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Spag6L基因表达抑制对小鼠精母细胞增殖和凋亡的影响
1
作者 李力 马兰 +4 位作者 吕灵璐 黄鼎宇 张志兵 柳赟昊 张玲 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期295-300,共6页
目的:探讨Spag6L基因在小鼠精子发生中的表达情况以及抑制其表达对GC-2 spd精母细胞增殖和凋亡的影响。方法:提取出生后第8、16、20、28、42天的小鼠睾丸组织RNA,采用逆转录PCR和实时荧光定量PCR(qPCR)检测分析Spag6L基因的表达情况;制... 目的:探讨Spag6L基因在小鼠精子发生中的表达情况以及抑制其表达对GC-2 spd精母细胞增殖和凋亡的影响。方法:提取出生后第8、16、20、28、42天的小鼠睾丸组织RNA,采用逆转录PCR和实时荧光定量PCR(qPCR)检测分析Spag6L基因的表达情况;制备干扰Spag6L基因表达的慢病毒并转染GC-2 spd细胞;qPCR法筛选有效抑制Spag6L基因表达的稳定细胞株;采用细胞计数板和流式细胞术分析Spag6L基因表达抑制对GC-2 spd细胞增殖活性、凋亡和细胞周期的影响;Western印迹检测Spag6L基因沉默对促凋亡因子Bax及抗凋亡因子Bcl-2表达的影响。结果:小鼠出生后第8天睾丸组织中Spag6L基因少量表达,且随睾丸发育而逐渐升高;与对照组相比,GC-2 spd细胞中抑制Spag6L基因表达导致细胞活性降低(P<0.01),细胞阻滞于G1期,并且Bax蛋白表达显著升高而Bcl-2蛋白表达降低(P<0.01),诱导细胞凋亡。结论:Spag6L基因通过调节精母细胞的细胞周期、增殖和凋亡,参与小鼠精子发生。 展开更多
关键词 spag6l RNA干扰 细胞凋亡 精子发生 小鼠
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Spag6L基因真核表达质粒的构建及细胞内的蛋白表达与定位 被引量：1
2
作者 芦帷 张玲 +4 位作者 石玉琴 唐啸 双超凡 闵洁 张志兵 《武汉大学学报（医学版）》 CAS 2016年第5期742-747,760,共7页
目的:构建小鼠Spag6L基因真核表达质粒,并研究其在细胞内的表达与定位。方法:以小鼠睾丸cDNA基因文库为模版,PCR扩增Spag6L基因全长序列,测序正确后亚克隆至pEGFP-N2和pcDNA3真核表达载体中并酶切鉴定,将构建成功的重组表达质粒转染至CO... 目的:构建小鼠Spag6L基因真核表达质粒,并研究其在细胞内的表达与定位。方法:以小鼠睾丸cDNA基因文库为模版,PCR扩增Spag6L基因全长序列,测序正确后亚克隆至pEGFP-N2和pcDNA3真核表达载体中并酶切鉴定,将构建成功的重组表达质粒转染至COS-7与CHO细胞中,Western blot法检测COS-7细胞中SPAG6L蛋白表达,激光共聚焦扫描显微镜观察SPAG6L蛋白在CHO细胞内的定位。结果:重组质粒pEGFPSpag6L和pcDNA3-Spag6L经双酶切后产生的1.5kb的目的插入片段,经测序证实与Spag6L基因一致。GFPSPAG6L融合蛋白分子质量为82kU,SPAG6L蛋白分子质量为56kU。SPAG6L蛋白在CHO细胞中主要定位于细胞质,以微管和囊泡表达为主。结论:构建的pEGFP-Spag6L和pcDNA3-Spag6L真核表达质粒成功,为进一步探究Spag6L基因与Spag6基因的关系以及Spag6L基因在精子发生中的功能与作用奠定了基础。 展开更多
关键词 spag6l基因 精子发生 质粒构建 蛋白表达 细胞定位
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