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利用CRISPR/Cas9技术定向编辑加工番茄SlACS2 被引量：2
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作者 刘江娜 张西英 +1 位作者 白云凤 张爱萍 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期910-918,共9页
加工番茄为呼吸跃变型果实,伴随呼吸跃变产生大量乙烯,即系统Ⅱ乙烯,易使番茄果实过熟,腐烂变质。SlACS2是番茄系统Ⅱ乙烯合成的限速酶,旨在通过CRISPR-Cas9基因组编辑系统修饰该基因,调控系统Ⅱ乙烯过量表达,以迟滞番茄过熟腐烂。利用C... 加工番茄为呼吸跃变型果实,伴随呼吸跃变产生大量乙烯,即系统Ⅱ乙烯,易使番茄果实过熟,腐烂变质。SlACS2是番茄系统Ⅱ乙烯合成的限速酶,旨在通过CRISPR-Cas9基因组编辑系统修饰该基因,调控系统Ⅱ乙烯过量表达,以迟滞番茄过熟腐烂。利用CRISPR/Cas9系统定点编辑加工番茄SlACS2基因,在SlACS2的第2外显子区域设计2个靶位点,构建双靶点的CRISPR/Cas9敲除载体,通过农杆菌介导法转化加工番茄,再生培养获得T0代转基因幼苗,通过PCR扩增卡那霉素抗性基因获得阳性株系。为进一步获得纯合突变,对T1代植株的双靶位点区域进行PCR扩增和测序分析,鉴定SlACS2突变类型。结果发现,从阳性植株的T1后代中鉴定出6种在两个靶位点发生纯合突变类型植株,其中靶位点1突变类型较为丰富,分别发生单碱基的插入及1个、4个、5个和9个碱基的缺失;靶位点2则只有7个碱基的缺失一种编辑类型。结果表明,已成功在加工番茄体内实现对内源SlACS2的定点敲除,获得的基因编辑植株,为进一步筛选耐贮突变体提供材料基础。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 加工番茄 基因编辑 slacs2
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