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木碱蓬磷酸乙醇胺甲基转移酶基因SdNMT的原核表达及分离纯化
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作者 马盼盼 祝建波 孙国清 《西北农业学报》 北大核心 2025年第8期1476-1483,共8页
磷酸乙醇胺甲基转移酶是一种S-腺苷甲硫氨酸依赖性甲基转移酶,是催化磷酸乙醇胺三步甲基化合成磷酸胆碱的关键酶,而磷酸胆碱是植物中磷脂酰胆碱和甘氨酸甜菜碱生物合成的重要前体。木碱蓬转录组测序分析结果显示,磷酸乙醇胺甲基转移酶... 磷酸乙醇胺甲基转移酶是一种S-腺苷甲硫氨酸依赖性甲基转移酶,是催化磷酸乙醇胺三步甲基化合成磷酸胆碱的关键酶,而磷酸胆碱是植物中磷脂酰胆碱和甘氨酸甜菜碱生物合成的重要前体。木碱蓬转录组测序分析结果显示,磷酸乙醇胺甲基转移酶基因在盐胁迫下显著上调表达。本研究以800 mmol/L NaCl处理1 d的cDNA为模板扩增获得木碱蓬磷酸乙醇胺甲基转移酶基因SdNMT的编码区序列,构建原核表达载体pET28a-SdNMT并导入大肠杆菌菌株BL21。对重组蛋白进行IPTG诱导表达、表达条件筛选优化及可溶性分析,采用镍亲和层析柱纯化目标蛋白。结果显示,成功克隆的SdNMT基因编码区序列长1 485 bp,编码494个氨基酸,预测蛋白分子质量为56.56 ku,理论等电点为5.52。重组蛋白在大肠杆菌中得到可溶性表达。1.0 mmol/L IPTG,15℃培养振荡16 h是目的蛋白诱导表达的最佳条件。通过Ni NTA beads 6FF纯化获得在毫克级范围内获得纯度达85%的SdNMT蛋白。研究结果为蛋白酶活性检测提供足够的材料,为深入分析SdNMT在植物生长、发育及环境胁迫响应中的功能奠定基础。 展开更多
关键词 木碱蓬 sdnmt 原核表达 蛋白纯化
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