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多重STR⁃PCR在异基因造血干细胞移植后嵌合率检测中的应用
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作者 彭智勇 彭瀚慧 +3 位作者 肖成 汤浩然 裴艳茹 台运春 《分子诊断与治疗杂志》 2024年第12期2256-2260,共5页
目的探讨GoldeneyeTM 20A试剂盒检测异基因造血干细胞移植后嵌合率的准确性及stutter峰对结果的影响。方法采集18名无亲缘关系健康志愿者的外周血,随机两两配对,按其白细胞比例混合制备出不同供受者细胞比例的多组体外嵌合体模型,用Gold... 目的探讨GoldeneyeTM 20A试剂盒检测异基因造血干细胞移植后嵌合率的准确性及stutter峰对结果的影响。方法采集18名无亲缘关系健康志愿者的外周血,随机两两配对,按其白细胞比例混合制备出不同供受者细胞比例的多组体外嵌合体模型,用GoldeneyeTM 20A试剂盒对19个STR基因座进行复合扩增,扩增产物进行毛细管电泳,再分别用忽略stutter峰(方法一)和考虑stutter峰(方法二)两种方法计算嵌合率。结果总共63份混合样本均可检出供受者特异性STR位点的等位基因,即最小检出细胞嵌合率可低至0.625%。仅模拟嵌合率为40%的组,两种算法所得结果差异无统计学意义(t=1.046,P>0.05);当模拟嵌合率≤20%时,两种算法所得结果差异有统计学意义(P均<0.05)。用方法一计算时,40%、20%、10%三个模拟嵌合率组的实测值与理论值的比较差异无统计学意义(P均>0.05);模拟嵌合率5%、2.5%、1.25%、0.625%的组,实测值与理论值比较,差异有统计学意义(P均<0.05)。用方法二计算时,40%、20%、10%、5%四个模拟嵌合率组的实测值与理论值的比较,差异无统计学意义(P均>0.05)。模拟嵌合率2.5%、1.25%、0.625%的组,实测值与理论值比较,差异有统计学意义(P均<0.05)。两种算法所得嵌合率实测值与理论值均呈显著直线相关(P<0.05),但方法二的回归直线在Y轴上的截距0.067比方法一1.9852更接近于0。结论用多重STR⁃PCR结合毛细管电泳法检测嵌合率灵敏度高、准确性强,通过选取理想的位点,将stutter峰面积计算在主峰面积之内比忽略stutter峰直接计算的结果更准确。 展开更多
关键词 造血干细胞移植 短串联重复序列 嵌合率 stutter峰
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