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祛湿活血方调控AMPK/SREBP1c信号通路对HepG2脂肪肝细胞生长的影响
1
作者 谭伟强 刘丽 +3 位作者 刘旭东 魏业煌 龚晓倩 王蓉蓉 《实用医学杂志》 北大核心 2026年第3期406-415,共10页
目的探究祛湿活血方对游离脂肪酸(FFA)诱导的HepG2细胞的作用及机制。方法采用体外细胞实验,利用CCK8法测定不同浓度祛湿活血方对HepG2细胞活性的影响以选定适宜浓度进行后续实验。随后使用250μmol/L棕榈酸钠溶液联合500μmol/L油酸钠... 目的探究祛湿活血方对游离脂肪酸(FFA)诱导的HepG2细胞的作用及机制。方法采用体外细胞实验,利用CCK8法测定不同浓度祛湿活血方对HepG2细胞活性的影响以选定适宜浓度进行后续实验。随后使用250μmol/L棕榈酸钠溶液联合500μmol/L油酸钠的游离脂肪酸处理24 h诱导建立脂肪肝细胞模型,并给予不同浓度祛湿活血方含药血清及AMPK抑制剂对HepG2细胞进行24 h干预。通过油红O染色法和脂质荧光染色法观察细胞内脂滴积聚情况,采用GPO-PAP酶法检测细胞内总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量变化,TBA法检测和羟胺法分别检测丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的含量,ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)的含量,进一步运用qRT-PCR、Western blot和免疫荧光染色技术检测细胞内脂质代谢相关基因及蛋白的表达。结果祛湿活血方可显著改善FFA诱导的HepG2细胞脂质沉积,氧化应激及炎症反应,显著降低细胞中TC、TG、MDA、TNF-α、IL-1β的含量和提高SOD活性(P<0.01),提高AMPK,降低SREBP1c、FASN、ACC1和SCD1的mRNA表达水平(P<0.05),以及增加p-AMPK/AMPK,降低SREBP1c、FASN、ACC1和SCD1的蛋白表达(P<0.05)。结论祛湿活血方能够显著改善MASLD细胞模型的脂质代谢,并减轻氧化应激及炎症反应,其机制可能与激活AMPK/SREBP1c信号通路有关。 展开更多
关键词 祛湿活血方 代谢功能障碍相关脂肪性肝病 AMPK/srebp1c信号通路 HepG2细胞
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健脾化瘀方含药血清调控SREBP1/SLC7A11/GPX4轴促进铁死亡抑制胰腺癌PANC-1细胞增殖、侵袭的机制
2
作者 陈鑫球 朱小玉 +6 位作者 黄翰林 方崇锴 姚瑞伟 罗锐 刘抒伟 钟崇 赵希琳 《中药新药与临床药理》 北大核心 2026年第1期1-11,共11页
目的 基于调控固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)/溶质载体家族7成员11(SLC7A11)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)轴促进铁死亡,探讨健脾化瘀方含药血清抑制胰腺癌PANC-1细胞增殖、侵袭的机制。方法 将20只SD大鼠随机分为给药组、对照组(每组10... 目的 基于调控固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)/溶质载体家族7成员11(SLC7A11)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)轴促进铁死亡,探讨健脾化瘀方含药血清抑制胰腺癌PANC-1细胞增殖、侵袭的机制。方法 将20只SD大鼠随机分为给药组、对照组(每组10只),分别灌胃健脾化瘀方药液(26.8 g·kg^(-1)·d^(-1))及生理盐水(每日1次,连续7 d),制备健脾化瘀方含药血清及空白血清。体外培养PANC-1细胞,采用CCK-8法检测不同浓度(0%、0.5%、2.5%、5%、10%、15%、20%)健脾化瘀方含药血清干预24 h后的细胞存活率,并选择合适的药物浓度进行后续实验。采用克隆形成实验检测细胞增殖能力;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;荧光探针法检测细胞内中性脂质、活性氧(ROS)及脂质过氧化水平;微量法检测细胞亚铁离子(Fe^(2+))、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)水平;RT-qPCR及Western Blot法检测细胞SREBP1、SLC7A11、GPX4、N-cadherin、E-cadherin、Vimentin mRNA及蛋白表达水平。结果 (1)与空白对照组比较,2.5%、5%、10%、15%、20%健脾化瘀方含药血清可显著抑制PANC-1细胞存活率(P<0.05,P<0.01),且呈浓度依赖性;健脾化瘀方含药血清的IC50值为15.40%,选取5%、10%、15%含药血清浓度作为健脾化瘀方低、中、高剂量进行后续实验。(2)与空白对照组比较,健脾化瘀方低、中、高剂量组及吉西他滨(5μmol·L^(-1))组PANC-1细胞的相对克隆形成数、24 h细胞迁移率及侵袭细胞数均显著降低(P<0.05,P<0.01)。与空白对照组比较,健脾化瘀方低、中、高剂量组PANC-1细胞中ROS、Fe^(2+)、MDA水平显著升高(P<0.05,P<0.01),GSH水平显著降低(P<0.01),细胞内脂质过氧化水平显著升高(P<0.05,P<0.01),中性脂质积累显著减少(P<0.05,P<0.01),SREBP1、GPX4、SLC7A11、N-cadherin、Vimentin mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01),E-cadherin mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论 健脾化瘀方含药血清可以有效地抑制胰腺癌PANC-1细胞的增殖、迁移及侵袭,其作用机制可能与抑制SREBP1表达,减少细胞内脂质累积,诱导胰腺癌细胞铁死亡有关。 展开更多
关键词 健脾化瘀方含药血清 胰腺癌 PANC-1细胞 增殖 侵袭 srebp1/SLC7A11/GPX4轴 铁死亡 大鼠
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SREBP1介导胆固醇代谢影响结直肠癌恶性进展机制的研究
3
作者 章语洲 王卓晨 +1 位作者 楼招欢 黄建波 《浙江临床医学》 2026年第2期163-166,共4页
目的 探讨胆固醇合成关键转录因子SREBP1在结直肠癌(CRC)中的表达及其通过调控胆固醇代谢影响肿瘤细胞恶性行为的作用。方法 基于TCGA数据库分析SREBP1在CRC与正常组织中的表达水平,及其与胆固醇代谢通路、上皮-间质转化(EMT)相关基因... 目的 探讨胆固醇合成关键转录因子SREBP1在结直肠癌(CRC)中的表达及其通过调控胆固醇代谢影响肿瘤细胞恶性行为的作用。方法 基于TCGA数据库分析SREBP1在CRC与正常组织中的表达水平,及其与胆固醇代谢通路、上皮-间质转化(EMT)相关基因的相关性。采用SREBP1抑制剂法托司汀(Fatostatin)及胆固醇合成抑制剂辛伐他汀(Simvastatin)处理SW480和HT-29细胞,通过Filipin Ⅲ染色检测胆固醇水平,EdU与克隆形成实验检测细胞增殖能力,Transwell实验评估细胞迁移与侵袭。结果 TCGA分析显示,SREBP1在CRC组织中表达显著上调,且与胆固醇代谢通路活性及EMT相关基因表达呈正相关。体外实验表明,法托司汀与辛伐他汀处理均可降低细胞内胆固醇积累,并显著抑制CRC细胞的增殖、迁移与侵袭能力(P<0.01)。结论 SREBP1可能通过促进胆固醇合成与积累,增强结直肠癌细胞的迁移与侵袭能力,提示靶向胆固醇代谢通路可作为CRC治疗的潜在策略。 展开更多
关键词 srebp1 胆固醇代谢 结直肠癌 细胞增殖 迁移与侵袭
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基于mTORC1/SREBP1/SCD1信号通路探讨柴芪益肝颗粒含药血清对肝癌HepG2细胞铁死亡的影响 被引量：3
4
作者 马贵萍 刘博文 +5 位作者 李晓斌 李峰 庞旭 冉云 陈文林 胡世平 《中成药》 北大核心 2025年第4期1305-1309,共5页
目的探讨柴芪益肝颗粒对肝癌HepG2细胞铁死亡的调控作用。方法制备柴芪益肝颗粒大鼠含药血清,常规培养HepG2细胞,采用CCK-8法筛选最佳干预浓度及时间。设置空白血清对照组、索拉非尼组、RSL3组(铁死亡诱导剂)、柴芪益肝颗粒含药血清组、... 目的探讨柴芪益肝颗粒对肝癌HepG2细胞铁死亡的调控作用。方法制备柴芪益肝颗粒大鼠含药血清,常规培养HepG2细胞,采用CCK-8法筛选最佳干预浓度及时间。设置空白血清对照组、索拉非尼组、RSL3组(铁死亡诱导剂)、柴芪益肝颗粒含药血清组、RMC-5552组(mTORC1抑制剂)、CCT007093组(mTORC1激动剂)及CCT007093+柴芪益肝颗粒含药血清组,按照分组进行干预后,ELISA法检测细胞内MDA、GSH水平,荧光探针检测细胞Fe^(2+)水平,透射电镜观察细胞线粒体结构,RT-qPCR法检测铁死亡相关基因mTOR、SREBP1、SCD1、GPX 4 mRNA表达,Western blot法检测mTOR、p70S6K磷酸化水平与SREBP1、SCD1、GPX4蛋白表达。结果30%柴芪益肝颗粒含药血清干预细胞48 h时,对HepG2细胞的抑制作用最佳。与空白血清对照组比较,索拉非尼组、RSL3组、柴芪益肝颗粒含药血清组及RMC-5552组HepG2细胞GSH水平降低(P<0.05),MDA、Fe^(2+)水平升高(P<0.05),线粒体结构呈铁死亡改变,mTOR、p70S6K、SREBP1、SCD1、GPX4 mRNA和蛋白表达降低。结论柴芪益肝颗粒含药血清可促进肝癌HepG2细胞铁死亡,其作用机制与抑制mTORC1/SREBP1/SCD1信号通路相关。 展开更多
关键词 柴芪益肝颗粒 含药血清 肝细胞癌 铁死亡 mTORC1/srebp1/SCD1信号通路
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二陈汤通过抑制mTORC1/SREBP1/CAV1通路改善高脂饮食小鼠肝脏线粒体功能的作用研究 被引量：11
5
作者 丁珊珊 庄妍 +4 位作者 廖颖 康洁 张凌媛 沈建英 廖凌虹 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期763-769,共7页
研究二陈汤对高脂饮食小鼠肝脏线粒体功能的影响及可能的作用机制。将60只C57BL/6J小鼠随机分为正常组、高脂组、二陈汤组、mTORC1激活剂(MHY)组、二陈汤+MHY组、多烯磷脂酰胆碱(PPC)组,每组10只。正常组给予普通饲料,其余各组给予高脂... 研究二陈汤对高脂饮食小鼠肝脏线粒体功能的影响及可能的作用机制。将60只C57BL/6J小鼠随机分为正常组、高脂组、二陈汤组、mTORC1激活剂(MHY)组、二陈汤+MHY组、多烯磷脂酰胆碱(PPC)组,每组10只。正常组给予普通饲料,其余各组给予高脂饲料,喂养20周。第17周,二陈汤组和二陈汤+MHY组小鼠每日灌胃二陈汤(8.7 g·kg^(-1)),PPC组小鼠灌胃PPC(0.18 g·kg^(-1)),其余组小鼠灌胃生理盐水(0.01 mL·g^(-1)),持续4周。第19周,MHY组和二陈汤+MHY组小鼠隔日腹腔注射MHY(5 mg·kg^(-1)),持续2周。观察小鼠一般情况,检测小鼠血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)含量,HE染色和油红O染色观察肝组织形态变化,化学发光法检测三磷酸腺苷(ATP)含量,荧光探针(JC-1)法检测线粒体膜电位,免疫印迹法检测雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)、核糖体蛋白S6激酶(S6K)、固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)、小窝蛋白1(CAV1)的表达。结果显示,与正常组比较,高脂组小鼠体质量和腹围显著增加(P<0.01);TG、TC含量均显著升高(P<0.01);肝小叶界限不清,细胞肿大变圆、排列不规则,有明显脂滴沉积,并伴有炎症细胞浸润;肝脏ATP含量和线粒体膜电位显著降低(P<0.01);p-mTOR、p-S6K、n-SREBP1蛋白表达显著增加(P<0.01),CAV1蛋白表达显著减少(P<0.01)。与高脂组比较,二陈汤组和PPC组小鼠体质量显著降低(P<0.05),TG含量显著降低(P<0.05),肝细胞形态、脂质沉积及炎症细胞浸润均改善,ATP含量和线粒体膜电位显著升高(P<0.05或P<0.01);二陈汤组小鼠p-mTOR、p-S6K、n-SREBP1表达显著减少(P<0.01),CAV1表达显著增加(P<0.01);而MHY组小鼠以上指标没有得到改善。与MHY组比较,二陈汤+MHY组小鼠体质量和TG含量显著降低(P<0.05),肝细胞形态、脂质沉积及炎症细胞浸润得到改善,肝脏ATP含量和线粒体膜电位显著升高(P<0.05或P<0.01),p-mTOR、p-S6K、n-SREBP1表达显著降低(P<0.01),CAV1表达显著升高(P<0.01)。综上表明,二陈汤可通过调节mTORC1/SREBP1/CAV1通路改善线粒体功能,可能是其化痰调脂的部分内在机制。 展开更多
关键词 二陈汤 痰证 脂质代谢 线粒体功能 mTORC1/srebp1/CAV1
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牛A-FABP与SREBP1基因的组织表达规律研究 被引量：11
6
作者 张乐 彭燮 +3 位作者 刘扬 付常振 王洪宝 昝林森 《家畜生态学报》 北大核心 2014年第11期18-23,共6页
A-FABP(脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白)和SREBP1(固醇调节元件结合蛋白)是动物体内参与脂肪沉积和脂质合成的重要基因。为了研究这两种基因在牛组织中的表达规律,研究利用qRT-PCR技术检测A-FABP和SREBP1在荷斯坦牛13种组织中表达水平,并进... A-FABP(脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白)和SREBP1(固醇调节元件结合蛋白)是动物体内参与脂肪沉积和脂质合成的重要基因。为了研究这两种基因在牛组织中的表达规律,研究利用qRT-PCR技术检测A-FABP和SREBP1在荷斯坦牛13种组织中表达水平,并进一步比较了这两个基因在秦川牛和雪龙黑牛脂肪、肌肉和肝脏的组织中表达差异。研究结果表明A-FABP基因在脂肪组织中的表达水平远远高于其他组织,SREBP1基因在各组织中均有表达,脂肪组织的相对表达量最高。A-FABP基因在雪龙黑牛肌肉和肝脏组织中的表达量显著高于秦川牛的肌肉和肝脏(P<0.05),而在脂肪组织中,秦川牛和雪龙黑牛该基因表达量无显著差异(P>0.05)。SREBP1基因在雪龙黑牛肌肉和肝脏组织中的表达量显著高于秦川牛的肌肉和肝脏(P<0.05),而在脂肪组织中,秦川牛表达量显著高于雪龙黑牛(P<0.05)。由于A-FABP和SREBP1在脂肪中表达量最高,且它们的表达量在脂肪沉积能力不同的秦川牛和雪龙黑牛肌肉和肝脏组织中存在显著差异,故推断这两种基因在牛脂肪组织的脂质代谢过程中发挥重要作用,对脂肪的沉积和大理石花纹牛肉的形成起到一定的调控作用。 展开更多
关键词 A-FABP基因 srebp1基因 QRT-PCR 秦川牛 雪龙黑牛 表达谱
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鸡SREBP1基因抗血清制备及组织表达特性分析 被引量：5
7
作者 王丽 那威 +4 位作者 王宇祥 王彦博 王宁 李玉茂 李辉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1241-1245,共5页
目的:制备鸡类固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)的多克隆抗血清,并分析其组织表达特性。方法:利用DNAStar软件对鸡SREBP1入核部分蛋白进行分析,预测其主要抗原决定簇区域;利用RT-PCR的方法扩增编码鸡SREBP1主要抗原决定簇的基因片段(832-1... 目的:制备鸡类固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)的多克隆抗血清,并分析其组织表达特性。方法:利用DNAStar软件对鸡SREBP1入核部分蛋白进行分析,预测其主要抗原决定簇区域;利用RT-PCR的方法扩增编码鸡SREBP1主要抗原决定簇的基因片段(832-1 302 bp),构建原核表达载体pGEX-4T/SREBP1;诱导重组蛋白GST/SREBP1表达并纯化后,以其为免疫原制备鸡SREBP1的多克隆抗血清;通过ELISA和Western blot的方法检测抗血清的效价和特异性,并利用此抗血清分析SREBP1基因在肉鸡组织中的表达特性。结果:ELISA测定抗体效价为1∶102 400,Western blot结果显示抗体具有较高的特异性;SREBP1基因在肉鸡腹部脂肪组织和心脏组织中有较高表达,在肝脏、肌胃、十二指肠、脾脏、肾脏等组织表达量较低,在胸肌和腿肌中没有检测到信号;SREBP1基因在高脂系公鸡腹部脂肪组织中的表达量显著高于低脂系公鸡腹部脂肪组织的表达量(P<0.05)。结论:本研究制备的鸡SREBP1的多克隆抗血清效价高、特异性强。SREBP1在肉鸡腹部脂肪组织高量表达。与低脂系公鸡相比,SREBP1在高脂系公鸡腹部脂肪组织的表达量较高。 展开更多
关键词 鸡 srebp1 抗血清 表达 特性
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秦川牛SREBP1基因重组腺病毒载体的构建与病毒包装 被引量：5
8
作者 付常振 昝林森 +6 位作者 王虹 姜碧杰 成功 王洪宝 朱光星 李耀坤 王洪程 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1323-1329,共7页
克隆秦川牛的SREBP1基因并构建重组腺病毒表达载体,包装扩繁获得高滴度病毒,拟为在细胞水平上开展基因功能的研究奠定基础。本试验以秦川牛脂肪组织为试验材料,提取总RNA并反转得到cDNA,以Gen-Bank收录的牛的SREBP1基因mRNA序列设计引物... 克隆秦川牛的SREBP1基因并构建重组腺病毒表达载体,包装扩繁获得高滴度病毒,拟为在细胞水平上开展基因功能的研究奠定基础。本试验以秦川牛脂肪组织为试验材料,提取总RNA并反转得到cDNA,以Gen-Bank收录的牛的SREBP1基因mRNA序列设计引物,PCR扩增SREBP1基因与克隆载体pMD19-T Simple连接并测序鉴定。挑选测序正确的SREBP1基因酶切后连接到腺病毒穿梭载体上构建pAdTrack-CMV-SREBP1表达载体,用PmeⅠ限制酶酶切线性化,然后转染到含有骨架载体pAdEasy-1的E.coli BJ5183感受态进行同源重组,得到腺病毒重组载体pAd-SREBP1。用PacⅠ限制酶酶切线性化pAd-SREBP1载体并回收质粒大片段,转染293A细胞包装病毒并扩繁提高病毒滴度,绿色荧光蛋白(GFP)标记法测定腺病毒的滴度。本试验成功克隆了秦川牛的SREBP1基因,测序结果与GenBank收录的牛的基因序列比较有2处位点突变,均已排除扩增酶的保真性不高等外界因素造成的。将SREBP1基因与穿梭载体连接构建了pAdTrack-CMV-SREBP1表达载体,并与骨架载体重组得到重组腺病毒载体pAd-SREBP1,用PacⅠ酶切线性化包装病毒,扩繁得到病毒滴度为1.5×109 GFU·mL-1高滴度病毒。本研究成功克隆秦川牛SREBP1基因并重组成病毒重组子,包装扩繁得到高滴度腺病毒。 展开更多
关键词 秦川牛 srebp1 腺病毒
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SREBP1在阿托伐他汀抑制NLRP1炎性体表达中的作用 被引量：4
9
作者 王波 喻思扬 +4 位作者 刘洋 王燕 徐健强 曾高峰 赵国军 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1805-1808,1814,共5页
目的:探讨固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)在阿托伐他汀抑制核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白1(NLRP1)炎性体表达中的作用。方法:160 nmol/L佛波酯孵育THP-1细胞12 h,使其分化为巨噬细胞,更换无血清培养基,加入脂多糖和(或)阿托伐他汀... 目的:探讨固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)在阿托伐他汀抑制核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白1(NLRP1)炎性体表达中的作用。方法:160 nmol/L佛波酯孵育THP-1细胞12 h,使其分化为巨噬细胞,更换无血清培养基,加入脂多糖和(或)阿托伐他汀进行处理。Real-time PCR检测细胞中NLRP1、SREBP1 mRNA的表达;Western blot检测细胞中NLRP1、SREBP1蛋白的表达;检测SREBP1 siRNA预处理细胞后对阿托伐他汀抑制NLRP1表达的影响。结果:阿托伐他汀能抑制THP-1巨噬细胞NLRP1和SREBP1的mRNA和蛋白的表达;单独使用SREBP1 siRNA处理细胞可有效抑制NLRP1的表达,且与单独使用阿托伐他汀无明显差异;同时使用SREBP1 siRNA和阿托伐他汀处理细胞比单独使用一种对NLRP1的抑制作用更为显著。结论:阿托伐他汀可能通过SREBP1途径抑制NLRP1的表达,进而发挥抗炎效应。 展开更多
关键词 阿托伐他汀 抗炎作用 srebp1 NLRP1炎性体 动脉粥样硬化
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DACH1、FASN和SREBP1在子宫内膜癌中的表达 被引量：3
10
作者 刘洋 李卫华 +2 位作者 吕清涛 杨宁 姜洁 《山东大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2013年第4期71-76,共6页
目的探讨细胞命运决定因子(DACH1)蛋白、脂肪酸合成酶(FASN)、固醇元件结合蛋白1(SREBP1)在子宫内膜癌中的表达及与临床病理参数的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测DACH1、FASN、SREBP1在子宫内膜癌、不典型增生子宫内膜、复杂性子... 目的探讨细胞命运决定因子(DACH1)蛋白、脂肪酸合成酶(FASN)、固醇元件结合蛋白1(SREBP1)在子宫内膜癌中的表达及与临床病理参数的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测DACH1、FASN、SREBP1在子宫内膜癌、不典型增生子宫内膜、复杂性子宫内膜、正常子宫内膜中的表达。结果 DACH1在子宫内膜癌中的表达显著低于非癌组,FASN及SREBP1在子宫内膜癌中的表达均显著高于非癌组。DACH1、FASN、SREBP1在子宫内膜癌中的表达率分别为40.0%、61.7%、65.0%,DACH1、FASN、SREBP1均与子宫内膜癌分化程度有关。DACH1与手术病理分期和病理类型有关,SREBP1与年龄有关。FASN、SREBP1与DACH1的表达呈负相关(r=-0.41,r=-0.40)。单因素分析结果显示,DACH1蛋白阳性组子宫内膜癌患者生存率高于DACH1蛋白阴性组(P<0.05);FASN及SREBP1蛋白阳性组子宫内膜癌患者生存率分别低于FASN蛋白及SREBP1蛋白阴性组(P<0.01,P<0.04)。结论 DACH1、FASN、SREBP1有可能成为子宫内膜癌判断预后的新指标。 展开更多
关键词 子宫内膜肿瘤 DACH1蛋白 脂肪酸合成酶 srebp1蛋白 免疫组织化学
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SREBP1基因多态性与西门塔尔牛肌内脂肪含量相关性分析 被引量：3
11
作者 徐丽 朱淼 +5 位作者 郭立平 许尚忠 李俊雅 高雪 高会江 张路培 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1312-1316,共5页
选取165头西门塔尔育肥牛为研究对象,利用PCR方法检测固醇调节元件结合蛋白(Sterol regulatory ele-ment binding factor 1,SREBP1)基因第5内含子内84bp插入缺失突变的多态性,并与肌内脂肪含量进行相关性分析。结果显示,SREBP1基因第5... 选取165头西门塔尔育肥牛为研究对象,利用PCR方法检测固醇调节元件结合蛋白(Sterol regulatory ele-ment binding factor 1,SREBP1)基因第5内含子内84bp插入缺失突变的多态性,并与肌内脂肪含量进行相关性分析。结果显示,SREBP1基因第5内含内84bp插入缺失突变与棕榈油酸(C16:1)、硬脂酸(C18:0)、SFA和甘油三酯及C16脂肪酸不饱和指数显著相关(P<0.05),LL型个体棕榈油酸、甘油三酯和16碳脂肪酸不饱和指数均高于LS型个体,而硬脂酸和SFA低于LS个体。 展开更多
关键词 西门塔尔牛 srebp1基因 缺失突变 肌内脂肪含量
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牛SREBP1基因shRNA序列的筛选及其腺病毒载体的构建与鉴定 被引量：2
12
作者 付常振 昝林森 +6 位作者 王虹 成功 王洪宝 李耀坤 姜碧杰 高建斌 杨宁 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第23期5026-5036,共11页
【目的】筛选可靶向干扰牛的SREBP1基因的有效shRNA,构建相应腺病毒载体并包装重组腺病毒,为在细胞水平上研究SREBP1基因的功能和作用机制提供基础。【方法】以秦川牛SREBP1基因为研究对象,首先靶向其编码区(coding sequence,CDS)序列... 【目的】筛选可靶向干扰牛的SREBP1基因的有效shRNA,构建相应腺病毒载体并包装重组腺病毒,为在细胞水平上研究SREBP1基因的功能和作用机制提供基础。【方法】以秦川牛SREBP1基因为研究对象,首先靶向其编码区(coding sequence,CDS)序列设计并合成6条干扰和1条阴性对照shRNA,并构建表达载体pENTR-U6-shRNA。然后与载体psiCHECK-Ⅱ-SREBP1共转染293A细胞,筛选有效的pENTR-U6-shRNA。其次将筛选的pENTR-U6-shRNA和阴性对照pENTR-U6-NC分别与腺病毒骨架载体pAd/PL-DEST体外重组,得到腺病毒重组载体,并在293A细胞包装扩繁得到高滴度腺病毒,GFP标记法测定病毒滴度。最后将病毒侵染牛前体脂肪细胞,实时荧光定量法(qRT-PCR)检测干扰效率。【结果】筛选出靶向牛SREBP1基因干扰效率为87.4%的shRNA-1053。构建了pAd-1053和阴性对照pAd-NC重组腺病毒载体并包装得到Ad-1053和Ad-NC高滴度病毒,测定得到的病毒滴度分别为7×108 GFU·mL-1和9×108 GFU·mL-1。Ad-1053和Ad-NC分别侵染牛前体脂肪细胞,qRT-PCR检测结果显示Ad-1053可显著降低SREBP1基因的mRNA水平(干扰率>85%),而Ad-NC对SREBP1基因表达无明显影响。【结论】成功筛选得到靶向干扰牛SREBP1基因的有效shRNA,并包装扩繁获得相应的高滴度重组病毒。 展开更多
关键词 牛 srebp1 SHRNA 重组腺病毒
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逍遥散对大鼠肝细胞脂肪变性及内质网/SREBP1/脂代谢通路的影响 被引量：12
13
作者 薛欣 李玉梅 +2 位作者 李海玉 王震 张永祥 《中国中医基础医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期154-157,共4页
目的:从内质网应激及其调控的与脂质合成相关的SREBP1通路的角度探讨逍遥散防治大鼠肝细胞脂肪变性的分子机制。方法:健康Wistar大鼠分为正常对照组、模型组、逍遥散组和东宝肝泰组4组,建立四氯化碳联合高脂饮食诱导大鼠脂肪肝动物模型... 目的:从内质网应激及其调控的与脂质合成相关的SREBP1通路的角度探讨逍遥散防治大鼠肝细胞脂肪变性的分子机制。方法:健康Wistar大鼠分为正常对照组、模型组、逍遥散组和东宝肝泰组4组,建立四氯化碳联合高脂饮食诱导大鼠脂肪肝动物模型,观察各组肝组织病理变化、血清肝功能、肝组织中胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)含量及肝组织GRP78、SREBP1及生脂相关酶分子的表达。结果:逍遥散组的肝指数(P<0.01)、血清ALT(P<0.01)、AST(P<0.05)水平及肝组织中TG(P<0.05)含量较模型组明显降低。病理HE染色显示,逍遥散组肝脂肪变性较模型组明显减轻;RT-PCR和Western blot结果表明,逍遥散组GRP78分子、SREBP1 mRNA及部分生脂相关酶mRNA的表达低于模型组。结论:逍遥散对大鼠肝细胞脂肪变性的抑制作用与内质网应激有关,其可能分子机制为:逍遥散降低内质网应激,引起转录因子SREBP1的表达与入核转位的减少,在细胞核内被SREBP1激活的生脂相关酶基因的诱导表达降低,使肝细胞内甘油三脂、胆固醇合成减少,导致肝细胞脂肪变性的减轻。 展开更多
关键词 脂肪肝 逍遥散 葡萄糖调节蛋白78(GRP78) 固醇调节元件结合蛋白(SREBP)
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奶牛SREBP1蛋白在乳腺上皮细胞的表达定位及对SCD1基因启动子的转录调控 被引量：3
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作者 韩立强 王月影 +4 位作者 王林枫 朱河水 钟凯 褚贝贝 杨国宇 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第24期4797-4805,共9页
【目的】固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)作为核转录因子,对于细胞脂肪合成酶基因的表达发挥着重要的调控作用。论文旨在奶牛乳腺上皮细胞中研究SREBP1对于SCD1基因启动子的转录调控作用,为进一步明确SREBP1对于靶基因的转录调控机制提... 【目的】固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)作为核转录因子,对于细胞脂肪合成酶基因的表达发挥着重要的调控作用。论文旨在奶牛乳腺上皮细胞中研究SREBP1对于SCD1基因启动子的转录调控作用,为进一步明确SREBP1对于靶基因的转录调控机制提供理论基础。【方法】以荷斯坦奶牛乳腺组织的c DNA为模板,采用分段克隆的方法获得SREBP1基因的编码序列,通过重组酶与pc DNA3.1载体进行重组环化构建pc DNA3.1-SREBP1表达载体,将构建的载体测序验证后提取质粒,转染奶牛乳腺上皮细胞。以EIF3K基因为内参基因,采用荧光定量PCR检测SREBP1基因m RNA的表达差异;采用免疫荧光的方法对SREBP1进行标记,以DAPI复染细胞核,激光共聚焦观察SREBP1蛋白的亚细胞定位;转染含有不同调控元件的SCD基因启动子,同时转染1.0μg pc DNA3.1-SREBP1作为处理,荧光素酶报告基因系统分析启动子活性;分别转染0.25、0.5和1μg的pc DNA3.1-SREBP1载体,分析p GL3-SCD 2和p GL3-SCD3启动子活性与SREBP1之间的量效关系。【结果】分段克隆得到的PCR产物分别为1 170、1 116、363和900 bp的片段,经过与pc DNA3.1载体重组后获得pc DNA3.1-SREBP1表达载体,经酶切和测序验证,发现除1个无义突变外,与标准序列完全相同,整个序列长度达到3 510bp;将pc DNA3.1-SREBP1载体转染乳腺上皮细胞后,Real-time PCR检测发现与转染空载体的对照组相比,SREBP1基因的m RNA表达倍数增强130.4倍(P<0.001);激光共聚焦观察发现,DAPI染色的细胞核呈蓝色,免疫荧光标记的SREBP1呈绿色,二者融合后呈现青色,共定位在乳腺上皮细胞核中;启动子活性检测发现,与p GL3-SCD1、p GL3SCD 2相比,SREBP1处理能够极显著增加p GL3-SCD3、p GL3-CD4启动子的活性(P<0.001),分别比对照组提高了1.0倍和0.7倍,进一步分析发现,在用0.25—1μg的pc DNA3.1-SREBP1处理后,与p GL3-SCD2的启动子活性持续下降相比,p GL3-SCD3的启动子活性从59.81上升到108.43(P<0.001),二者存在剂量效应关系,结合SCD2和SCD 3启动子上主要的结构差异SRE元件(5′-AGCAGATTGCG-3′),推测此序列可能是SREBP1调控SCD基因启动子转录的结合序列。【结论】克隆构建奶牛SREBP1基因表达载体,亚细胞定位SREBP1蛋白主要在乳腺上皮细胞核中,SREBP1可以与SRE调控元件结合促进SCD1基因启动子的转录。 展开更多
关键词 奶牛 固醇调节元件结合蛋白1 乳腺上皮细胞 亚细胞定位 转录调控
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延边黄牛SREBP1基因多态性与肌内脂肪酸组成的相关性研究 被引量：6
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作者 李海峰 耿爽 +3 位作者 金鑫 戢爽 吴健 夏广军 《延边大学农学学报》 2017年第4期68-72,共5页
为探讨SREBP1基因多态性及其与肌内脂肪酸的相关性,选取30月龄,健康无病,体重相近的延边黄牛29头,屠宰后采集肉样与血样,进行DNA提取与脂肪酸含量测定,利用PCR方法检测固醇调节元件结合蛋白(Slerol regulatory element binding factor 1... 为探讨SREBP1基因多态性及其与肌内脂肪酸的相关性,选取30月龄,健康无病,体重相近的延边黄牛29头,屠宰后采集肉样与血样,进行DNA提取与脂肪酸含量测定,利用PCR方法检测固醇调节元件结合蛋白(Slerol regulatory element binding factor 1,SREBP1)基因第5内含子的多态性,并与肌内脂肪沉积性状进行相关性分析。结果表明:在延边黄牛SREBP1基因第5内含子发现84bp插入缺失突变,且与肌内脂肪酸组成显著相关。AB型个体的月桂酸(C12∶0)、棕榈油酸(C16∶1)、硬脂酸(C18∶0)、亚油酸(C18∶2)含量显著高于AA型个体(P<0.05)。说明延边黄牛SREBP基因第5内含子存在84bp插入缺失突变,且这一位点的多态性影响肌肉脂肪酸组成。 展开更多
关键词 延边黄牛 srebp1基因 多态性 肌内脂肪酸
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苦参碱对结肠癌肝转移小鼠SCAP/SREBP1信号通路的调节作用研究 被引量：5
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作者 马漪 谢琼 《天津中医药》 CAS 2022年第3期386-391,共6页
[目的]研究苦参碱对结肠癌肝转移小鼠肿瘤抑制作用及对SCAP/SREBP1信号通路的调节作用。[方法]72只小鼠随机分为空白对照组、肝转移模型组、苦参碱低、中、高剂量组及卡培他滨组,每组12只,采用脾内注射结肠癌HCT116细胞法建立结肠癌肝... [目的]研究苦参碱对结肠癌肝转移小鼠肿瘤抑制作用及对SCAP/SREBP1信号通路的调节作用。[方法]72只小鼠随机分为空白对照组、肝转移模型组、苦参碱低、中、高剂量组及卡培他滨组,每组12只,采用脾内注射结肠癌HCT116细胞法建立结肠癌肝转移小鼠模型,苦参碱低、中、高剂量组分别灌胃给予12.5、25、50 mg/kg的苦参碱,给药21 d,卡培他滨组按照267 mg/kg灌胃给予卡培他滨,测定小鼠肝脏质量及肝转移结节数,酶联免疫吸附法(ELISA)测定肝组织转化生长因子β1蛋白(TGF-β1)、白介素(IL)-6水平,苏木精-伊红(HE)染色法检查肝组织病理学,实时定量聚合酶链式反应(PCR)测定肿瘤组织SCAP、SREBP1 mRNA水平,免疫印迹(Western blot)法测定肿瘤组织SCAP、SREBP1水平。[结果]与空白对照组比较,肝转移模型组小鼠肝脏质量、肝转移结节数、肝组织TGF-β1及IL-6水平、肿瘤组织SCAP、SREBP1 mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.05);与肝转移模型组比较,苦参碱各剂量组肝脏质量、肝转移结节数、肝组织TGF-β1及IL-6水平、肿瘤组织SCAP、SREBP1 mRNA及蛋白水平显著降低(P<0.05),随着苦参碱剂量的增加,各项指标降低更明显。[结论]苦参碱能够显著抑制结肠癌肝转移,缓解肝组织病理学改变,其机制可能与调节SCAP/SREBP1信号通路有关。 展开更多
关键词 苦参碱 结肠癌肝转移 SCAP/srebp1信号通路
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前列腺癌PC3细胞表达鸭SREBP1基因的分析 被引量：1
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作者 杨英仓 李万贵 +1 位作者 王单单 张依裕 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1702-1706,共5页
为了探讨鸭SREBP1基因对前列腺癌PC3细胞增殖的影响,通过构建携带His标签鸭SREBP1基因第310位至403位氨基酸序列的真核表达载体p EGFP-N3+SREBP1+His,转染前列腺癌PC3细胞,空载体p EGFP-N3为对照,结果表明:p EGFP-N3+SREBP1+His和空载... 为了探讨鸭SREBP1基因对前列腺癌PC3细胞增殖的影响,通过构建携带His标签鸭SREBP1基因第310位至403位氨基酸序列的真核表达载体p EGFP-N3+SREBP1+His,转染前列腺癌PC3细胞,空载体p EGFP-N3为对照,结果表明:p EGFP-N3+SREBP1+His和空载体均成功转染前列腺癌PC3细胞,p EGFP-N3+SREBP1+His转染效率高于空载体,通过检测转染48 h的细胞数量和SREBP1表达量,p EGFP-N3+SREBP1+His组细胞数为0.82×10~6个,SREBP1基因表达量为124.128 pg/m L;空载体组细胞数为0.74×10~6个,没有检测到His标签表达量。研究结果揭示,鸭SREBP1基因第310位至403位氨基酸序列对前列腺癌PC3细胞的增殖有促进作用。 展开更多
关键词 前列腺癌PC3细胞 srebp1基因 细胞转染 细胞增殖
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NAFLD患者外周血Srebp1c基因启动子甲基化表达水平 被引量：3
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作者 周自忠 徐海荣 +2 位作者 陈红虹 周小平 唐世孝 《热带医学杂志》 CAS 2018年第9期1178-1181,共4页
目的探讨非酒精性脂肪肝病(NAFLD)患者血浆固醇调节元件结合蛋白1c(Srebp1c)基因启动子甲基化状态。方法选择56名在西南医科大学附属医院消化内科确诊为NAFLD的患者,另选50名健康人群作为对照组。收集一般资料(年龄、性别、身高、体重)... 目的探讨非酒精性脂肪肝病(NAFLD)患者血浆固醇调节元件结合蛋白1c(Srebp1c)基因启动子甲基化状态。方法选择56名在西南医科大学附属医院消化内科确诊为NAFLD的患者,另选50名健康人群作为对照组。收集一般资料(年龄、性别、身高、体重)。收集两组人群静脉血,血脂和肝功能采用全自动血生化分析仪检测,qPCR检测基因水平表达,Srebp1c启动子甲基化水平采用甲基化特异性PCR检测。结果两组人群的年龄和性别差异均无统计学意义(P>0.05)。观察组体重、体重指数、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和谷丙转氨酶均高于对照组(t=9.103、3.749、4.550、5.363、2.889、9.783,P均<0.05);相对于对照组,观察组的Srebp1c表达上调(t=46.09,P<0.000 1);对照组和观察组的Srebp1c甲基化率分别为76.00%和19.64%,差异有统计学意义(χ~2=33.751,P<0.000 1)。结论 Srebp1c低甲基化可能在NAFLD患者的发病过程中扮演了重要角色。 展开更多
关键词 非酒精性脂肪肝病 srebp1c 低甲基化
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艾塞那肽对NAFLD大鼠SREBP1、ACCα及SCD1表达的影响
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作者 梁蔚蔚 李晓波 +2 位作者 李燕 刘华 武俊紫 《昆明医科大学学报》 CAS 2020年第7期23-29,共7页
目的研究艾塞那肽对非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠的肝脏组织、胰岛素抵抗、SREBP-1、ACCα、SCD1表达的影响。方法SD大鼠予100%高脂溶液灌胃12周,造模成功后取100只随机分为NAFLD模型组(high-fat di... 目的研究艾塞那肽对非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠的肝脏组织、胰岛素抵抗、SREBP-1、ACCα、SCD1表达的影响。方法SD大鼠予100%高脂溶液灌胃12周,造模成功后取100只随机分为NAFLD模型组(high-fat diet,HFD),艾塞那肽低剂量(exenatidelow dose,ELD)、中剂量(exenatidemiddle dose,EMD)、高剂量干预组(exenatidehigh dose,EHD)及多烯磷脂酰胆碱治疗组(positive drug polyenephosphatidylcholine,PDC),每组各20只。艾塞那肽干预组予艾塞那肽1μg、2μg、4μg/kg(大鼠体重)注射治疗,PDC予多烯磷脂酰胆碱46 mg/kg(大鼠体重)注射。4周和8周后分别处死大鼠各半,HE染色观察肝脏病理改变,测定空腹血糖、胰岛素水平,检测SREBP1、ACCα及SCD1表达。结果艾塞那肽可以改善肝脏脂肪浸润,减少脂肪颗粒,降低天门冬氨酸氨基转移酶(Aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸转移酶(alanine aminotransferase,ALT)(P<0.05);改善胰岛素抵抗(P<0.05);SREBP1及ACCαm RNA表达明显降低,SCD1-mRNA表达升高(P<0.05)。结论艾塞那肽可能通过调控SREBP1、ACCα、SCD1的表达,降低胰岛素抵抗,可能对NAFLD有一定的治疗作用。 展开更多
关键词 艾塞那肽 非酒精性脂肪性肝病 srebp1 ACCα SCD1
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基于STAT3/SREBP1介导的脂质代谢探讨乌梅丸防治结肠炎相关结直肠癌作用机制 被引量：12
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作者 卢志华 蒋峰 +6 位作者 王雨吉 姚星冉 袁晓敏 部繁 陈晨 李璐 陈玉根 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期4717-4722,共6页
目的:探讨乌梅丸防治结肠炎相关结直肠癌(CAC)的潜在作用机制。方法:36只C57BL/6J小鼠随机分为空白组、模型组、乌梅丸组。通过偶氮甲烷(AOM)和葡聚糖硫酸钠(DSS)联合应用,建立CAC动物模型。第一循环DSS结束1周后,乌梅丸组小鼠予乌梅丸(... 目的:探讨乌梅丸防治结肠炎相关结直肠癌(CAC)的潜在作用机制。方法:36只C57BL/6J小鼠随机分为空白组、模型组、乌梅丸组。通过偶氮甲烷(AOM)和葡聚糖硫酸钠(DSS)联合应用,建立CAC动物模型。第一循环DSS结束1周后,乌梅丸组小鼠予乌梅丸(6 g·kg^(-1)·d^(-1))灌胃,空白组、模型组小鼠给予等体积0.9%氯化钠溶液灌胃,连续给药8周。在第10周结束时计算小鼠存活率、肿瘤数量、结肠长度等;HE染色观察结肠组织病理学改变;q-PCR检测小鼠结肠组织中白介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF-α)mRNA水平;Western Blot检测固醇调节元件结合蛋白-1(SREBP1)信号转导和转录激活因子3(STAT3)及p-STAT3的表达;使用超高效液相色谱和串联质谱(UPLC-MS/MS)检测小鼠血清脂质代谢物,使用多变量统计工具筛选血清代谢物的变化。结果:乌梅丸组可提高CAC小鼠存活率,减少肿瘤数量(P<0.05),缩小肿瘤体积,改善结肠病理损伤,降低CAC小鼠结肠组织中炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α的水平(P<0.01,P<0.05);乌梅丸能显著下调SREBP1和p-STAT3的表达(P<0.05);靶向脂质代谢组学显示29种与CAC相关脂质代谢物能够被乌梅丸所回调。结论:乌梅丸能有效防治CAC,其机制可能与STAT3/SREBP1介导的脂质代谢相关。 展开更多
关键词 结肠炎相关结直肠癌 乌梅丸 脂质代谢 信号转导和转录激活因子3(STAT3) 固醇调节元件结合蛋白-1(srebp1)
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