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基于片段互补策略的Split-TurboID体系构建及其在细胞间通信研究中的应用
1
作者 耿丹丹 张心如 +2 位作者 韩毅 赵章婷 安利伟 《同济大学学报(医学版)》 2025年第3期311-318,共8页
目的基于片段互补策略构建Split-TurboID技术体系,实现对细胞间相互作用蛋白的高效、特异性标记。方法构建基于分泌型和可介导细胞间直接互作的N-TurboID和C-TurboID非活性片段,并验证其在细胞中的表达和定位。通过Western印迹法、免疫... 目的基于片段互补策略构建Split-TurboID技术体系,实现对细胞间相互作用蛋白的高效、特异性标记。方法构建基于分泌型和可介导细胞间直接互作的N-TurboID和C-TurboID非活性片段,并验证其在细胞中的表达和定位。通过Western印迹法、免疫荧光法和流式细胞术评估Split-TurboID技术的标记能力。结果成功构建并验证了自发诱导与诱饵蛋白互作诱导的Split-TurboID技术体系。Western印迹法、免疫荧光法和流式细胞术结果表明,N-TurboID和C-TurboID片段在靠近时彼此具有高亲和力,可重新组成具有活性的TurboID酶,再通过生物素标记后,可实现探究分泌型蛋白质互作和细胞间直接相互作用。结论Split-TurboID技术为细胞间相互作用的研究提供了高效、灵活且特异性强的生物素标记方法,为探索细胞间通信提供了有力的技术支持。 展开更多
关键词 片段互补策略 split-turboid 邻近标记技术 蛋白质相互作用 细胞间通信
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运用化学遗传学方法鉴定星形胶质细胞调控抑制性突触形成的关键蛋白 被引量：2
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作者 苏一洵 李晖 易陈菊 《神经损伤与功能重建》 2022年第1期1-3,共3页
星形胶质细胞对神经元突触的形成起着重要作用。但由于缺乏体内研究细胞之间互作蛋白的技术手段,我们对星形胶质细胞与神经元的互作机制了解有限。近来,来自杜克大学的Cagla Eroglu团队和Scott H.Soderling团队在Nature杂志上发表的文章... 星形胶质细胞对神经元突触的形成起着重要作用。但由于缺乏体内研究细胞之间互作蛋白的技术手段,我们对星形胶质细胞与神经元的互作机制了解有限。近来,来自杜克大学的Cagla Eroglu团队和Scott H.Soderling团队在Nature杂志上发表的文章,报道了一种利用在体化学遗传学的Split-TurboID方法,并利用该方法鉴定了星形胶质细胞中与神经元表面互作的蛋白,发现星形胶质细胞NrCAM蛋白可通过与神经元NrCAM互作,负调控星形胶质细胞的体积大小,并在神经元桥尾蛋白介导下促进抑制性突触形成。 展开更多
关键词 星形胶质细胞 抑制性突触 split-turboid 神经黏附分子
暂未订购
TurboID技术在疾病蛋白质组学中的发展与应用 被引量：3
3
作者 张芷源(综述) 丁明(审校) 《现代医药卫生》 2023年第18期3173-3177,共5页
蛋白质是生命物质的基础,其通过与其他生物分子形成复合物或蛋白-蛋白相互作用来维持细胞完整结构和功能,控制不同的生命过程。研究蛋白质相互作用的传统方法具有一定的局限性,邻近依赖生物素鉴定技术的出现可以在一定程度上弥补缺陷。... 蛋白质是生命物质的基础,其通过与其他生物分子形成复合物或蛋白-蛋白相互作用来维持细胞完整结构和功能,控制不同的生命过程。研究蛋白质相互作用的传统方法具有一定的局限性,邻近依赖生物素鉴定技术的出现可以在一定程度上弥补缺陷。而进一步优化后的TurboID技术,适用于捕捉微弱/瞬时的蛋白质相互作用的信号,并且实现了对于特殊细胞类型罕见蛋白、不溶性蛋白及空间特殊蛋白的识别。随着TurboID技术的不断优化,其逐渐在各个领域成为一种有力的研究工具,尤其是在研究各类疾病的发生机制与药物靶标筛选中发挥重要作用。该文主要总结了TurboID技术及其发展过程,并讨论了其在疾病蛋白质组学中的应用。 展开更多
关键词 蛋白质-蛋白质相互作用 邻近标记 TurboID miniTurboID split-turboid 综述
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