株LM01,并测试其启动子突变文库,优化其表达强度及动态输出范围;利用MmP1诱导系统表达超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD),验证其蛋白表达能力。结果:在EcN中成功构建并表征了多个诱导系统,其中以MmP1为RNA聚合酶的类T7诱导表达系统的饱和诱导输出强度最优,最大动态调控范围高达909倍;将MmP1聚合酶表达模块整合至EcN基因组后,其饱和响应表达输出提高达66.8%;P MmP1启动子突变文库的构建提供了涵盖65~1097倍动态范围的宽范围可诱导表达可能性;MmP1系统在SOD蛋白可溶性表达测试中产量最高,达到435.7 mg/L,为香草酸诱导系统产量的4.02倍,且酶活性最高达到391.3 U/mL。结论:类T7(MmP1)诱导系统在EcN中可成功构建,并具有高饱和表达、低本底渗漏、动态范围可控等特性,有助于实现蛋白的高效表达合成。 展开更多
关键词 大肠杆菌Nissle 1917 诱导表达系统 t7表达系统 蛋白表达 合成生物学
在线阅读 下载PDF
重组T7噬菌体溶菌酶的纯化及其牙龈卟啉单胞菌溶菌活性研究
6
作者 李研研 田重庆 +5 位作者 郝雨杭 左嘉慧 张一鸣 陶星宇 李智涛 高社干 《食管疾病》 2025年第3期182-187,共6页
目的 通过基因工程方法获得大肠杆菌(Escherichia coli) T7双链DNA噬菌体溶菌酶(T7 doublestranded DNA bacteriophage lysozyme,T7-Lys),并验证该酶对大肠杆菌及牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)的抗菌活性。方法 根据Gen ... 目的 通过基因工程方法获得大肠杆菌(Escherichia coli) T7双链DNA噬菌体溶菌酶(T7 doublestranded DNA bacteriophage lysozyme,T7-Lys),并验证该酶对大肠杆菌及牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)的抗菌活性。方法 根据Gen Bank中的T7-Lys基因序列,并按大肠杆菌的密码子偏向进行优化,人工合成基因,构建p ET-28a(+)/(T7-Lys)原核表达质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中。优化IPTG诱导浓度和大肠杆菌培养温度,通过SDS-PAGE分析可溶性目的蛋白的表达,确定大肠杆菌的最佳培养和诱导条件,通过亲和层析纯化T7-Lys,并评估不同浓度的T7-Lys对大肠杆菌和Pg的溶菌效果。结果 经双酶切和测序鉴定,成功构建了p ET-28a(+)/T7-Lys重组表达质粒。通过Expasy软件的ProtParam工具预测,重组蛋白分子量约为19.15 k Da,亲水性总平均值为-0.565。最佳的IPTG诱导条件为0.5 mmol·L^(^(-1))的浓度和23℃的温度,最佳诱导时间为24 h。重组T7-Lys主要以可溶形式表达。实验室规模发酵,结果每升发酵液表达纯化后得到约79.26 mg的T7-Lys蛋白。T7-Lys对大肠杆菌具有溶菌作用,比活为29 081 U·mg^(-1),对Pg的溶菌作用更加明显,比活达到35 948 U·mg^(-1)。结论 成功构建p ET-28a(+)/T7-Lys重组蛋白表达质粒,并获得可溶性T7-Lys重组蛋白。T7-Lys对大肠杆菌和Pg等革兰氏阴性菌均具有显著的溶菌效果。 展开更多
关键词 牙龈卟啉单胞菌 大肠杆菌 重组t7溶菌酶 诱导表达 亲和层析
在线阅读 下载PDF
解析T7RNA聚合酶:从构效关系到dsRNA挑战与生物技术应用
7
作者 宁苇辰 华雨 +4 位作者 尤慧玲 李秋实 吴尧 刘云龙 胡振新 《生物化学与生物物理进展》 北大核心 2025年第9期2280-2294,共15页
T7RNA聚合酶(T7RNApolymerase,T7RNAP)凭借其独特的结构特性成为研究RNA合成机制的重要模型。本文系统解析了其标志性的“右手”结构框架,并通过整合结构的动态变化和动力学分析,阐述了完整的T7RNAP转录过程,构建了从静态结构解析到动... T7RNA聚合酶(T7RNApolymerase,T7RNAP)凭借其独特的结构特性成为研究RNA合成机制的重要模型。本文系统解析了其标志性的“右手”结构框架,并通过整合结构的动态变化和动力学分析,阐述了完整的T7RNAP转录过程,构建了从静态结构解析到动态过程的完整框架。T7RNAP在催化过程中会产生副产物双链RNA(dsRNA),其存在不仅会降低mRNA产物的纯度,还会引发自身非特异性免疫反应,从而限制T7RNAP在生物技术和医学领域的应用。文中详细探讨了dsRNA的形成机理,并对规避dsRNA产生的不同思路及当前研究进展进行了阐述。通过梳理近期研究成果,本文系统归纳了通过半理性设计改造的T7RNAP突变及突变效果,如活性和热稳定性的提升、底物和启动子特异性的改变、转录效率改善等,清晰展现该领域的技术突破路径。此外,T7RNAP在基因编辑及基因工程、检测诊断及信号转导、mRNA疫苗等领域得到快速发展和广泛应用。本文综述了T7RNAP的结构功能、dsRNA形成机理及规避策略,同时探讨了T7RNAP工程优化与功能拓展,并对目前亟待解决的问题进行了阐述,讨论了当前T7RNAP实际应用中的主要问题并对未来研究的可能方向进行了展望,旨在为T7RNAP的研发与应用提供新的见解,促进相关领域的思考与发展。 展开更多
关键词 t7RNA聚合酶 结构 功能 转录 动力学 DSRNA MRNA
原文传递
一种基于T7核酸内切酶I纠错的病毒基因组高效组装方法
8
作者 张绪伟 文斌 +4 位作者 王飞 王学军 刘丽艳 王淑美 王升启 《生物工程学报》 北大核心 2025年第1期385-396,共12页
基因合成技术是支撑合成生物学发展的使能技术。现有的基因从头合成技术存在操作步骤多、效率低、错误率高且长度有限等问题,难以支撑合成生物学日益拓展的庞大需求。其中DNA片段的组装和纠错是基因合成的关键环节。本研究首先通过平衡... 基因合成技术是支撑合成生物学发展的使能技术。现有的基因从头合成技术存在操作步骤多、效率低、错误率高且长度有限等问题,难以支撑合成生物学日益拓展的庞大需求。其中DNA片段的组装和纠错是基因合成的关键环节。本研究首先通过平衡序列设计软件能力、PCR扩增能力以及组装酶组装能力等参数,将约10 kb病毒基因组序列进行合理拆分后设计寡核苷酸序列;然后使用高保真聚合酶进行两步PCR反应,完成3.0 kb DNA片段的从头合成,并使用T7核酸内切酶I分别对不同阶段的PCR产物进行纠错反应;最后将从头合成并经过纠错的3.0 kb DNA片段进行约10 kb片段的组装并测序验证。结果表明,本方法可成功获得约10 kb DNA片段,有效降低组装过程中的大片段突变概率,组装错误率最低可至0.36 errors/kb。综上,本研究开发了一种高效从头合成约10 kb病毒基因组方法,辅以T7核酸内切酶I纠错,可1 d内获得约10 kb病毒基因组片段,5 d内获得病毒基因组的正确质粒。该方法优化了基因从头合成流程,降低了错误率,简化了合成与组装步骤,并进一步降低了病毒基因组组装成本。 展开更多
关键词 基因组装 从头合成 纠错 t7核酸内切酶I
原文传递
稳定表达T7 RNA聚合酶的草鱼鳍条和草鱼性腺细胞系的建立与鉴定 被引量:1
9
作者 康漪 张奇亚 柯飞 《微生物学通报》 CSCD 北大核心 2024年第12期5051-5062,共12页
【背景】T7噬菌体来源的T7 RNA聚合酶(T7 RNA polymerase,T7 RNAP)因其特异性高和高效启动转录的特点,在生物学研究中得到广泛应用。目前已有多株稳定表达T7 RNAP的细胞系被构建用于进行RNA病毒的反向遗传学研究。草鱼是中国淡水养殖产... 【背景】T7噬菌体来源的T7 RNA聚合酶(T7 RNA polymerase,T7 RNAP)因其特异性高和高效启动转录的特点,在生物学研究中得到广泛应用。目前已有多株稳定表达T7 RNAP的细胞系被构建用于进行RNA病毒的反向遗传学研究。草鱼是中国淡水养殖产量最高的鱼类,但其易受草鱼呼肠孤病毒(一种双链RNA病毒)的侵害。该病毒的反向遗传操作系统尚未建立,影响了对其的深入研究。稳定表达T7 RNAP的草鱼细胞系将有助于建立草鱼呼肠孤病毒的反向遗传操作系统。【目的】使用Tol2转座子系统构建稳定表达T7 RNAP的草鱼鳍条(grass carp fin,GCF)和草鱼性腺(grass carp ovary,GCO)细胞系,并鉴定其活性,以期为创建草鱼呼肠孤病毒的反向遗传操作系统提供细胞工具。【方法】利用PCR从大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)基因组中扩增出T7 RNAP基因,通过同源重组的方法使其插入Tol2转座子载体。同时也构建T7 RNAP的N端或C端连接核定位信号(nuclear localization signal,NLS)的重组Tol2转座质粒。将含有上述基因的重组转座质粒与表达Tol2酶的辅助质粒分别共转染2种草鱼细胞,使用潮霉素B进行筛选。对所筛选出的细胞进行蛋白免疫印迹(Western blotting,WB)检测。进一步使用由T7启动子驱动的EGFP报告质粒进行功能验证,并比较添加NLS对T7 RNAP表达和功能的影响。【结果】构建了携带T7 RNAP基因的3种Tol2转座重组质粒,转染2种细胞筛选后获得了相应的6株细胞系。WB结果显示筛选后的细胞中均有明显的T7 RNAP表达条带,表明T7 RNAP在细胞中成功表达。使用由T7启动子驱动的EGFP质粒对细胞进行转染,观察到EGFP在转染细胞中高效表达,实验结果表明这6株细胞中的T7 RNAP均有转录活性。另外,携带NLS序列的T7 RNAP在GCO细胞中显示出更高的表达及转录活性,尤其是在T7 RNAP C端添加NLS时效果最佳。但在GCF细胞中未观察到明显差异。【结论】通过使用Tol2转座子系统构建了稳定表达T7 RNAP的GCF和GCO细胞系,能驱动T7启动子控制的外源基因的高效转录和表达。NLS可以通过促进T7 RNAP向细胞核的转运来提高其在核内的积累和转录效率,但其效果可能因细胞的类型不同而有所区别。添加NLS可进一步增强其表达和转录活性。这些结果为T7 RNAP在草鱼呼肠孤病毒研究中的应用提供了基础。 展开更多
关键词 t7 RNA聚合酶 草鱼细胞系 稳定表达 转座子 核定位信号
原文传递
表达PCV2 ORF2的重组T7噬菌体在猪体内的存留分析
10
作者 杨柳 牟豪 +5 位作者 吕林丹 胡霞 许国洋 郑华 张邑帆 沈克飞 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第8期38-43,共6页
为了检测经颈部肌肉注射入猪体的、表达猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白(ORF2)的重组T7噬菌体(T7-ORF2)在体内的存留情况,本试验将PCV2抗原和抗体均为阴性的20日龄仔猪随机分为试验组和对照组,每组5只;试验组猪只以1.5mL/只剂量颈部肌肉注... 为了检测经颈部肌肉注射入猪体的、表达猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白(ORF2)的重组T7噬菌体(T7-ORF2)在体内的存留情况,本试验将PCV2抗原和抗体均为阴性的20日龄仔猪随机分为试验组和对照组,每组5只;试验组猪只以1.5mL/只剂量颈部肌肉注射增殖收获的T7-ORF2,对照组猪只以相同途径注射等体积的洗脱液;于注射前1 d、注射后10 h、1~7 d测量体温,观察猪只的临床症状和死亡情况;分别于注射后1 h、3 h、5 h、10 h、1 d、3 d、5 d和7 d采集猪只的血液和粪便样品,注射后10 h、1 d、3 d、5 d和7 d采集肝脏、脾脏和腹股沟淋巴结样品;将收集的各样品处理上清与宿主菌(大肠埃希菌BLT5403株)混合培养,通过细菌裂解分析T7-ORF2的感染性;以细菌裂解液提取的基因组DNA为模板进行PCR,检测ORF2基因;通过免疫组织化学检测T7-ORF2在肝脏、脾脏和腹股沟淋巴结中的分布和存留时间。结果显示,试验组猪只在试验期体温、采食、饮水和精神状态正常,无不良症状和死亡发生;注射后5 d能从血清和粪便中检测到感染性的T7-ORF2;注射后3 d能从肝脏、脾脏和腹股沟淋巴结中检测到感染性的T7-ORF2;从细菌裂解液中可扩增检测到PCV2 ORF2基因片段;免疫组织化学切片观察结果显示,T7-ORF2在机体中逐渐被清除,在脾脏中存留至少5 d,在肝脏和腹股沟淋巴结中存留至少7 d。结果表明,T7-ORF2可进入猪只的血液循环、肝脏、脾脏和腹股沟淋巴结中,并随粪便排出体外。本试验为利用T7-ORF2深入开发PCV2新型疫苗提供数据支撑。 展开更多
关键词 重组t7噬菌体 猪圆环病毒2型(PCV2) 肌肉注射 检测 疫苗
在线阅读 下载PDF
基于T7模型的应急团队建立及验证
11
作者 李用祥 《人民黄河》 北大核心 2024年第S2期27-28,共2页
近年来我国气候灾害呈现多样化、连续化等特点,人民生命财产安全与应急力量的发展紧密相连,急需建立“全灾种、大应急”的新应急力量体系。通过分析T7模型下影响团队效能的内外因,与当下应急救援力量进行有效结合,对应急团队构建模式进... 近年来我国气候灾害呈现多样化、连续化等特点,人民生命财产安全与应急力量的发展紧密相连,急需建立“全灾种、大应急”的新应急力量体系。通过分析T7模型下影响团队效能的内外因,与当下应急救援力量进行有效结合,对应急团队构建模式进行深入细致的考察,并结合中国安能集团在廊坊市安次区永定河大桥西溃口灾害救援的案例,进行实际对比、深入研究,验证T7应急团队的有效性、实用性、科学性。 展开更多
关键词 t7模型 应急救援 科学验证 安全保障
在线阅读 下载PDF
稳定表达T7RNA聚合酶IBRS-2细胞系的建立以及利用该细胞系对SVDV的体内拯救 被引量:7
12
作者 郑海学 田宏 +4 位作者 靳野 吴锦艳 尚佑军 刘湘涛 谢庆阁 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第4期449-456,共8页
利用PCR从!溶原性细菌DE3中扩增出T7RNA聚合酶基因,定向克隆进逆转录病毒载体pBABEpuro,得到阳性重组质粒pT7BABEpuro.把该重组质粒与pVSV-G共感染GP2-293包装细胞系,形成假型病毒.通过polybrene介导假型病毒感染IBRS-2细胞,利用嘌呤霉... 利用PCR从!溶原性细菌DE3中扩增出T7RNA聚合酶基因,定向克隆进逆转录病毒载体pBABEpuro,得到阳性重组质粒pT7BABEpuro.把该重组质粒与pVSV-G共感染GP2-293包装细胞系,形成假型病毒.通过polybrene介导假型病毒感染IBRS-2细胞,利用嘌呤霉素进行传代筛选,形成细胞系IBRST7.对不同代次的IBRST7细胞基因组进行PCR和RT-PCR鉴定,结果表明,T7RNA聚合酶基因在细胞传代过程中能稳定存在,并能表达目的蛋白的mRNA.为了鉴定T7RNA聚合酶在IBRST7细胞内是否具有转录活性,扩增口蹄疫病毒(FMDV)的内部核糖体进入位点(IRES)片段和EGFP基因,定向克隆于原核表达载体pET-43.1a-c(+)中,构建了T7启动子控制下转录的具有非帽依赖性表达的重组质粒pIERS-EGFP-ET,把该质粒转染IBRST7细胞,能够在紫外显微镜下观察到绿色荧光,说明EGFP得到了表达,表明IBRST7细胞系内的T7RNA聚合酶具有转录活性.然后,利用该细胞系成功拯救出具有感染性的猪水泡病病毒(SVDV),并对其生物学功能进行了鉴定.该细胞系的建立为利用T7RNA聚合酶转录系统体内高效拯救病毒提供了基础.该拯救病毒的策略使RNA拯救简化为一步快速的拯救方法,为进一步探索SVDV病毒致病的分子机制及研制新型SVD疫苗奠定了良好的基础. 展开更多
关键词 t7RNA聚合酶 IBRSt7细胞系 假型病毒 SVDV 病毒拯救 逆转录病毒载体 感染性克隆
在线阅读 下载PDF
99mTc标记T7肽及其在裸鼠非小细胞肺癌模型体内的生物分布研究 被引量:3
13
作者 郝玉美 贺欣 +4 位作者 周晓靓 孟爱民 刘鉴峰 刘金剑 宋娜玲 《中国肺癌杂志》 CAS 北大核心 2014年第3期189-196,共8页
背景与目的肺癌是一种死亡率极高的恶性肿瘤,针对肺癌的早期诊断和治疗有着重要的意义和价值,本研究旨在探讨羰基锝法标记的肿瘤抑素T7肽用作裸鼠肺癌早期显像剂的初步研究。方法采用羰基锝法标记T7肽,薄层色谱法检测99mTc-T7的放化纯... 背景与目的肺癌是一种死亡率极高的恶性肿瘤,针对肺癌的早期诊断和治疗有着重要的意义和价值,本研究旨在探讨羰基锝法标记的肿瘤抑素T7肽用作裸鼠肺癌早期显像剂的初步研究。方法采用羰基锝法标记T7肽,薄层色谱法检测99mTc-T7的放化纯度与稳定性,丙酮作展开系统。测定99mTc-T7与NCI-H157细胞的亲和力。研究99mTc-T7于0.5 h、1 h、2 h、4 h、8 h在荷人非小细胞肺腺癌裸鼠体内的生物分布特性,并计算肿瘤(T)与非肿瘤组织(NT)放射性比值。结果 99mTc对T7肽标记率高,放化纯度达90%以上,不需进一步纯化,体外稳定性好。99mTc-T7与NCI-H157细胞的平衡解离常数为196.1 nM。99mTc-T7在裸鼠体内主要通过内脏器官代谢,血液清除较快,在肿瘤部位有一定程度聚集,肿瘤/肌肉比值随时间延长而增加,可达到5以上,在4 h-8 h之间取值较为理想。99mTc-T7在肺内存在一过性聚集。结论 99mTc-T7制备方法简便,标记率高,稳定性好,并能在肺癌肿瘤部位聚集,有望用作肺癌SPECT/CT显像剂。 展开更多
关键词 99mTc-t7 肿瘤抑素t7 整合素ΑΝΒ3 肺癌显像 生物分布
暂未订购
稳定表达T7RNA聚合酶的细胞系的构建及鉴定 被引量:3
14
作者 母连志 孙玉章 +5 位作者 丛彦龙 李少丽 张晓东 王广美 王晓莉 丁壮 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期26-28,54,共4页
设计1对特异性引物扩增痘苗病毒VTF7-3株的T7RNA聚合酶基因并连接真核表达载体,利用Lipo-fectamineTM2000将重组质粒转染BHK-21细胞,G418筛选2周后,转入验证质粒pT7-HN,经Western-blot和间接免疫荧光鉴定后证实获得了1株能稳定表达T7RN... 设计1对特异性引物扩增痘苗病毒VTF7-3株的T7RNA聚合酶基因并连接真核表达载体,利用Lipo-fectamineTM2000将重组质粒转染BHK-21细胞,G418筛选2周后,转入验证质粒pT7-HN,经Western-blot和间接免疫荧光鉴定后证实获得了1株能稳定表达T7RNA聚合酶的VT7细胞系。构建的VT7细胞系传30代还能够稳定的表达T7RNA聚合酶,为下一步建立有效的鹅源副黏病毒病毒反向遗传操作平台奠定了基础。 展开更多
关键词 t7RNA聚合酶 克隆 Vt7细胞系 病毒拯救
原文传递
在哺乳类动物细胞中呈现不同表达水平的T7启动子表达系统构建
15
作者 周天鸿 李月琴 +1 位作者 姚冬生 莫雪华 《生物技术》 CAS CSCD 2000年第5期1-3,共3页
将携带有T7噬菌体RNA聚合酶基因的质粒和neo抗性基因质粒共转化CHO细胞 ,经狭缝RNA和Southernblot杂交实验证实获得表达T7噬菌体RNA聚合酶基因的细胞株。pT7CAT质粒转染未表达和表达的细胞株 ,实验显示两者都能表达报道基因 ,但效率不... 将携带有T7噬菌体RNA聚合酶基因的质粒和neo抗性基因质粒共转化CHO细胞 ,经狭缝RNA和Southernblot杂交实验证实获得表达T7噬菌体RNA聚合酶基因的细胞株。pT7CAT质粒转染未表达和表达的细胞株 ,实验显示两者都能表达报道基因 ,但效率不同。实验构建了不同表达水平的T7启动子表达系统。 展开更多
关键词 t7启动子 真核生物表达系统 t7 RNA聚合酶
在线阅读 下载PDF
原核表达系统T7RNA聚合酶/启动子在真核细胞中表达目的基因的实验研究 被引量:4
16
作者 袁志刚 张进平 +3 位作者 储以微 王缨 徐薇 熊思东 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期182-186,共5页
将目前高表达水平强大的原核表达系统之一T7RNA聚合酶 启动子表达系统通过一系列改进引入真核细胞。通过转染真核细胞实验表明 ,采用真核启动子CMV调控T7RNA聚合酶的表达和在T7启动子下游插入EMCVIRES序列两种解决方案能使该原核表达... 将目前高表达水平强大的原核表达系统之一T7RNA聚合酶 启动子表达系统通过一系列改进引入真核细胞。通过转染真核细胞实验表明 ,采用真核启动子CMV调控T7RNA聚合酶的表达和在T7启动子下游插入EMCVIRES序列两种解决方案能使该原核表达系统在真核细胞高效表达目的基因 ,且能适应不同的真核细胞环境 ,是一良好的细胞类型非依赖的表达体系。 展开更多
关键词 t7 RNA聚合酶 t7启动子 原核表达系统 真核细胞
在线阅读 下载PDF
CMV与T7启动子对仙台病毒微小基因组拯救效率的比较 被引量:9
17
作者 魏国超 田文洪 +5 位作者 王刚 柳云帆 尉迟捷 董小岩 凌虹 吴小兵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期237-245,共9页
构建一种以分泌型荧光素酶基因(Gluc)作为报告基因的仙台病毒BB1株微小基因组质粒,比较了CMV启动子与T7启动子对仙台病毒微小基因组的拯救效率。首先设计并合成锤头状核酶序列,仙台病毒trailer、L基因非编码区、N基因非编码区和leader... 构建一种以分泌型荧光素酶基因(Gluc)作为报告基因的仙台病毒BB1株微小基因组质粒,比较了CMV启动子与T7启动子对仙台病毒微小基因组的拯救效率。首先设计并合成锤头状核酶序列,仙台病毒trailer、L基因非编码区、N基因非编码区和leader序列以及丁型肝炎病毒核酶序列,插入含有CMV和T7双启动子的质粒pVAX1中,获得仙台微小基因组的通用型载体pVAX-miniSeV。将Gluc基因插入pVAX-miniSeV中,分别获得正向插入的仙台病毒微小基因组载体pVAX-miniSeV-Gluc(+)和反向插入的pVAX-miniSeV-Gluc(-)。用pVAX-miniSeV-Gluc(+)转染BHK21细胞能在上清中检测到高水平的Gluc活性,表明其中的CMV启动子具有正常转录功能。将pVAX-miniSeVGluc(-)和仙台病毒N、P、L蛋白表达质粒共转染BSR T7/5细胞(稳定表达T7RNA聚合酶的BHK-21细胞)检测到Gluc的高效表达,表明pVAX-miniSeV-Gluc(-)能够被有效拯救;但在BHK-21细胞中却未检测到Gluc的有效表达,提示该载体中的CMV启动子对仙台病毒微小基因组的拯救效率可能没有明显作用。为了进一步了解CMV与T7启动子各自对于仙台病毒微小基因组拯救的作用,本研究又构建了单独含有CMV或T7启动子的仙台病毒微小基因组载体pCMV-miniSeV-Gluc(-)和pT7-miniSeV-Gluc(-)。将这两种载体和仙台病毒N、P、L蛋白表达质粒分别共转染BSR T7/5细胞,结果pT7-miniSeV-Gluc(-)共转染组检测到了Gluc的高效表达,而pCMV-miniSeV-Gluc(-)共转染组未检测到,证实了通用型载体pVAX-miniSeV中仅T7启动子对仙台病毒微小基因组的拯救起了关键作用,而CMV启动子作用不明显。本研究成功构建了一种通用型双启动子仙台病毒微小基因组载体pVAX-miniSeV,并证明了T7启动子系统对仙台病毒微小基因组拯救的关键作用。本研究为下一步构建仙台病毒全基因感染性克隆打下了基础。 展开更多
关键词 t7启动子 CMV启动子 仙台病毒 微小基因组
原文传递
塔中地区T7^4界面碳酸盐岩古岩溶发育控制因素分析 被引量:19
18
作者 王黎栋 万力 于炳松 《大庆石油地质与开发》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期34-38,共5页
T7^4界面是塔中地区奥陶系重要的不整合界面,在其下的奥陶系碳酸盐岩风化壳中已获高产油气流。塔中地区石油勘探实践及T7^4界面形成时期地理地质条件的分析为塔中地区同期碳酸盐岩岩溶的广泛发育提供了充足的证据。以现代岩溶形成理论... T7^4界面是塔中地区奥陶系重要的不整合界面,在其下的奥陶系碳酸盐岩风化壳中已获高产油气流。塔中地区石油勘探实践及T7^4界面形成时期地理地质条件的分析为塔中地区同期碳酸盐岩岩溶的广泛发育提供了充足的证据。以现代岩溶形成理论为指导,对发育于T7^4界面之下的碳酸盐岩体中的古岩溶研究表明,该区奥陶系碳酸盐岩古岩溶主要以发育于T7^4界面之下250~300m的裂缝、孔洞为主的侵蚀面岩溶,垂向上具有良好的分带性,自上而下大致可以分为表生岩溶带、垂直渗流带、季节变化带、水平潜流带和深部缓流带;古岩溶的发育主要受古气候、岩性、构造、古地形及水文地质条件等因素的控制,其中岩性、古地形及古水文地质条件尤为关键;古岩溶高地南、北两侧的岩溶坡地坡度较缓地带,应是下一步石油勘探的重点区域。 展开更多
关键词 塔中地区 t7^4界面 碳酸盐岩 古岩溶 控制因素
在线阅读 下载PDF
用T7噬菌体展示技术筛选乙型肝炎病毒PreS1相互作用蛋白 被引量:9
19
作者 黄英 张君 +2 位作者 何茂锐 陈维贤 黄爱龙 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2007年第4期340-343,共4页
目的:用T7噬菌体筛选系统筛选乙型肝炎病毒PreS1的相互作用蛋白。方法:应用T7噬菌体展示技术,以通过原核表达的方式得到的乙型肝炎病毒PreS1作为靶分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行生物筛选,对筛选到的克隆进行DNA序列分析及同源性搜... 目的:用T7噬菌体筛选系统筛选乙型肝炎病毒PreS1的相互作用蛋白。方法:应用T7噬菌体展示技术,以通过原核表达的方式得到的乙型肝炎病毒PreS1作为靶分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行生物筛选,对筛选到的克隆进行DNA序列分析及同源性搜索。结果:经鉴定得到1个阳性克隆,确定了能与乙型肝炎病毒PreS1相互作用的蛋白可能为:细胞色素C氧化酶1(Cytochrome c Oxidase Subunit I,COX1)。结论:T7噬菌体展示筛选系统是筛选相互作用蛋白的一种简单、快速和有效的手段,筛选到的相互作用蛋白为进一步探讨PreS1的致病机制提供重要依据。 展开更多
关键词 t7噬菌体展示技术 乙型肝炎病毒PRES1 相互作用蛋白
暂未订购
以T7 RNA聚合酶为基础的病毒拯救系统研究进展 被引量:8
20
作者 郑海学 常艳艳 +2 位作者 靳野 刘湘涛 谢庆阁 《动物医学进展》 CSCD 2007年第11期62-65,共4页
文章界定了与病毒拯救相关的一些概念,对T7RNA聚合酶(RNAP)为基础的病毒拯救系统研究进行概述。介绍了体外拯救方法及其缺点,并以最常用的痘病毒载体表达T7RNAP为基础的体内拯救方法为例,介绍了该方法对病毒拯救的研究进展及缺点,进一... 文章界定了与病毒拯救相关的一些概念,对T7RNA聚合酶(RNAP)为基础的病毒拯救系统研究进行概述。介绍了体外拯救方法及其缺点,并以最常用的痘病毒载体表达T7RNAP为基础的体内拯救方法为例,介绍了该方法对病毒拯救的研究进展及缺点,进一步介绍了无痘病毒表达T7RNAP细胞系的RNA病毒拯救体系的建立和研究,为病毒拯救,特别是以T7RNAP为基础的病毒拯救试验方案提供参考。 展开更多
关键词 t7 RNA聚合酶 病毒拯救 感染性克隆 反向遗传操作技术
在线阅读 下载PDF
上一页 1 2 23 下一页 到第
使用帮助 返回顶部