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日本血吸虫Sj22.6-LHD-Sj23融合基因的克隆及原核表达 被引量：2
1
作者 付媛 卢福庄 +4 位作者 石团员 顾昀 俞国乔 陆国林 张雪娟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期904-907,共4页
为获得具有良好抗原性的日本血吸虫重组蛋白,本研究设计了两对特异性引物,以日本血吸虫mRNA为模板,RT-PCR方法分别克隆基因片段Sj22.6ku和LHD-Sj23,以重叠延伸PCR方法将两个片段连接,构建原核重组表达质粒pET28-Sj22.6-LHD-Sj23;该重组... 为获得具有良好抗原性的日本血吸虫重组蛋白,本研究设计了两对特异性引物,以日本血吸虫mRNA为模板,RT-PCR方法分别克隆基因片段Sj22.6ku和LHD-Sj23,以重叠延伸PCR方法将两个片段连接,构建原核重组表达质粒pET28-Sj22.6-LHD-Sj23;该重组质粒在大肠杆菌Rosetta DE3中表达后所获得的融合蛋白Sj22.6-LHD-Sj23分子量约为35 ku。Western blot鉴定结果表明该重组蛋白有良好的免疫原性,为进一步研制日本血吸虫病分子诊断试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 日本血吸虫 sj22.6ku蛋白 LHD-Sj23蛋白 融合蛋白 重叠延伸PCR
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日本血吸虫重组蛋白Sj22.6、LHD-Sj23、2LHD-Sj23的表达和抗原性比较
2
作者 付媛 石团员 +7 位作者 蒲克俊 舒琦艳 卢福庄 帅江冰 张雪娟 莫虹斐 杨富文 何永强 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2017年第2期72-76,共5页
日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)膜相关蛋白Sj22.6和Sj23大亲水区多肽(LHD-Sj23)都具有良好的抗原性,可用于日本血吸虫病的免疫学诊断。本研究通过RT-PCR技术扩增了Sj22.6和LHD-Sj23基因片段,重叠延伸PCR方法融合了2个LHD-Sj23的... 日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)膜相关蛋白Sj22.6和Sj23大亲水区多肽(LHD-Sj23)都具有良好的抗原性,可用于日本血吸虫病的免疫学诊断。本研究通过RT-PCR技术扩增了Sj22.6和LHD-Sj23基因片段,重叠延伸PCR方法融合了2个LHD-Sj23的片段,构建了pET28-Sj22.6、pET28-LHD-Sj23以及pET28-2LHD-Sj23原核表达质粒,在大肠杆菌(Transetta DE3)中表达,获得了rSj22.6、rLHD-Sj23和r2LHD-Sj23三种重组蛋白。用Dot-ELISA方法检测牛日本血吸虫阴阳性血清各10份,比较其敏感性和特异性,结果表明rLHD-Sj23具有较好的效果,为进一步研究利用重组蛋白进行血吸虫血清学诊断奠定基础。 展开更多
关键词 日本血吸虫 sj22.6 LHD-Sj23 2LHD-Sj23 斑点酶联免疫吸附试验
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日本血吸虫(中国大陆株)22.6 ku抗原编码基因的核酸疫苗pCMV/Sj22.6的构建 被引量：2
3
作者 苏川 马磊 +3 位作者 范乐明 陈淑贞 张兆松 吴观陵 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CSCD 1999年第5期349-352,共4页
目的　探索日本血吸虫 (中国大陆株 ) 2 2 .6ku抗原 ( Sj2 2 .6)编码基因用作核酸疫苗的可行性。方法　用新设计的引物以 PCR法对 Sj2 2 .6编码基因进行改造 ,然后亚克隆入真核表达载体 p CMV -β并转化入大肠杆菌 JM 10 9。结果　提取... 目的　探索日本血吸虫 (中国大陆株 ) 2 2 .6ku抗原 ( Sj2 2 .6)编码基因用作核酸疫苗的可行性。方法　用新设计的引物以 PCR法对 Sj2 2 .6编码基因进行改造 ,然后亚克隆入真核表达载体 p CMV -β并转化入大肠杆菌 JM 10 9。结果　提取重组质粒经酶切分析 ,筛选出了含有正向插入片段的阳性重组质粒。 展开更多
关键词 日本血吸虫 抗原 pCMV-β 核酸疫苗 编码
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日本血吸虫22.6kDa有效抗原表位对小鼠免疫保护性的研究 被引量：14
4
作者 胡雪梅 张兆松 +6 位作者 李春林 吴海玮 苏川 季旻珺 王勇 刘丰 吴观陵 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2001年第2期86-89,共4页
目的　研究日本血吸虫 (中国大陆株 ) 2 2 .6 k Da有效抗原表位对小鼠的免疫保护性 ,预测其在抗血吸虫感染中的作用。方法　用纯化的抗 Sj2 2 .6 k Da的多克隆抗体 Ig G对噬菌体 12肽库进行 5轮免疫学筛选 ,挑取克隆 ,经 Western- blot... 目的　研究日本血吸虫 (中国大陆株 ) 2 2 .6 k Da有效抗原表位对小鼠的免疫保护性 ,预测其在抗血吸虫感染中的作用。方法　用纯化的抗 Sj2 2 .6 k Da的多克隆抗体 Ig G对噬菌体 12肽库进行 5轮免疫学筛选 ,挑取克隆 ,经 Western- blot免疫识别、动物初筛及序列分析后 ,将获得的阳性克隆免疫 BABL/ c小鼠。结果　共获得 4个有效抗原表位 ,各免疫组和对照组相比 ,4种表位混合免疫组小鼠 ,获得了 39.5 % (P<0 .0 5 )的减虫率及 5 7.1% (P<0 .0 1)肝总减卵率 ;4种表位分别免疫4组小鼠 ,各组分别获得了 2 7.5 % (P<0 .0 5 )、5 .4% (P<0 .0 5 )、2 2 .8% (P<0 .0 5 )、11.6 % (P<0 .0 5 )的减虫率及 41.4% (P<0 .0 1)、2 9.7% (P<0 .0 5 )、32 .2 % (P<0 .0 5 )、30 .9% (P<0 .0 5 )肝总减卵率。结论　所获得 4种有效抗原表位均可诱导宿主抗血吸虫感染的部分保护力 。 展开更多
关键词 日本血吸虫 噬菌体肽库 表位 sj22.6kDa 免疫保护
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用噬菌体随机肽库鉴定日本血吸虫22.6kDa抗原分子的表位 被引量：8
5
作者 胡雪梅 张兆松 +5 位作者 吴海玮 苏川 季旻珺 王勇 陈淑贞 吴观陵 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期164-167,共4页
目的　筛选和鉴定日本血吸虫 (中国大陆株 ) 2 2 .6kDa抗原 (Sj2 2 .6)的表位。　 方法　用纯化的抗Sj2 2 .6的多克隆抗体IgG对噬菌体十二肽库进行 5轮免疫学筛选 ,挑取克隆 ;采用Westernblotting免疫识别 ,将获得的阳性克隆免疫小鼠 ,... 目的　筛选和鉴定日本血吸虫 (中国大陆株 ) 2 2 .6kDa抗原 (Sj2 2 .6)的表位。　 方法　用纯化的抗Sj2 2 .6的多克隆抗体IgG对噬菌体十二肽库进行 5轮免疫学筛选 ,挑取克隆 ;采用Westernblotting免疫识别 ,将获得的阳性克隆免疫小鼠 ,并采用dot ELISA筛选能刺激小鼠产生较高滴度抗Sj2 2 .6抗体的阳性克隆 ;测定核苷酸序列 ,分析其表位与Sj2 2 .6抗原的同源性。　结果　经 5轮免疫学筛选后挑取的 1 4个克隆 ,用Westernblotting方法均能被抗Sj2 2 .6抗体识别。经动物免疫初步实验筛选 ,共获得 6个免疫原性较强的阳性克隆 ,测序结果获得 4种不同表位 ,其中 1种表位与Sj2 2 .6抗原具有较高的同源性 ,其余 3种表位与其无一级结构的同源性。　结论　获得的 4种日本血吸虫中国大陆株抗原表位 ,1种可能为结构表位 。 展开更多
关键词 22.6kDa抗原 噬菌体肽库 表位 日本血吸虫 sj22.6抗原 血吸虫疫苗
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日本血吸虫童虫文库免疫筛选及其高丰度表达膜蛋白初步鉴定 被引量：4
6
作者 朱绍春 赵志荣 +2 位作者 雷黎 张林杰 沈际佳 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期106-110,共5页
目的获得新的可能具有诊断意义的血吸虫蛋白分子并对其鉴定。方法免疫学方法筛选日本血吸虫童虫cDNA文库,对获得的阳性克隆进行测序分析,设计引物体外扩增目的蛋白基因,将其亚克隆入原核表达载体pET28a中,并转化大肠埃希菌BL21,进行诱... 目的获得新的可能具有诊断意义的血吸虫蛋白分子并对其鉴定。方法免疫学方法筛选日本血吸虫童虫cDNA文库,对获得的阳性克隆进行测序分析,设计引物体外扩增目的蛋白基因,将其亚克隆入原核表达载体pET28a中,并转化大肠埃希菌BL21,进行诱导表达,最后用Westernblotting鉴定。结果获得34个阳性克隆,选择其中24个进行测序,其中13个是日本血吸虫相对分子质量(Mr)为22600膜相关蛋白(Sj22.6)基因。Sj22.6基因在体外被成功扩增,并被亚克隆入pET28a中进行表达。WesternBlotting结果显示,菌体表达的条带可以被感染兔血清以及血吸虫患者血清识别。结论Sj22.6膜相关蛋白基因在童虫cDNA文库中可以被高频率筛出,融合蛋白Sj22.6成功地在BL21中表达并具有免疫反应性。 展开更多
关键词 日本血吸虫 童虫 CDNA文库 免疫筛选 sj22.6
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日本血吸虫(中国大陆株)22.6kDa抗原编码基因的核酸疫苗研究 被引量：6
7
作者 苏川 马磊 +7 位作者 王荣芝 邵莉君 吴海玮 沈蕾 范乐明 陈淑贞 张兆松 吴观陵 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1999年第6期6-10,共5页
为探索日本血吸虫（中国大陆株）２２．６ｋＤａ 抗原（Ｓｊ２２．６）编码基因用作核酸疫苗的可行性，将ｐＣＭＶ／Ｓｊ２２．６基因重组质粒经肌肉注射免疫了一批ＢＡＬＢ／ｃ小鼠并进行攻击感染试验，结果表明此重组质粒能在小鼠体... 为探索日本血吸虫（中国大陆株）２２．６ｋＤａ 抗原（Ｓｊ２２．６）编码基因用作核酸疫苗的可行性，将ｐＣＭＶ／Ｓｊ２２．６基因重组质粒经肌肉注射免疫了一批ＢＡＬＢ／ｃ小鼠并进行攻击感染试验，结果表明此重组质粒能在小鼠体内持续存在、稳定表达并诱导小鼠产生特异性的抗Ｓｊ２２．６ 抗体。 展开更多
关键词 日本血吸虫 pCMV-β 核酸疫苗 编码基因 sj22.6
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日本血吸虫22.6kD重组抗原二步金标免疫渗滤法诊断家畜血吸虫病的初步研究 被引量：1
8
作者 付媛 何永强 +4 位作者 卢福庄 顾昀 石团员 冯尚连 张雪娟 《浙江农业科学》 2011年第5期1166-1168,共3页
以胶体金标记的日本血吸虫重组抗原GST-Sj22.6为探针,检测家畜血吸虫抗体,建立重组抗原金标免疫渗滤法(RAg-T-DIGFA)。该法可以检测出人工感染血吸虫尾蚴28 d和21 d以上的阳性牛和兔血纸抗体,用该法检测肝片吸虫、蛔虫、弓形虫、旋毛虫... 以胶体金标记的日本血吸虫重组抗原GST-Sj22.6为探针,检测家畜血吸虫抗体,建立重组抗原金标免疫渗滤法(RAg-T-DIGFA)。该法可以检测出人工感染血吸虫尾蚴28 d和21 d以上的阳性牛和兔血纸抗体,用该法检测肝片吸虫、蛔虫、弓形虫、旋毛虫病血清抗体,无交叉反应。与T-DIGFA法阳性符合率为100%,阴性符合率为100%。血吸虫抗原胶体金在4～8℃保存期可达6个月、室温保存期为3个月。重组蛋白金标免疫渗滤法具有抗原容易制备和良好的敏感性、特异性、重复性和稳定性,适合于基层单位和现场进行家畜血吸虫病抗体的快速诊断。 展开更多
关键词 日本血吸虫病 sj22.6kD 重组抗原二步金标免疫渗滤法
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日本血吸虫22.6ku膜相关蛋白基因的克隆及原核表达 被引量：2
9
作者 付媛 张雪娟 +5 位作者 赵俊龙 何永强 刘恩勇 卢福庄 江涛 冯尚连 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期357-360,共4页
为了得到重组的日本血吸虫22.6 ku膜相关蛋白,研究设计了1对引物,以日本血吸虫mRNA为模板,用RT-PCR方法克隆了576 bp的22.6 ku膜相关蛋白基因片段,测序结果表明,该片段与已公布的Sj22.6基因序列(U75510)同源性达到99%。将该基因片段插... 为了得到重组的日本血吸虫22.6 ku膜相关蛋白,研究设计了1对引物,以日本血吸虫mRNA为模板,用RT-PCR方法克隆了576 bp的22.6 ku膜相关蛋白基因片段,测序结果表明,该片段与已公布的Sj22.6基因序列(U75510)同源性达到99%。将该基因片段插入原核表达载体pGEX-KG构建了原核表达质粒pGEX-Sj22.6,在大肠杆菌BL21 codn plus中表达获得了约48 ku的融合蛋白,经Western-blot检测,该重组蛋白具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 日本血吸虫 22.6ku膜相关蛋白 克隆表达
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日本血吸虫22.6kDa膜相关蛋白Th1型表位的免疫学鉴定
10
作者 王慧 陶方方 +5 位作者 孙新娟 刘丰 王勇 苏川 吴海玮 张兆松 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期11-14,共4页
目的鉴定日本血吸虫22.6 kDa膜蛋白（Sj22.6）的Th1型表位,为构建短肽疫苗奠定基础。方法采用合成肽Sj22.6-P4、无关肽（对照）及PBS免疫C57BL/6小鼠2次（间隔7 d）,末次免疫后7～10 d取脾分离单个核细胞,用合成肽Sj22.6-P4、无关肽及PB... 目的鉴定日本血吸虫22.6 kDa膜蛋白（Sj22.6）的Th1型表位,为构建短肽疫苗奠定基础。方法采用合成肽Sj22.6-P4、无关肽（对照）及PBS免疫C57BL/6小鼠2次（间隔7 d）,末次免疫后7～10 d取脾分离单个核细胞,用合成肽Sj22.6-P4、无关肽及PBS刺激培养,3H-TdR掺入法检测淋巴细胞的增殖效果,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测其细胞培养上清中IFNγ-、IL-4及IL-2水平。运用流式细胞技术三色标记法检测经合成肽Sj22.6-P4、无关肽及PBS免疫2次的C57BL/6小鼠脾淋巴细胞内的Th1、Th2细胞因子。结果合成肽Sj22.6-P4可刺激经该抗原肽免疫2次的C57BL/6小鼠淋巴细胞增殖,与PBS组相比,增殖指数（SI）均〉2。与无关肽对照组相比,细胞培养上清中IL-2、IFN-γ分泌水平增高,其中IL-2分泌水平差异有统计学意义（P〈0.05）,IFN-γ差异无统计学意义（P〉0.05）,而IL-4分泌水平明显降低（P〈0.05）。合成肽Sj22.6-P4免疫组小鼠脾脏CD4＋T细胞中分泌IFN-γ细胞的百分比显著增高,分泌IL-4细胞的百分比显著降低（P均〈0.05）。结论合成肽Sj22.6-P4是C57BL/6小鼠特异的Th1型表位。 展开更多
关键词 日本血吸虫 22.6kDa膜蛋白 Th1型表位 免疫学鉴定
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