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检测抗Sj23HD IgG在监测预警哨鼠血吸虫感染早期诊断中的价值 被引量：4
1
作者 王玠 余传信 +7 位作者 张伟 杨坤 殷旭仁 钱春艳 宋丽君 沈双 许永良 杨静 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2012年第8期594-598,共5页
目的探讨检测抗日本血吸虫23ku膜蛋白大亲水肽段(Sj23HD)抗体IgG对血吸虫感染监测预警哨鼠进行早期诊断的价值。方法在潜在高风险血吸虫感染水域投放哨鼠,第一批哨鼠分别于回收后第14、35d采血,分离血清,第35d解剖查虫,第二批哨鼠分别于... 目的探讨检测抗日本血吸虫23ku膜蛋白大亲水肽段(Sj23HD)抗体IgG对血吸虫感染监测预警哨鼠进行早期诊断的价值。方法在潜在高风险血吸虫感染水域投放哨鼠,第一批哨鼠分别于回收后第14、35d采血,分离血清,第35d解剖查虫,第二批哨鼠分别于第21、50d采血,分离血清,第50d解剖查虫。以重组Sj23HD为抗原,通过常规ELISA和Western blot方法检测哨鼠血清抗Sj23HD抗体IgG,并与解剖查虫结果进行比较。结果 ELISA检测第一批预警哨鼠回收后第14d特异性抗体IgG阳性率为0.4%,第35d阳性率为3.7%;Western blot检测阳性率分别为1.7%和3.7%;第35d解剖,成虫阳性率为0.92%。ELISA检测第二批预警哨鼠回收后第21d特异性抗体IgG阳性率为2.4%,第50d阳性率为12.5%,Western blot阳性率分别为为5.2%和12%。第50d解剖,成虫阳性率为8.2%。两批哨鼠回收后14d、21d,Western blot法阳性率均比常规ELISA法高,两种免疫学方法的阳性率与解剖查虫法阳性率比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论抗Sj23HD抗体IgG ELISA和Western blot检测的敏感性高于解剖查虫法,能提前哨鼠预警的时间,提高预警效果;Western blot法敏感性和特异性均显著高于ELISA法,更具实用价值。 展开更多
关键词 血吸虫 日本 sj23hd 特异性抗体IgG 哨鼠 早期诊断 免疫印迹法
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预警哨鼠抗Sj23HD IgG抗体Western blot检测方法的改进及应用 被引量：2
2
作者 王玠 余传信 +8 位作者 杨坤 殷旭仁 宋丽君 沈双 金一 姚媛 陶永辉 许永良 杨静 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2013年第12期1078-1081,共4页
目的改进检测预警哨鼠血清抗日本血吸虫23ku膜蛋白大亲水肽段（Sj23HD）IgG抗体的Western blot方法，并观察其现场应用价值。方法预先制备转印有重组si23HD蛋白的NC膜条，采用化学发光Western blot检测哨鼠血清抗sj23HD IgG，观察方法... 目的改进检测预警哨鼠血清抗日本血吸虫23ku膜蛋白大亲水肽段（Sj23HD）IgG抗体的Western blot方法，并观察其现场应用价值。方法预先制备转印有重组si23HD蛋白的NC膜条，采用化学发光Western blot检测哨鼠血清抗sj23HD IgG，观察方法的稳定性和敏感性，并对2012年江苏省潜在血吸虫感染高风险水域监测预警哨鼠回收后第14、21、35d血样进行检测，同时以ELISA检测方法作为对照，对免疫检测结果与解剖查虫结果进行统计学分析。结果改进后的Western blot操作简便，比常规方法节省142周时间。预制NC膜条至少可低温保存6个月，其敏感性与新鲜制备的NC膜条的敏感性相似。使用改进后的Western blot方法检测预警哨鼠14、21和35d血清标本，阳性率分别为0．90％，3．50％和5．06％，ELISA阳性率分别为0．45％、3．00％和5．06％，差异无统计学意义（P〉0．05）。两种免疫学方法的敏感性均高于解剖查虫法。结论改进后的Western blot操作简便，敏感性高，可用于预警哨鼠血吸虫感染检测。 展开更多
关键词 血吸虫 日本 sj23hd 特异性IGG抗体 哨鼠 早期诊断 WESTERN BLOT 简化
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酿酒酵母表达Sj23HD-HSA融合蛋白与免疫反应性分析 被引量：5
3
作者 张伟 余传信 +6 位作者 杨建良 冯炜 殷旭仁 宋丽君 王玠 钱春艳 柯雪丹 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期653-658,共6页
目的采用酵母表达技术制备日本血吸虫中国大陆株23kDa膜蛋白分子大亲水肽段(Sj23HD)与人血清白蛋白(HSA)成熟肽的融合蛋白(Sj23HD-HSA),并分析其免疫反应性。方法应用重叠PCR方法构建编码Sj23HD-HSA融合蛋白的融合基因片段,通过TA克隆和... 目的采用酵母表达技术制备日本血吸虫中国大陆株23kDa膜蛋白分子大亲水肽段(Sj23HD)与人血清白蛋白(HSA)成熟肽的融合蛋白(Sj23HD-HSA),并分析其免疫反应性。方法应用重叠PCR方法构建编码Sj23HD-HSA融合蛋白的融合基因片段,通过TA克隆和DNA测序确定构建的融合蛋白基因序列的正确性。将融合基因定向插入酵母表达质粒pWX530中构建分泌型重组表达载体Sj23HD-HSA/pWX530。重组质粒转化酿酒酵母感受态细胞,在亮氨酸营养缺陷型培养基上筛选含重组质粒的酵母转化子菌落。对转化子酵母进行发酵培养,通过SDSPAGE分析酵母培养液上清中的蛋白成分,离子交换层析纯化培养上清中的Sj23HD-HSA蛋白成分。经免疫印迹分别与血吸虫病人、华支睾吸虫病人和健康人血清反应,确定酵母表达的Sj23HD-HSA融合蛋白的免疫反应性。结果 DNA序列分析显示,编码外分泌型Sj23HD-HSA融合蛋白的融合基因构建成功。含有Sj23HD-HSA/pWX530重组表达质粒的酵母转化子可以在非诱导条件下表达外分泌型可溶性的Sj23HD-HSA融合蛋白,其分子量大小与预期大小(73kDa)相近。免疫印迹分析结果显示,Sj23HD-HSA融合蛋白可以特异性地被血吸虫病人血清所识别,但与华支睾吸虫病人血清、健康人血清不发生反应。结论 Sj23HD-HSA融合蛋白被成功制备,并具有良好的特异性和免疫反应性,是一种有潜在价值的血吸虫病免疫诊断抗原。 展开更多
关键词 日本血吸虫 sj23hd-HSA融合蛋白 酵母表达 免疫反应性
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