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三氧化二砷对HepG2细胞STMN1表达的影响及沉默STMN1对HepG2细胞凋亡的促进作用 被引量：3
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作者 孙涛 余祖启 +3 位作者 张劲夫 范正军 黄娟 赵龙栓 《中华实用诊断与治疗杂志》 2023年第7期654-660,共7页
目的观察三氧化二砷(As_(2)O_(3))对肝癌HepG2细胞的增殖抑制情况及对STMN1表达的影响,探讨沉默STMN1表达对HepG2细胞凋亡的促进作用。方法取对数生长期HepG2细胞,应用0、0.5、1、2、5、10μmol/L浓度的As_(2)O_(3)处理48 h,采用MTT法... 目的观察三氧化二砷(As_(2)O_(3))对肝癌HepG2细胞的增殖抑制情况及对STMN1表达的影响,探讨沉默STMN1表达对HepG2细胞凋亡的促进作用。方法取对数生长期HepG2细胞,应用0、0.5、1、2、5、10μmol/L浓度的As_(2)O_(3)处理48 h,采用MTT法测定细胞增殖率,计算As_(2)O_(3)对HepG2细胞的半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC_(50));不同浓度As_(2)O_(3)处理48、72、120 h取细胞,采用实时荧光定量PCR法检测STMN1 mRNA相对表达量。取对数生长期HepG2细胞分为实验组和对照组,实验组应用IC_(50)浓度(7.212μmol/L)的As_(2)O_(3)处理,对照组仅更换培养基,处理48 h时采用Western blot法检测STMN1蛋白相对表达量,采用流式细胞术检测细胞凋亡。取对数生长期HepG2细胞分为转染组(转染STMN1-siRNA)和阴性对照组(转染NC-siRNA),转染48 h采用实时荧光定量PCR法检测STMN1 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测STMN1、Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3蛋白相对表达量,采用流式细胞术检测细胞凋亡;转染12、24、48、72 h时采用MTT法检测细胞增殖。结果(1)0、0.5、1、2、5、10μmol/L浓度As_(2)O_(3)处理48 h,HepG2细胞增殖率[1、(0.89±0.06)%、(0.87±0.59)%、(0.73±0.02)%、(0.53±0.02)%、(0.47±0.01)%]比较差异有统计学意义(F=131.90,P<0.001)。As_(2)O_(3)对HepG2细胞的IC_(50)值为7.212μmol/L。(2)STMN1 mRNA相对表达量随As_(2)O_(3)浓度增高依次降低(P<0.001),随As_(2)O_(3)作用时间延长依次降低(P<0.001)。(3)IC_(50)浓度As_(2)O_(3)处理48 h,实验组细胞凋亡率[(17.67±0.70)%]高于对照组[(2.33±0.25)%](t=35.280,P<0.001),STMN1蛋白相对表达量(24.79±1.08)低于对照组(68.48±5.63)(t=13.200,P<0.001)。(4)转染48 h,转染组STMN1 mRNA(0.34±0.01)、蛋白(26.30±12.49)相对表达量均低于阴性对照组(0.93±0.03、82.71±15.67)(t=28.540,P<0.001;t=48.770,P<0.001)。转染组转染24、48、72 h细胞增殖吸光度值(0.43±0.03、0.50±0.02、0.61±0.03)均低于阴性对照组(0.53±0.02、0.71±0.04、0.93±0.03)(t=4.470,P=0.010;t=8.600,P=0.011;t=13.490,P<0.001),转染12 h细胞增殖吸光度值(0.34±0.01)与阴性对照组(0.38±0.03)比较差异无统计学意义(t=2.680,P=0.060)。(5)转染48 h,转染组细胞凋亡率[(19.47±0.25)%]高于阴性对照组[(2.27±0.15)%](t=101.200,P<0.001),Bcl-2蛋白相对表达量(129.91±1.740)低于阴性对照组(483.71±9.30)(t=64.740,P<0.001),Bax(482.59±10.64)、cleaved caspase-3(507.24±11.21)蛋白相对表达量均高于阴性对照组(223.99±6.66、274.30±8.43)(t=35.690,P<0.001;t=28.760,P<0.001)。结论As_(2)O_(3)可下调HepG2细胞STMN1表达、促进HepG2细胞凋亡,敲低HepG2细胞STMN1表达可促进HepG2细胞凋亡。 展开更多
关键词 肝细胞癌 HEPG2细胞 三氧化二砷 STMN1 凋亡 SIRNA
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BMSCs诱导分化为胆碱能神经元过程中干扰Hes1表达对Stmn1和Sept9基因的影响 被引量：1
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作者 李鹏飞 王春芳 +4 位作者 柳勇 崔素梅 邓春圣 龙志晶 刘彩玉 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期45-50,共6页
目的:通过检测体外培养的骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)定向诱导分化为胆碱能神经元过程中干扰Hes1基因对Stmn1和Sept9基因的表达变化情况,探讨骨髓基质细胞定向分化为胆碱能神经元的机制。方法:采用全骨髓培养法体外... 目的:通过检测体外培养的骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)定向诱导分化为胆碱能神经元过程中干扰Hes1基因对Stmn1和Sept9基因的表达变化情况,探讨骨髓基质细胞定向分化为胆碱能神经元的机制。方法:采用全骨髓培养法体外分离培养获得BMSCs,将第三代培养的BMSCs进行诱导分化,实时定量PCR技术分析干扰Hes1基因后,在骨髓基质细胞诱导分化为胆碱能神经元过程中Stmn1和Sept9基因的表达变化情况。结果:BMSCs诱导分化为胆碱能神经元后,经免疫荧光检测有乙酰胆碱转移酶阳性细胞表达;Hes1基因表达在诱导组和干扰后诱导组中均较对照组高(P<0.05);Stmn1基因表达水平在干扰后诱导组、干扰组、诱导组均较对照组高(P<0.05);Sept9基因在干扰后诱导组和干扰组中表达水平均较对照组高(P<0.05),诱导组和对照组间无统计学意义。结论:在BMSCs向胆碱能神经元分化过程中,干扰Hes1基因可调控Sept9,Stmn1的表达,Hes1基因的表达变化导致与分化和增殖相关基因的表达改变。 展开更多
关键词 骨髓基质细胞 胆碱能神经元 RNA干扰 Hes1基因 Stmn1基因 Sept9基因
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