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河南郑州桃园桃病毒T的RT-PCR检测
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作者 王新卫 刘立立 +6 位作者 方伟超 陈昌文 朱更瑞 曹珂 李勇 吴金龙 王力荣 《中国果树》 2024年第9期86-89,共4页
通过选取河南省郑州市周边桃园生长不正常的树体叶片,进行RT-PCR检测桃病毒T的感染。结果表明,18份样品中检测到了6份样品存在病毒感染,检出率为33.3%。检出病毒的桃树样品分布在新郑市多个乡镇的果园,共有5个品种检出病毒;来自巩义市... 通过选取河南省郑州市周边桃园生长不正常的树体叶片,进行RT-PCR检测桃病毒T的感染。结果表明,18份样品中检测到了6份样品存在病毒感染,检出率为33.3%。检出病毒的桃树样品分布在新郑市多个乡镇的果园,共有5个品种检出病毒;来自巩义市的样品未检测出桃病毒T。检出病毒的桃品种既有生产上的老品种,又有近几年栽植的新品种。结合多个桃园的病毒检出,说明病毒T已在生产中存在较长时间,并在局部区域呈扩散趋势。 展开更多
关键词 桃园 病毒病防控 Rt-pcr 桃病毒T(PVT) 感染
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半定量RT-PCR测定中药成分对小鼠脾T细胞IL-2mRNA水平的影响 被引量:14
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作者 储岳峰 颜新敏 +1 位作者 李祥瑞 胡元亮 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期1911-1916,共6页
应用半定量RT-PCR方法,测定了9种中药成分对小鼠脾脏T细胞IL-2mRNA水平的影响。结果显示,体内注射黄芪多糖、淫羊藿多糖、当归多糖、蜂胶黄酮和黄芪皂甙能够使ConA诱导的小鼠脾T细胞IL-2mRNA水平显著升高,蜂胶多糖、板兰根多糖、人参皂... 应用半定量RT-PCR方法,测定了9种中药成分对小鼠脾脏T细胞IL-2mRNA水平的影响。结果显示,体内注射黄芪多糖、淫羊藿多糖、当归多糖、蜂胶黄酮和黄芪皂甙能够使ConA诱导的小鼠脾T细胞IL-2mRNA水平显著升高,蜂胶多糖、板兰根多糖、人参皂甙、淫羊藿黄酮不能影响细胞内IL-2mRNA丰度;中药成分体外诱导时与体内应用时的作用效应相同,但与对照相比较,蜂胶多糖在体外能够显著促进IL-2mRNA的诱生,与体内不同。 展开更多
关键词 小鼠 中药成分 半定量Rt-pcr IL-2mRNA T细胞 半定量Rt-pcr MRNA水平 中药成分 IL-2 T细胞 小鼠 脾脏 测定 Rt-pcr方法
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应用RT-PCR分析真性红细胞增多症病人TCR Vβ亚家族T细胞的表达 被引量:1
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作者 杨力建 李扬秋 +4 位作者 许敏华 祁明芳 郁志 陈少华 廖继东 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 1999年第1期76-78,共3页
近几年,国外相继报道对T细胞受体(TCR)Vβ24个亚家族基因的分析,从而了解肿瘤或自身免疫性疾病病人的细胞免疫功能状态,并为临床上进一步开展特异性免疫治疗提供新的实验依据。本文利用RT-PCR方法分析3例真性红细胞增多症病人Vβ亚家族... 近几年,国外相继报道对T细胞受体(TCR)Vβ24个亚家族基因的分析,从而了解肿瘤或自身免疫性疾病病人的细胞免疫功能状态,并为临床上进一步开展特异性免疫治疗提供新的实验依据。本文利用RT-PCR方法分析3例真性红细胞增多症病人Vβ亚家族T细胞的表达情况。 展开更多
关键词 T细胞受体VΒ基因 T细胞 真性红细胞增多症 逆转录-聚合酶链反应
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用pB1uescript SK(+)质粒自制T-A载体对DD RT-PCR产物进行克隆
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作者 李新波 周清平 +4 位作者 赵小松 田德志 丁滢炯 朱依纯 姚泰 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 1999年第10期1-2,共2页
mRNA差异显示技术可以显示mRwa表达水平的差异。为了对用mnwA差异显示技术得到的差异条带进行研究,该文用改良碱裂解法抽提pBS质粒,用ECORV将pBS切成平头,利用TaqDNa聚合酶的非模板依赖性,在dryP... mRNA差异显示技术可以显示mRwa表达水平的差异。为了对用mnwA差异显示技术得到的差异条带进行研究,该文用改良碱裂解法抽提pBS质粒,用ECORV将pBS切成平头,利用TaqDNa聚合酶的非模板依赖性,在dryP存在的条件下,用切成平头的PBS质粒自制了T—A克隆载体,对用mRNA差异显示方法得到的差异条带进行了重组,结果表明:用自制T一A克隆载体对PCR产物进行克隆的连接率较高,自制T一A载体进行PCR产物克隆是一简便可行的方法。 展开更多
关键词 T-A克隆 PCR产物 载体 PBS质粒
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Effect of Chinese Herbal Medicinal Ingredients on IL-2 mRNA Levels of T Lymphocytes in Mice Measured Using Semiquantification RT-PCR 被引量:11
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作者 CHU Yue-feng YAN Xin-min +1 位作者 LI Xiang-rui HU Yuan-liang 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2006年第11期873-878,共6页
In this study, the IL-2 mRNA levels of T lymphocytes in normal mice stimulated by nine Chinese herbal medicinal ingredients (CHMIs) were measured using semiquantification reverse transcription polymerase chain react... In this study, the IL-2 mRNA levels of T lymphocytes in normal mice stimulated by nine Chinese herbal medicinal ingredients (CHMIs) were measured using semiquantification reverse transcription polymerase chain reaction. The results showed that astragalus polysaccharide (APS), epimedium polysaccharide (EPS), Chinese angelica polysaccharide (CAPS), propolis flavone (PF), and astrogalosides (AS) promoted IL-2 mRNA levels in T lymphocytes in vitro and in vivo to differing degrees, and the level of IL-2 mRNA induced by propolis polysaccharide (PPS) in vitro was higher than that induced by the control, which differed from that of PPS in vivo. 展开更多
关键词 Chinese herbal medicinal ingredients semiquantification Rt-pcr IL-2 mRNA T Lymphocytes MICE
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马铃薯T病毒实时荧光PCR检测方法的建立
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作者 李春雷 王溪桥 +2 位作者 史琳 李亚平 杨岚清 《植物检疫》 2025年第6期62-66,共5页
马铃薯T病毒(potato virus T,PVT)是马铃薯的重要病害之一。为建立快速、准确、灵敏、规范的检测方法以促进马铃薯顺利出口,本研究根据PVT外壳蛋白(coat protein,CP)基因设计3组引物及TaqMan探针,通过引物筛选确定最佳引物组合,利用常规... 马铃薯T病毒(potato virus T,PVT)是马铃薯的重要病害之一。为建立快速、准确、灵敏、规范的检测方法以促进马铃薯顺利出口,本研究根据PVT外壳蛋白(coat protein,CP)基因设计3组引物及TaqMan探针,通过引物筛选确定最佳引物组合,利用常规PCR方法及实时荧光PCR方法进行了特异性检测和灵敏度比较。结果表明,本研究建立的PVT实时荧光PCR检测方法特异性好,与参试的马铃薯A病毒、马铃薯X病毒、马铃薯Y病毒、马铃薯黄矮病毒、李痘病毒无交叉反应;灵敏度高,最低检测浓度可达66fg/μL。本研究构建的马铃薯T病毒实时荧光PCR检测鉴定体系,可为马铃薯繁殖材料的快速检测提供技术支持。 展开更多
关键词 马铃薯T病毒 实时荧光PCR 检测
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PCR双向开启硫黄素T/G四链体探针无标记检测牛奶中沙门氏菌方法研究
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作者 尚慧杰 徐建国 +2 位作者 彭育勃 陈伟 姚丽 《合肥工业大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第5期677-681,687,共6页
文章提出一种基于聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的硫黄素T(ThT)/G-四链体探针无标记检测牛奶中沙门氏菌(Salmonella)方法。以沙门氏菌的invA基因为检测目标,设计特异性发卡引物,通过PCR和特异功能的G-四链体实现对沙... 文章提出一种基于聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的硫黄素T(ThT)/G-四链体探针无标记检测牛奶中沙门氏菌(Salmonella)方法。以沙门氏菌的invA基因为检测目标,设计特异性发卡引物,通过PCR和特异功能的G-四链体实现对沙门氏菌的检测。结果表明,该检测方法操作简便、特异性强、灵敏度高。在最优反应体系下,沙门氏菌的浓度与信号输出值具有良好的线性关系,其回归方程为Y=27.149X+0.292,R^(2)=0.981,其线性范围为10^(2)~10^(6) CFU/mL。纯菌样品和实际样品都能在细菌浓度为10^(2) CFU/mL时检测出信号,表明该方法具有抗基质效应。研究结果为食源性致病菌的检测提供了一种新的思路。 展开更多
关键词 G-四链体 硫黄素T 沙门氏菌 无标记检测 聚合酶链式反应(PCR)
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T-DNA插入筛选棉花枯萎病菌致病力减弱突变体及其侧翼序列分析
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作者 何丹 苏飞鸿 +3 位作者 张李娅 宋东博 夏红飞 顾爱星 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1732-1740,共9页
【背景】新疆是棉花生产的主要地区,枯萎病的发生严重影响着棉花的产量。目前,关于棉花枯萎病原菌的发病机制尚无详细报道。【目的】在尖孢镰刀菌突变体库中筛选出致病力降低的突变体并分析其致病基因,以阐明棉花枯萎病菌的致病分子机... 【背景】新疆是棉花生产的主要地区,枯萎病的发生严重影响着棉花的产量。目前,关于棉花枯萎病原菌的发病机制尚无详细报道。【目的】在尖孢镰刀菌突变体库中筛选出致病力降低的突变体并分析其致病基因,以阐明棉花枯萎病菌的致病分子机制。【方法】在前期已建立的枯萎病菌突变体库的基础上,对随机挑选的136份突变体致病力进行鉴定,并对其表型和侧翼序列进行分析。【结果】获得5个致病能力明显降低的突变株,突变体B-18的形态与野生型有差异且菌落颜色变为紫色;5个突变体生长速率均降低,其中B-18下降最明显;5个突变体产孢数量均降低。扩增5个突变体,测序后经BLAST比对分析,确定了T-DNA在枯萎病菌基因组的分布情况。【结论】对筛选出的5个致病力缺陷的突变体进行分析并找到致病基因,为研究棉花致病基因的功能和克隆提供了坚实的理论基础。 展开更多
关键词 棉花 尖孢镰刀菌 T-DNA插入突变体 高效热不对称交错PCR 致病力
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旋毛虫感染小鼠肠道菌群的变化 被引量:3
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作者 王莹 苟强 +12 位作者 李静 姜海燕 陈福广 申凤鸽 陈伟 李欣然 冯嘉轩 王新辉 曲海娥 江倩 张巧灵 刘波 赵颖 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期422-426,共5页
选取18只BALB/c小鼠进行旋毛虫灌胃,以灌胃前1d作为时间起点,于第0、1、7、14、28天分别收集小鼠粪便,同期选取12只同种小鼠作为对照。采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法对小鼠粪便中双歧杆菌、乳杆菌、肠球菌、梭菌、拟杆菌、直肠真杆菌... 选取18只BALB/c小鼠进行旋毛虫灌胃,以灌胃前1d作为时间起点,于第0、1、7、14、28天分别收集小鼠粪便,同期选取12只同种小鼠作为对照。采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法对小鼠粪便中双歧杆菌、乳杆菌、肠球菌、梭菌、拟杆菌、直肠真杆菌、柔嫩梭菌以及脱硫弧杆菌进行定量检测。结果显示,双歧杆菌数量在第7、14、28天均显著低于对照组(P<0.01),第1天无变化;乳杆菌第7、14、28天低于对照组(P<0.05),第1天无变化;肠球菌与梭菌在第7、14、28天均高于对照组(P<0.05),第1天无变化;拟杆菌、直肠真杆菌、柔内梭菌以及脱硫弧杆菌均无明显变化(P>0.05)。结果表明,旋毛虫感染可引起小鼠肠道菌群变化,从而引起小鼠肠道菌群失调。 展开更多
关键词 旋毛虫 肠道菌群 荧光定量PCR(R]t-pcr) 16S RRNA
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红壤坡地利用方式对土壤细菌群落结构的影响 被引量:28
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作者 秦红灵 袁红朝 +3 位作者 张慧 朱亦君 吴敏娜 魏文学 《土壤学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期594-602,共9页
利用中国科学院桃源农业生态试验站坡地不同利用方式长期定位观测试验场农田、自然恢复和茶园土壤为研究对象,直接从土壤中抽提总DNA,应用T-RFLP和RT-PCR技术研究红壤坡地利用方式对土壤细菌群落结构的影响。结果表明,红壤坡地三种土地... 利用中国科学院桃源农业生态试验站坡地不同利用方式长期定位观测试验场农田、自然恢复和茶园土壤为研究对象,直接从土壤中抽提总DNA,应用T-RFLP和RT-PCR技术研究红壤坡地利用方式对土壤细菌群落结构的影响。结果表明,红壤坡地三种土地利用方式土壤细菌多样性指数农田>茶园>自然恢复(p<0.05),但土壤细菌数量茶园>自然恢复>农田(p<0.05),茶园土壤细菌数量是农田的8.76倍。基于T-RFLP图谱的样品间相似性指数和主要限制性片段(T-RFs)定性分析均表明,农田与茶园和自然恢复土壤均存在显著的差异(p<0.05),而茶园和自然恢复土壤细菌群落比较相似。不同土地利用方式土壤有机质、有效磷和速效钾均对土壤细菌群落结构产生显著影响(p<0.05)。综合考虑经济效益和保持红壤坡地的可持续利用,茶园将成为中国南方红壤丘陵坡地可持续利用的一种有效方式。 展开更多
关键词 土地利用 土壤细菌 多样性 T-RFLP Rt-pcr
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DNA和cDNA水平对比研究施肥对稻田土壤细菌多样性的影响 被引量:3
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作者 王聪 吴讷 +3 位作者 侯海军 汤亚芳 沈健林 秦红灵 《环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第11期4372-4379,共8页
依托长沙农业环境观测研究站不同施肥方式长期定位试验,直接从土壤中抽提总DNA和RNA,应用T-RFLP和RTPCR技术在DNA和c DNA水平对比研究施肥对亚热带稻田土壤细菌丰度和群落结构的影响.结果表明,施肥和秸秆还田显著改变了土壤细菌群落组成... 依托长沙农业环境观测研究站不同施肥方式长期定位试验,直接从土壤中抽提总DNA和RNA,应用T-RFLP和RTPCR技术在DNA和c DNA水平对比研究施肥对亚热带稻田土壤细菌丰度和群落结构的影响.结果表明,施肥和秸秆还田显著改变了土壤细菌群落组成(DNA水平)和转录组成(c DNA水平)结构,且不同处理中DNA水平的T-RFLP图谱与cDNA水平相差很大.施肥和秸秆还田降低了土壤中存在的细菌多样性,对土壤中转录的细菌多样性没有影响.土壤16S rRNA基因丰度(DNA水平)平均是其转录丰度(c DNA水平)的337倍,与不施氮肥处理(N0)相比,平衡施肥(NPK)没有改变土壤细菌的数量,在平衡施肥的基础上进行秸秆还田增加了土壤细菌的数量,但高量与低量秸秆还田没有显著差异.RDA分析表明,稻田土壤中铵态氮含量是调控各处理土壤中存在及转录的细菌群落的关键因子.总体而言,不管在DNA还是c DNA水平,研究施肥对土壤细菌丰度的影响均是可行并可信的;但只有在c DNA水平开展研究,才能有效发现细菌群落对环境的适应性. 展开更多
关键词 施肥 土壤细菌 c DNA T-RFLP Rt-pcr
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小鼠Th1细胞特异性转录因子T-bet基因腺相关病毒载体的构建 被引量:3
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作者 王锁英 许化溪 +7 位作者 王胜军 黄新祥 王文斌 陈巧林 马斌 眭建 姜旭淦 胡嘉波 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期184-188,F0003,共6页
目的:构建小鼠Th1细胞特异性转录因子T-bet基因的腺相关病毒载体。方法:利用RT-PCR方法,从Balb/C小鼠脾细胞的mRNA中扩增T-bet基因全长cDNA,经测序证实后插入Pzac2.1质粒,用磷酸钙沉淀法,与pAddeltaF6及p5E18质粒共转染293细胞,包装成... 目的:构建小鼠Th1细胞特异性转录因子T-bet基因的腺相关病毒载体。方法:利用RT-PCR方法,从Balb/C小鼠脾细胞的mRNA中扩增T-bet基因全长cDNA,经测序证实后插入Pzac2.1质粒,用磷酸钙沉淀法,与pAddeltaF6及p5E18质粒共转染293细胞,包装成重组的病毒颗粒,并通过抽提病毒DNA进行PCR扩增鉴定重组病毒的形成,设立eGFP基因为对照。结果:1592bp的小鼠T-bet基因被成功克隆,分析表明,与Genbank中发表的序列相比具有99.8%的同源性。重组质粒Pzac2.1-T-bet的PCR及酶切鉴定表明T-bet基因被定向插入,与pAddeltaF6及p5E18质粒共转染293细胞包装成病毒后,经荧光显微镜和病毒DNA的PCR检测,证实已完成对重组病毒的包装。结论:成功构建了小鼠T-bet基因的腺相关病毒载体rAAV-T-bet,为免疫紊乱性疾病的T-bet基因干预治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 T-BET Rt-pcr 基因克隆 重组质粒 腺相关病毒载体
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hMSH2基因cDNA保守区域的T载体克隆及序列分析 被引量:2
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作者 何云 庄志雄 +2 位作者 杨杏芬 陈铁江 陈雯 《卫生毒理学杂志》 CSCD 北大核心 2001年第1期8-10,共3页
目的 构建含限制性内切酶位点PstⅠ、KpnⅠ的hMSH2基因cDNA保守区域的pGEM T S载体 ,比较分析序列的变化 ,为以后的毒理学研究提供实验材料。方法 从人胚肺成纤维细胞HLF中抽提总RNA进行RT PCR扩增 ,直接与T载体连接后转化大肠杆菌DH5... 目的 构建含限制性内切酶位点PstⅠ、KpnⅠ的hMSH2基因cDNA保守区域的pGEM T S载体 ,比较分析序列的变化 ,为以后的毒理学研究提供实验材料。方法 从人胚肺成纤维细胞HLF中抽提总RNA进行RT PCR扩增 ,直接与T载体连接后转化大肠杆菌DH5α ,用蓝 白斑试验筛选阳性克隆 ,抽提质粒进行酶切鉴定 ,再行序列分析。结果 经RT PCR获得 6 31bp含限制性内切酶位点的阳性产物 ,T载体克隆、酶切鉴定及序列分析后证实 ,克隆片段与genbank中该基因的序列同源性为 99 5 %。结论 本文成功地构建了含hMSH2基因cDNA保守区域的T载体克隆 ,该克隆可为DNA错配修复缺陷与致癌关系研究提供工具。 展开更多
关键词 HMSH2 Rt-pcr T载体 序列分析 毒理学
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犬白细胞介素-21基因的扩增和测序 被引量:2
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作者 张晓东 栾维民 钱爱东 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期450-452,共3页
无菌抽取犬外周血,分离单核细胞,经PHA刺激后收集细胞,使用Trizol提取细胞总RNA;利用自行设计的引物,反转录合成cDNA第1条链,PCR扩增出长约441 bp的白细胞介素-21(IL-21)基因带。经纯化回收,将基因克隆至pMD18-T,筛选阳性克隆测序证明... 无菌抽取犬外周血,分离单核细胞,经PHA刺激后收集细胞,使用Trizol提取细胞总RNA;利用自行设计的引物,反转录合成cDNA第1条链,PCR扩增出长约441 bp的白细胞介素-21(IL-21)基因带。经纯化回收,将基因克隆至pMD18-T,筛选阳性克隆测序证明扩增的cDNA的序列与已报道的序列相一致。 展开更多
关键词 白细胞介素-21(IL-21) 基因 Rt-pcr T细胞
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蛋白激酶CK2α亚基cDNA的克隆与序列分析 被引量:1
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作者 陈曦林 桂亦瑞 陈知水 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2004年第18期70-72,共3页
目的构建人蛋白激酶CK2α重组质粒,研究CK2结构和功能。方法采用RT-PCR、定向克隆和DNA测序方法进行实验。结果通过RT-PCR从Hep-3B肝癌细胞中获得人蛋白激酶CK2α(ProteinKinase2α)亚基编码区1136bp的cDNA片段,将扩增基因通过粘端连接... 目的构建人蛋白激酶CK2α重组质粒,研究CK2结构和功能。方法采用RT-PCR、定向克隆和DNA测序方法进行实验。结果通过RT-PCR从Hep-3B肝癌细胞中获得人蛋白激酶CK2α(ProteinKinase2α)亚基编码区1136bp的cDNA片段,将扩增基因通过粘端连接克隆到pUCm-T载体中,用PCR和限制性内切酶分析鉴定,表明获得重组质粒pUCm-T-CK2α。通过对CK2α编码区cDNA序列测序证实其与GeneBank中登记号为NM-01895的序列一致。结论成功构建了重组质粒pUCm-T-CK2α,为利用CK2αcDNA作为探针进行深入研究奠定了基础。 展开更多
关键词 蛋白激酶cK2α pUCm-T载体 Rt-pcr 克隆 序列分析
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黄芩苷对人淋巴细胞Toll样受体的调节 被引量:6
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作者 孙午 熊莺 +3 位作者 王敏 姜青龙 龚淑琪 傅颖媛 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期706-711,共6页
目的:研究黄芩苷对人淋巴细胞Toll样受体(TLR)的调节,探讨其在免疫调节方面的作用。方法:1.尼龙毛分离法分离人外周血T和B细胞后使用UF-50流式分析寻找最佳黄芩苷作用浓度;2.采用实时定量荧光RT-PCR,分析在最佳黄芩苷作用浓度处理前后T... 目的:研究黄芩苷对人淋巴细胞Toll样受体(TLR)的调节,探讨其在免疫调节方面的作用。方法:1.尼龙毛分离法分离人外周血T和B细胞后使用UF-50流式分析寻找最佳黄芩苷作用浓度;2.采用实时定量荧光RT-PCR,分析在最佳黄芩苷作用浓度处理前后TLRs的表达情况;3.通过加入鼠抗人TLR4单抗进行受体抑制实验并应用实时定量荧光RT-PCR探讨黄芩苷对TLRs的调节位点。结果:1.1 mg/ml的黄芩苷在体外可以显著促进人T、B淋巴细胞增殖(P<0.05);2.使用1mg/ml黄芩苷相对于未用黄芩苷处理的T、B细胞,其TLR3、TLR7、TLR8及TLR9 mRNA的表达均有显著增加(P<0.05),T细胞增加倍数分别为21、15、57和66倍,B细胞增加的倍数分别为24、20、61和63倍,而TLR1、TLR2、TLR4、TLR5、TLR6及TLR10 mRNAs表达变化不显著(P>0.05);3.在1 mg/ml黄芩苷作用下人T、B细胞TLR3、7、8和9 mRNA在12小时时表达已开始增加,除T细胞的TLR7 mRNA表达在48小时时略有下降外,其余表达基本一直持续增加,至48小时到达峰值;4.人T、B细胞在被黄芩苷作用前使用鼠抗人TLR4单克隆抗体封闭,会显著降低黄芩苷对TLR3、7、8和9 mRNA表达的诱导作用(P<0.05),T细胞下降比率分别为47.6%、66.7%、50.9%和45.5%;B细胞下降比率分别为50.0%、45.0%、50.8%和50.8%。结论:1.黄芩苷在体外能显著促进T、B淋巴细胞增殖;2.人外周血T、B细胞组成性表达含量差异较大的TLR1-10 mRNA,黄芩苷在体外可以显著上调人T、B淋巴细胞TLR3、TLR7、TLR8及TLR9 mRNAs的表达,但对TLR1、TLR2、TLR4、TLR5、TLR6及TLR10 mRNAs未见明显影响;3.黄芩苷可能通过TLR4发挥对人天然免疫能力的调节。 展开更多
关键词 黄芩苷 T淋巴细胞 B淋巴细胞 TOLL样受体 Rt-pcr
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非小细胞肺癌多药耐药基因表达及环孢菌素A对其逆转作用 被引量:2
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作者 张晓春 曲凤声 +3 位作者 岳长青 杨秀云 洪士强 徐功立 《中国肺癌杂志》 CAS 2000年第3期170-174,共5页
研究非小细胞肺癌 (NSCLC)患者多药耐药基因 (MDR1)表达与化疗疗效间的关系 ,观察环孢霉素 (CsA)逆转MDR1的疗效及毒性。方法 利用RT PCR技术检测 46例NSCLC患者肿瘤细胞和外周血淋巴细胞MDR1表达 ,根据检测结果将患者分成MDR1阳性逆... 研究非小细胞肺癌 (NSCLC)患者多药耐药基因 (MDR1)表达与化疗疗效间的关系 ,观察环孢霉素 (CsA)逆转MDR1的疗效及毒性。方法 利用RT PCR技术检测 46例NSCLC患者肿瘤细胞和外周血淋巴细胞MDR1表达 ,根据检测结果将患者分成MDR1阳性逆转组、MDR1阳性对照组和MDR1阴性组。所有患者接受至少 2个周期的化疗 ,阳性逆转组患者在化疗同时给予CsA ,剂量为 4mg/kg。结果 肿瘤细胞MDR1阳性率为 6 5 .2 % (30 /4 6 ) ,外周血淋巴细胞MDR1阳性率为 5 8.7% (2 7/4 6 ) ,2 4例患者为肿瘤细胞和外周血淋巴细胞MDR1均阳性。复发患者阳性率为 81.3% (2 6 /32 ) ,多程化疗患者阳性率为 85 .7% (2 4/2 8) ,明显高于初治或未行化疗患者。阳性逆转组化疗有效率为 46 .7% (7/15 ) ,对照组为 2 0 % (3/15 ) ,阴性组为 37.5 % (6 /16 ) ,阳性逆转组的血液毒性和肝功能损害较其他组增高 ,其余毒副反应及免疫功能改变无明显差异。结论 RT PCR法检测MDR1表达对评估NSCLC多药耐药、化疗疗效及预后具有一定临床价值。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 多药耐药基因 Rt-pcr 环孢菌素A
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人T-bet基因的克隆及序列分析 被引量:5
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作者 杨敏 王锁英 +6 位作者 王胜军 马洁 毛朝明 邱谷风 许小朋 邵启祥 许化溪 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2006年第2期109-111,119,共4页
目的:克隆人T-bet基因全长编码区的cDNA,并进行鉴定和测序分析,为从转录水平研究Th1/Th2平衡及其与免疫相关性疾病发生发展的关系奠定基础。方法:采用RT-PCR方法,从人外周血淋巴细胞获得T-bet基因的cDNA;连接至pGEM-Teasy载体,导入大肠... 目的:克隆人T-bet基因全长编码区的cDNA,并进行鉴定和测序分析,为从转录水平研究Th1/Th2平衡及其与免疫相关性疾病发生发展的关系奠定基础。方法:采用RT-PCR方法,从人外周血淋巴细胞获得T-bet基因的cDNA;连接至pGEM-Teasy载体,导入大肠杆菌DH5α并选择阳性克隆;应用M13F/R通用引物进行双向反应测序,以作序列鉴定。结果:扩增得到的T-bet基因cDNA全长1 670 bp,包括编码区1 607 bp,编码530个氨基酸残基,与Gen-bank中发表的序列完全一致。结论:获得了人T-bet基因的克隆,为进一步研究其生物学功能构建了基础平台,为寻找多种免疫性疾病的有效治疗提供新思路。 展开更多
关键词 T-BET基因 CDNA克隆 Rt-pcr
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鸡传染性支气管炎病毒澳大利亚T株部分基因序列的克隆与分析 被引量:2
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作者 崔芳岩 孟和 +1 位作者 陈学辉 潘玉春 《上海交通大学学报(农业科学版)》 2005年第3期271-274,288,共5页
澳大利亚T株(IBVT-)是鸡肾型传染性支气管炎病毒(IBV)主要代表毒株之一。目前,在相关生物数据库中IBV-基因序列极少。实验通过对GenBank中已有IBV基因序列比较,在IBV编码蛋白S、N、M和RdRp基因的高度同源区设计了四对引物,并通过反转录... 澳大利亚T株(IBVT-)是鸡肾型传染性支气管炎病毒(IBV)主要代表毒株之一。目前,在相关生物数据库中IBV-基因序列极少。实验通过对GenBank中已有IBV基因序列比较,在IBV编码蛋白S、N、M和RdRp基因的高度同源区设计了四对引物,并通过反转录聚合酶链式反应R(TP-CR)获得特异性扩增产物。克隆测序结果证明扩增产物确为IBV相应基因片段。所获序列同IBV其它类型相关基因序列比较结果显示,编码蛋白S、N、M和RdRp基因的同源性分别为80.51%~87.22%%,85.83%~91.25%,89.63%~91.01%和85.97%~92.37%。实验丰富了生物数据库中IBVT-基因序列。所设计的引物表现很好的扩增效率和特异性,对于IBV其它毒株的检测和鉴定有一定的借鉴作用。 展开更多
关键词 鸡传染性支气管炎病毒 澳大利亚T株 Rt-pcr检测
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人参皂苷对桥本甲状腺炎大鼠Foxp3、T-bet、GATA-3 mRNA表达的影响 被引量:5
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作者 黄琦 冯晓红 +4 位作者 陈颉 张寅晓 苗青 林筱洁 赵闫丽 《浙江中医药大学学报》 CAS 2014年第12期1421-1424,共4页
[目的]观察人参皂苷对桥本甲状腺炎大鼠甲状腺Foxp3、T-bet、GATA-3 m RNA表达的影响。[方法]40只Wistar大鼠随机分为五组,即正常组、桥本甲状腺炎模型组、人参皂苷低、中、高剂量组,治疗组人参皂苷灌胃,正常及模型组以蒸馏水灌胃。用... [目的]观察人参皂苷对桥本甲状腺炎大鼠甲状腺Foxp3、T-bet、GATA-3 m RNA表达的影响。[方法]40只Wistar大鼠随机分为五组,即正常组、桥本甲状腺炎模型组、人参皂苷低、中、高剂量组,治疗组人参皂苷灌胃,正常及模型组以蒸馏水灌胃。用酶联免疫法检测甲状腺自身抗体水平,HE染色观察甲状腺组织病理改变,RT-PCR检测甲状腺组织Foxp3(Forkhead/winged helix transcription factor,叉状头/翅膀螺旋转录因子)、T-bet(T-box expressed in T cells,转录因子T-bet)、GATA-3(GATA binding protein 3,转录因子GATA-3)的表达。[结果]与正常组相比,模型组的TGAb(Thyroglobulin,甲状腺球蛋白抗体)及TPOAb(Thyroid peroxidase antibody,甲状腺过氧化物酶抗体)水平显著增加(P<0.05),T-bet m RNA表达水平也显著增加(P<0.05),Fox P3、GATA-3 m RNA表达显著下调(P<0.05);与模型组相比,人参皂苷治疗组的TGAb及TPOAb均下降,同时T-bet m RNA表达下降,其中低剂量与中剂量组有统计学意义(P<0.05),而人参皂苷治疗各组的GATA-3、Foxp3的表达水平均有所上升,其中低剂量与中剂量组有统计学意义(P<0.05)。[结论]Fox P3、GATA-3 m RNA表达下调,T-bet m RNA表达上调可能是桥本甲状腺炎发病的重要原因之一。人参皂苷可能通过上调GATA-3、Foxp3的表达,下调T-bet的表达,抑制Th1细胞功能的过度亢进,调节免疫的途径来保护甲状腺组织。 展开更多
关键词 桥本甲状腺炎 FOXP3 T-BET GATA-3 Rt-pcr 人参皂苷
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