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单核细胞增生李斯特菌SigmaB、PrfA因子对生物被膜形成影响的研究 被引量：5
1
作者 张强 冯飞飞 +2 位作者 王莉 冯莹颖 罗勤 《医学研究杂志》 2010年第10期19-22,共4页
目的探讨单核细胞增生李斯特菌(listeria monocytogenes,LM)sigmaB、prfA基因与生物被膜(biofilm,BF)形成的关系。方法利用微孔板技术,体外建立LM野生菌株EGD、ΔsigmaB、ΔprfA及无害李斯特菌(listeria innocua)生物被膜模型,经1%结晶... 目的探讨单核细胞增生李斯特菌(listeria monocytogenes,LM)sigmaB、prfA基因与生物被膜(biofilm,BF)形成的关系。方法利用微孔板技术,体外建立LM野生菌株EGD、ΔsigmaB、ΔprfA及无害李斯特菌(listeria innocua)生物被膜模型,经1%结晶紫溶液染色,间接反映生物被膜的形成情况,并用倒置显微镜直接观察4种菌株生物被膜的形成情况。结果①利用结晶紫染色与倒置显微镜观察相结合的方法,实现了对上述4种菌株生物被膜形成差异的比较;②结晶紫染色结果显示:在595nm波长下,EGD光吸收值最高,ΔsigmaB与ΔprfA菌株次之,无害李斯特菌最低。统计学分析结果显示,EGD与ΔsigmaB、ΔprfA菌株差异不显著(P>0.05),EGD与无害李斯特菌之间存在显著差异(P<0.01);③倒置显微镜观察结果显示:EGD能形成致密的链网状膜结构,交联度较高;ΔsigmaB、ΔprfA形成的链网状膜结构相对比较疏松,交联度稍低;无害李斯特菌几乎没有成型的链网状膜结构形成。结论实验结果表明LM生物被膜的形成与调控因子sigmaB(σB)、prfA的作用有关,并且LM与无害李斯特菌之间生物被膜的形成差异暗示着生物被膜的形成可能与LM的致病性有关。 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特菌 生物被膜 sigmab(σB) PrfA 无害李斯特菌
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单核细胞增生李斯特菌新疆野毒株XS5 SigmaB操纵子的克隆、序列分析及其编码蛋白结构预测 被引量：1
2
作者 杨丽红 张再超 +6 位作者 孟庆玲 乔军 才学鹏 蔡扩军 王为升 王俊伟 陈创夫 《中国农学通报》 CSCD 2012年第32期72-77,共6页
为了解单核细胞增生李斯特茵（Listeda monocytogenes LM．）新疆野毒株XS5SigmaB操纵子的分子生物学特征。对LM-XS5的SigmaB操纵子部分基因序列进行了克隆与序列分析，预测该操纵子各基因编码蛋白质的二三级结构及功能活性位点，分析... 为了解单核细胞增生李斯特茵（Listeda monocytogenes LM．）新疆野毒株XS5SigmaB操纵子的分子生物学特征。对LM-XS5的SigmaB操纵子部分基因序列进行了克隆与序列分析，预测该操纵子各基因编码蛋白质的二三级结构及功能活性位点，分析其同源性。结果表明：成功扩增出3000bp的SigmaB操纵子片段，序列分析显示该片段中包含Rsb认RsbW,RsbX和SigmaB4个基因，它们编码的蛋白质含有不同的功能活性位点，其中RsbV的5-102位AA为“STAS-抗-抗-SigamB因子”，咫6Ⅳ的43-157位AA间为HATPasec功能域，RsbX的32-198位AA间为PP2Cc超家族区域，SigmaB的8-264位AA为RNA聚合酶全酶中的SigmaB因子的区域。LM-XS5与其他3种革兰氏阳性茵的SigmaB基因的同源率在50％左右，与LM参考株的同源率在92．18％-100％之间。 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特菌 sigmab操纵子 序列分析 蛋白结构预测
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σ~B因子在单核细胞增生李斯特菌环境应激反应中的调控作用 被引量：5
3
作者 杨丽红 张再超 +6 位作者 孟庆玲 乔军 才学鹏 蔡扩军 王为升 王俊伟 陈创夫 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期441-446,共6页
为了解σB因子在单核细胞增生李斯特菌(LM)环境应激反应中的调控作用,笔者用基因重叠延伸PCR(SOE-PCR)和同源重组的方法构建了SigmaB基因缺失株,分析该缺失株在不同温度、pH和高盐压力条件下的应激反应能力及应激相关基因的转录水平。... 为了解σB因子在单核细胞增生李斯特菌(LM)环境应激反应中的调控作用,笔者用基因重叠延伸PCR(SOE-PCR)和同源重组的方法构建了SigmaB基因缺失株,分析该缺失株在不同温度、pH和高盐压力条件下的应激反应能力及应激相关基因的转录水平。结果表明:与野毒株相比,SigmaB基因缺失株在压力条件下的应激能力减弱,rsbV、rsbW、hpt、clpP、ctsR等环境应激相关基因转录水平均降低。本研究提示σB因子在LM温度、pH和高盐环境应激反应中具有重要的调控作用,这为揭示LM环境应激反应的分子机制及药物作用新靶点的筛选提供了重要的理论依据。 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特菌 sigmab基因 环境应激反应 调控作用
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Sigma B对单核细胞增生李斯特菌耐受抗生素作用的影响 被引量：4
4
作者 王莉 冯飞飞 +3 位作者 张强 冯晓琴 尹晓蛟 罗勤 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2011年第2期1-6,共6页
单核细胞增生李斯特菌是重要的革兰阳性食源性致病菌。近年来的报道显示出该菌耐受抗生素的能力有不断增强的趋势,为了探讨其耐药机制,对Sigma B(σB,李斯特菌中应对环境胁迫的主要调控因子)在抗生素耐受性中的作用进行了初步研究。检... 单核细胞增生李斯特菌是重要的革兰阳性食源性致病菌。近年来的报道显示出该菌耐受抗生素的能力有不断增强的趋势,为了探讨其耐药机制,对Sigma B(σB,李斯特菌中应对环境胁迫的主要调控因子)在抗生素耐受性中的作用进行了初步研究。检测和比较单核细胞增生李斯特菌标准菌株EGDe和其σB缺失突变菌株EGDeΔsigB对盘尼西林青霉素、氨苄西林青霉素、利福平、硫酸庆大霉素、四环素盐酸和红霉素6种抗生素的最小抑菌浓度(MIC);在测定的MIC的基础上,利用MTT(噻唑蓝活体染色法)法比较EGDe和EGDeΔsigB在1×MIC、2×MIC和8×MIC的氨苄西林青霉素、红霉素和利福平3种抗生素中的生长活性。EGDe对盘尼西林青霉素(0.16μg/mL)、四环素盐酸(0.25μg/mL)和硫酸庆大霉素(0.5μg/mL)的MIC高于EGDeΔsigB(分别为0.08、0.125和0.125μg/mL);而对氨苄西林青霉素、红霉素和利福平的MIC 2种菌株没有差别,分别为0.19、0.125和0.032μg/mL;与EGDe相比,EGDeΔsigB在氨苄西林青霉素、红霉素和利福平培养基中的生长活性较差,对抗生素的抑制更为敏感,而且随着这3种抗生素浓度的增加,其抑制程度也随之增强。Sigma B在单核细胞增生李斯特菌对抗生素的耐受中起到重要调节作用。 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特菌 抗生素 耐受性 sigmab 最小抑菌浓度(MIC)
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Sigma B基因缺失对单核细胞增生性李斯特菌毒力的影响 被引量：1
5
作者 杨丽红 孟庆玲 +6 位作者 乔军 才学鹏 张再超 蔡扩军 王为升 王俊伟 陈创夫 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期92-97,共6页
为了解缺失SigmaB基因对单核细胞增生性李斯特菌(LM)的毒力影响。通过体外生长试验、巨噬细胞RAW264.7的粘附与侵袭试验、小鼠肝脾载菌量试验、毒力基因转录水平试验、小鼠LD50试验来研究缺失株(LM-XS5-△SigmaB)的毒力变化。结果显示,... 为了解缺失SigmaB基因对单核细胞增生性李斯特菌(LM)的毒力影响。通过体外生长试验、巨噬细胞RAW264.7的粘附与侵袭试验、小鼠肝脾载菌量试验、毒力基因转录水平试验、小鼠LD50试验来研究缺失株(LM-XS5-△SigmaB)的毒力变化。结果显示,与野毒株相比,缺失株体外生长能力减弱、侵袭率和粘附率降低,小鼠肝脾载菌量显著减少,毒力基因(inlA、inlB、hly、prfA、actA)的转录水平降低,而小鼠LD50升高。可见,SgmaB基因对LM的毒力具有重要的调控作用,为LM基因缺失疫苗和活疫苗载体的研发可资借鉴。 展开更多
关键词 单核细胞增生性李斯特菌 sigmab基因 侵袭率 粘附率 LD50
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