目的:观察复方五凤草液治疗结核性溃疡的临床疗效,并基于干扰素-γ(INF-γ)/信号转导和转录激活因子1(STAT1)、白细胞介素-4(IL-4)/信号转导和转录激活因子6(STAT6)信号通路和卡介苗(BCG)诱导巨噬细胞极化模型探讨其作用机制。方法:(1)...目的:观察复方五凤草液治疗结核性溃疡的临床疗效,并基于干扰素-γ(INF-γ)/信号转导和转录激活因子1(STAT1)、白细胞介素-4(IL-4)/信号转导和转录激活因子6(STAT6)信号通路和卡介苗(BCG)诱导巨噬细胞极化模型探讨其作用机制。方法:(1)临床试验:将135例结核性溃疡患者分为观察组、中医对照组和西医对照组。在规范抗结核治疗基础上,观察组予复方五凤草液,中医对照组予康复新液,西医对照组予异烟肼液局部外用治疗,观察周期28 d。分别观察三组患者安全性指标、创面愈合总有效率、创面组织病理学形态及创面组织、创面组织中Ifnr、Il4、Stat1、Stat6 m RNA的表达,填写中医评分量表(Traditional Chinese Medicine Syndrome Score Scale,TCMSSS)病例报告表(Case Report Form,CRF)。(2)细胞实验:建立BCG诱导THP-1巨噬细胞模型,分别予不同药物处理后分为BCG组、BCG+康复新液组、BCG+异烟肼液组、BCG+复方五凤草液组。镜下观察各组BCG菌落情况,收集细胞上清液并离心,Western blot、RT-q PCR技术检测IFN-γ、IL-4、STAT1、STAT6的蛋白和m RNA表达,流式细胞术检测药物对CD11b、CD86、CD163、CD206百分率的影响。结果:(1)临床试验:治疗期间,3组患者安全性指标无明显差异;观察组总有效率(95.56%)高于中医对照组(82.22%)、西医对照组(75.56%);治疗28 d后,与中、西医对照组比较,观察组创面组织病理学形态改善更为明显,观察组患者Ifnr、Stat1 m RNA的表达低于中、西医对照组,Il4、Stat6 m RNA的表达高于中、西医对照组;与中、西医对照组比较,观察组中医证候积分显著降低。(2)细胞实验:THP-1巨噬细胞在感染BCG后吞噬泡明显增多,自噬小体增多;各组药物干预后胞内结核分枝杆菌的存活率降低。与对照组相比,BCG组M1型巨噬细胞所占比例较多,另3组M2型巨噬细胞所占比例较多。其中,BCG+复方五凤草液组中M2巨噬细胞占比显著高于其他3组。BCG+复方五凤草液组IFN-γ、STAT1表达下调,IL-4、STAT6表达上调,CD86百分率明显降低,CD206的百分率显著增加。结论:复方五凤草液治疗结核性溃疡临床疗效显著,其作用机制可能与抑制病原菌,干预IFN-γ/STAT1、IL-4/STAT6信号通路以介导M1/M2巨噬细胞极化平衡有关。展开更多
目的:构建针对信号转导子和转录激活子6(Singnal transducers and activators of transcription 6,STAT6)基因的干扰质粒,并观察其对STAT6蛋白表达的抑制效果。方法:将构建的短发夹干扰质粒(Short hairpin RNA,shRNA)表达载体,与合成的p...目的:构建针对信号转导子和转录激活子6(Singnal transducers and activators of transcription 6,STAT6)基因的干扰质粒,并观察其对STAT6蛋白表达的抑制效果。方法:将构建的短发夹干扰质粒(Short hairpin RNA,shRNA)表达载体,与合成的pIRES2-EGFP-STAT6基因表达质粒共同转染COS7细胞,荧光显微镜下观察干扰效果,并利用Western blot观察蛋白表达的变化。结果:将pIRES2-EGFP-STAT6重组载体转染COS7细胞后,结果显示STAT6蛋白可以在细胞中高水平表达;与阴性对照组相比,STAT6 shRNA-1干扰组和STAT6 shRNA-2干扰组STAT6蛋白表达水平分别是23.1%和9.6%。结论:成功构建并筛选到具有显著干扰效率的STAT6干扰质粒,为哮喘的基因治疗研究奠定了基础。展开更多
文摘目的:观察复方五凤草液治疗结核性溃疡的临床疗效,并基于干扰素-γ(INF-γ)/信号转导和转录激活因子1(STAT1)、白细胞介素-4(IL-4)/信号转导和转录激活因子6(STAT6)信号通路和卡介苗(BCG)诱导巨噬细胞极化模型探讨其作用机制。方法:(1)临床试验:将135例结核性溃疡患者分为观察组、中医对照组和西医对照组。在规范抗结核治疗基础上,观察组予复方五凤草液,中医对照组予康复新液,西医对照组予异烟肼液局部外用治疗,观察周期28 d。分别观察三组患者安全性指标、创面愈合总有效率、创面组织病理学形态及创面组织、创面组织中Ifnr、Il4、Stat1、Stat6 m RNA的表达,填写中医评分量表(Traditional Chinese Medicine Syndrome Score Scale,TCMSSS)病例报告表(Case Report Form,CRF)。(2)细胞实验:建立BCG诱导THP-1巨噬细胞模型,分别予不同药物处理后分为BCG组、BCG+康复新液组、BCG+异烟肼液组、BCG+复方五凤草液组。镜下观察各组BCG菌落情况,收集细胞上清液并离心,Western blot、RT-q PCR技术检测IFN-γ、IL-4、STAT1、STAT6的蛋白和m RNA表达,流式细胞术检测药物对CD11b、CD86、CD163、CD206百分率的影响。结果:(1)临床试验:治疗期间,3组患者安全性指标无明显差异;观察组总有效率(95.56%)高于中医对照组(82.22%)、西医对照组(75.56%);治疗28 d后,与中、西医对照组比较,观察组创面组织病理学形态改善更为明显,观察组患者Ifnr、Stat1 m RNA的表达低于中、西医对照组,Il4、Stat6 m RNA的表达高于中、西医对照组;与中、西医对照组比较,观察组中医证候积分显著降低。(2)细胞实验:THP-1巨噬细胞在感染BCG后吞噬泡明显增多,自噬小体增多;各组药物干预后胞内结核分枝杆菌的存活率降低。与对照组相比,BCG组M1型巨噬细胞所占比例较多,另3组M2型巨噬细胞所占比例较多。其中,BCG+复方五凤草液组中M2巨噬细胞占比显著高于其他3组。BCG+复方五凤草液组IFN-γ、STAT1表达下调,IL-4、STAT6表达上调,CD86百分率明显降低,CD206的百分率显著增加。结论:复方五凤草液治疗结核性溃疡临床疗效显著,其作用机制可能与抑制病原菌,干预IFN-γ/STAT1、IL-4/STAT6信号通路以介导M1/M2巨噬细胞极化平衡有关。
