为寻找巴斯德毕赤酵母(Komagataella phaffii)中甲醇代谢潜在调控因子,通过转录组数据分析,发现受甲醇显著诱导而被甘油所抑制的SUT2(Sterol up take 2,固醇摄取基因2)。固醇是过氧化物酶体膜重要组成部分,过氧化物酶体是甲醇代谢重要...为寻找巴斯德毕赤酵母(Komagataella phaffii)中甲醇代谢潜在调控因子,通过转录组数据分析,发现受甲醇显著诱导而被甘油所抑制的SUT2(Sterol up take 2,固醇摄取基因2)。固醇是过氧化物酶体膜重要组成部分,过氧化物酶体是甲醇代谢重要场所。为探究SUT2参与甲醇代谢功能机制,通过敲除及过表达SUT2基因,检测K.phaffii在不同碳源、时间点、氧含量条件下胞内麦角固醇含量及AOX1(Alcohol oxidase 1)酶活性变化;发现在甲醇培养基中SUT2通过促进胞内麦角固醇合成及过氧化物酶体膜形成,参与甲醇代谢。与之相反,ATG26(Autophagy-related gene 26,自噬相关基因26)通过促进麦角固醇合成甾醇葡萄糖苷,减少过氧化物酶体膜形成。最后,建立K.phaffii中SUT2及ATG26调控过氧化物酶体膜麦角固醇含量,响应甲醇代谢初步模型。展开更多
猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)毒力因子众多,致病性强弱与其毒力因子有关,但单个或多个毒力因子缺失对某些菌株的毒力影响并不明显,新的毒力因子仍有待发现。为挖掘新的毒力相关因子,用携带转座子TnYLB-1的穿梭载体pM...猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)毒力因子众多,致病性强弱与其毒力因子有关,但单个或多个毒力因子缺失对某些菌株的毒力影响并不明显,新的毒力因子仍有待发现。为挖掘新的毒力相关因子,用携带转座子TnYLB-1的穿梭载体pMar4S转化SS2 SC-19菌株,通过高温诱变构建SC-19菌株的突变体文库,筛选了450个转座子插入突变的单克隆。对随机挑选的18个突变体采用PCR验证,并通过大腊螟攻毒试验筛选毒力变化基因,利用反向PCR鉴定相关基因,通过同源重组方法构建SUT2基因敲除株、回补株,测定生长曲线,并进行小鼠毒力试验。结果表明,转座子TnYLB-1以单拷贝、随机方式插入到SC-19菌株的基因组;经过大腊螟攻毒试验筛选和反向PCR鉴定发现包含SUT2基因在内的8个毒力致弱基因。生长曲线测定表明,SUT2基因敲除株的生长速率比野生型菌株慢。小鼠致病性试验进一步表明,野生SC-19菌株小鼠组的死亡率为100%,SUT2基因敲除株小鼠组的存活率为100%。综上,本研究发现并鉴定了一个新的毒力相关因子SUT2,为进一步阐明SS2的致病机制奠定了基础。展开更多
文摘为寻找巴斯德毕赤酵母(Komagataella phaffii)中甲醇代谢潜在调控因子,通过转录组数据分析,发现受甲醇显著诱导而被甘油所抑制的SUT2(Sterol up take 2,固醇摄取基因2)。固醇是过氧化物酶体膜重要组成部分,过氧化物酶体是甲醇代谢重要场所。为探究SUT2参与甲醇代谢功能机制,通过敲除及过表达SUT2基因,检测K.phaffii在不同碳源、时间点、氧含量条件下胞内麦角固醇含量及AOX1(Alcohol oxidase 1)酶活性变化;发现在甲醇培养基中SUT2通过促进胞内麦角固醇合成及过氧化物酶体膜形成,参与甲醇代谢。与之相反,ATG26(Autophagy-related gene 26,自噬相关基因26)通过促进麦角固醇合成甾醇葡萄糖苷,减少过氧化物酶体膜形成。最后,建立K.phaffii中SUT2及ATG26调控过氧化物酶体膜麦角固醇含量,响应甲醇代谢初步模型。
文摘猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)毒力因子众多,致病性强弱与其毒力因子有关,但单个或多个毒力因子缺失对某些菌株的毒力影响并不明显,新的毒力因子仍有待发现。为挖掘新的毒力相关因子,用携带转座子TnYLB-1的穿梭载体pMar4S转化SS2 SC-19菌株,通过高温诱变构建SC-19菌株的突变体文库,筛选了450个转座子插入突变的单克隆。对随机挑选的18个突变体采用PCR验证,并通过大腊螟攻毒试验筛选毒力变化基因,利用反向PCR鉴定相关基因,通过同源重组方法构建SUT2基因敲除株、回补株,测定生长曲线,并进行小鼠毒力试验。结果表明,转座子TnYLB-1以单拷贝、随机方式插入到SC-19菌株的基因组;经过大腊螟攻毒试验筛选和反向PCR鉴定发现包含SUT2基因在内的8个毒力致弱基因。生长曲线测定表明,SUT2基因敲除株的生长速率比野生型菌株慢。小鼠致病性试验进一步表明,野生SC-19菌株小鼠组的死亡率为100%,SUT2基因敲除株小鼠组的存活率为100%。综上,本研究发现并鉴定了一个新的毒力相关因子SUT2,为进一步阐明SS2的致病机制奠定了基础。
