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痰标本mecA和Sa442基因的定量PCR检测结果与MRSA培养结果的关联 被引量：3
1
作者 蔡骁垚 林堃银 +3 位作者 孙涛 张立 闫佩毅 金姝 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期350-354,共5页
目的·通过定量检测痰标本中mecA和Sa442基因,分析耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的感染状态以及临床意义。方法·痰标本经裂解获取DNA,定量PCR(quantitative PCR,qPCR)绝对定量... 目的·通过定量检测痰标本中mecA和Sa442基因,分析耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的感染状态以及临床意义。方法·痰标本经裂解获取DNA,定量PCR(quantitative PCR,qPCR)绝对定量检测mecA和Sa442基因;结合痰标本临床常规培养鉴定结果,分析qPCR定量值的临床意义。结果·筛选1775例合格痰标本,以细菌培养鉴定结果为金标准,qPCR检测的灵敏度为92.19%(59/64),特异度为89.60%(1533/1711),阳性预测值为24.89%(59/237),阴性预测值达到99.67%(1533/1538)。受试者操作特征曲线分析结果显示,mecA定量对数值和C_(T)值判断MRSA培养阳性的曲线下面积分别为0.755和0.770,最佳临界值分别为5.59和27.1,敏感度分别为72.4%和73.0%,特异度分别为70.2%和74.1%。仅Sa442基因定值为阳性时,细菌培养以甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌为主。当mecA定量对数值>5.59或C_(T)值<27.1时,可以预判MRSA培养阳性。结论·痰标本中mecA和Sa442基因的定量结果,可用于早期快速排除MRSA的定植和感染,协助分析不同菌种培养结果的趋势。 展开更多
关键词 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 定量PCR MECA sa442 痰标本
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金黄色葡萄球菌实时荧光PCR快速检测方法的建立 被引量：11
2
作者 李丹丹 徐义刚 +3 位作者 邱索平 王昱 高会江 高慎阳 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期198-201,共4页
为建立检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)的快速检测方法,以SA Sa442基因为靶基因设计合成引物及Taq Man探针,建立了实时荧光PCR快速检测SA的方法。结果显示,对16株试验菌株进行荧光PCR检测,只有SA检测为阳性,表明该检测方... 为建立检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)的快速检测方法,以SA Sa442基因为靶基因设计合成引物及Taq Man探针,建立了实时荧光PCR快速检测SA的方法。结果显示,对16株试验菌株进行荧光PCR检测,只有SA检测为阳性,表明该检测方法特异性强;该方法的灵敏度为7.5 CFU/m L,利用该检测方法对采集的175份样品进行检测,共计检出5份SA阳性样品,与国标法(GB 4789.10—2010)检测结果一致,显示了良好的实用性。该检测方法灵敏度高、特异性强,具有良好的实用性。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 sa442基因 实时荧光PCR
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金黄色葡萄球菌DPO-PCR快速检测方法的建立与应用 被引量：4
3
作者 李丹丹 徐义刚 +3 位作者 邱索平 王昱 高会江 高慎阳 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期419-423,共5页
为建立检测金黄色葡萄球菌（SA）的PCR方法,以SA Sa442基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸引物（DPO）,建立了SA的DPO-PCR快速检测方法。结果显示,在45~65℃退火温度范围内均能高效地扩增出目的基因,表明DPO引物对退火温度不敏感,该... 为建立检测金黄色葡萄球菌（SA）的PCR方法,以SA Sa442基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸引物（DPO）,建立了SA的DPO-PCR快速检测方法。结果显示,在45~65℃退火温度范围内均能高效地扩增出目的基因,表明DPO引物对退火温度不敏感,该方法的灵敏度为2.27×102cfu/m L,同时DPO引物特异性强,与其他菌株无非特异性扩增反应。利用该方法和行标法分别对采集的175份样品进行检测,均共计检出13份SA阳性样品,两者符合率为100%。作者建立的DPO-PCR方法设计简单、特异性强,具有良好的实用性,为快速准确检测SA提供新的检测手段。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 sa442基因 DPO-PCR
暂未订购
食品中金黄色葡萄球菌DNA环介导恒温扩增快速检测方法的建立与应用 被引量：23
4
作者 徐义刚 李苏龙 +2 位作者 李丹丹 姜艳春 谢晓峰 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1655-1663,共9页
【目的】金黄色葡萄球菌是一种人畜共患病的重要致病菌,主要经食品传播,引起食物中毒、组织及器官的化脓性炎症,建立快速、准确的检测方法对预防和控制金黄色葡萄球菌的传染具有重要意义。【方法】DNA环介导恒温扩增(loop-mediatedisoth... 【目的】金黄色葡萄球菌是一种人畜共患病的重要致病菌,主要经食品传播,引起食物中毒、组织及器官的化脓性炎症,建立快速、准确的检测方法对预防和控制金黄色葡萄球菌的传染具有重要意义。【方法】DNA环介导恒温扩增(loop-mediatedisothermalamplification,LAMP)是一种新颖的快速、高灵敏核酸扩增技术,本研究利用该技术建立金黄色葡萄球菌LAMP检测方法。基于金黄色葡萄球菌高度保守的Sa442基因序列,设计4条特异性LAMP扩增引物,两条外引物F3和B3及两条内引物FIP和BIP,在BstDNAPolymerase作用下,65℃恒温水浴中,对26个种类共45株细菌进行扩增,所试的20株金黄色葡萄球菌均为LAMP阳性,说明所设计的LAMP引物具有高度特异性。【结果】本LAMP方法对纯培养的金黄色葡萄球菌检测灵敏度为25CFU/mL,对污染食品中金黄色葡萄球菌的检测灵敏度为42CFU/g,40—60min内即可完成检测。检验检疫实践证明,利用本LAMP方法对958份肉类、蛋奶及其制品、人工污染样品等进行检测,检出115份LAMP阳性,与国标法(GB)检测结果一致。【结论】本LAMP方法操作简便、特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 sa442基因 环介导恒温扩增 快速检测
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荧光PCR高分辨率熔解曲线分析法检测食源性金黄色葡萄球菌 被引量：1
5
作者 黄秀丽 章丽 +2 位作者 奉夏平 肖性龙 余以刚 《食品科技》 CAS 北大核心 2014年第3期288-294,共7页
以sa442为靶基因,结合特异性引物,建立了一种快速检测鉴定食品中常见的金黄色葡萄球菌的HRM(高分辨率熔解曲线)real-time PCR法,对该法进行特异性验证,敏感性分析及重复性评价,并实现了其在人工染菌鸡肉样本检测的初步应用。结果表明,... 以sa442为靶基因,结合特异性引物,建立了一种快速检测鉴定食品中常见的金黄色葡萄球菌的HRM(高分辨率熔解曲线)real-time PCR法,对该法进行特异性验证,敏感性分析及重复性评价,并实现了其在人工染菌鸡肉样本检测的初步应用。结果表明,该方法具有较强的特异性,对8株金黄色葡萄球菌目标菌株均产生特异性溶解曲线,Tm值为(77.34±0.287)℃,而沙门氏菌、单增李斯特菌、大肠杆菌O157等8种肉产品中常见的食源性非目标病原菌均不产生扩增曲线;灵敏度高,该法对阳性重组质粒PMD18-sa442的检测限为2.00×102 copies/mL;重复性强,同一样品于试验内及试验间的变异系数分别为(0.76±0.52)%和(1.34±0.45)%;且该法可初步应用于人工染菌鸡肉样(染菌量5、10、20 cfu/25 g样品匀浆)的检测。所建立的金黄色葡萄球菌HRM real-time PCR法具有特异性好、灵敏度高、重复性强的特点,能应用于食品样本的检测,为金黄色葡萄球菌的快速检测提供了新的方法。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 sa442基因 高分辨率熔解曲线 检测 荧光PCR
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