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题名小鼠附睾分泌蛋白Spink12的原核表达与纯化
被引量：1
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作者
田利源
李秀丽
汪莉
王玉民
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机构
军事医学科学院生物工程研究所
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出处
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第2期197-200,共4页
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文摘
目的原核表达带有His标签的小鼠附睾蛋白Spink12,对表达产物进行鉴定和纯化,以研究Spink12的免疫避孕效果。方法提取小鼠附睾组织总RNA,RT-PCR扩增不含信号肽的Spink12蛋白编码序列,以NdeⅠ和EcoRⅠ酶切后,将其连入原核表达载体pET28(a);经酶切和测序鉴定正确的重组质粒pET28(a)-Spink12,转化大肠埃希菌BL21感受态细胞。融合蛋白经IPTG诱导表达,产物经SDS-PAGE电泳和Western blotting免疫印迹鉴定。用Ni-NTA在非变性条件下利用不同的咪唑梯度浓度纯化融合蛋白6×His-Spink12。结果酶切和测序结果显示成功构建出原核表达载体pET28(a)-Spink12。重组质粒转化大肠埃希菌BL21并经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳显示表达出约9kD的融合蛋白6×His-Spink12,与理论分子量相符。融合蛋白的表达量占菌体蛋白总量的23.5%。用抗His单克隆抗体进行Western blotting免疫印迹鉴定,检测到同样大小的条带。经纯化获得较高纯度的融合蛋白6×His-Spink12,纯度达91.1%。结论成功表达并纯化了融合蛋白6×His-Spink12,为进一步研究Spink12的免疫避孕效果奠定了基础。
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关键词
spink12
蛋白酶抑制剂
原核表达
免疫避孕
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Keywords
spink12
protease inhibitor
prokaryotic expression
immunocontraception
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分类号
R394
[医药卫生—医学遗传学]
R339.21
[医药卫生—人体生理学]
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