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槲皮素介导SPINK6/EGFR信号通路增加非小细胞肺癌细胞的放射敏感性
1
作者 杨瑞 曹旭 明健 《解剖科学进展》 2025年第1期25-28,32,共5页
目的 探究槲皮素对放射抵抗的非小细胞肺癌A549-R细胞放射敏感性的影响及机制。方法 采用梯度增加X射线照射量的方法构建放射抵抗的非小细胞肺癌A549-R细胞,CCK-8法检测不同放射剂量照射对A549和A549-R细胞增殖活性的影响。用5、10和15... 目的 探究槲皮素对放射抵抗的非小细胞肺癌A549-R细胞放射敏感性的影响及机制。方法 采用梯度增加X射线照射量的方法构建放射抵抗的非小细胞肺癌A549-R细胞,CCK-8法检测不同放射剂量照射对A549和A549-R细胞增殖活性的影响。用5、10和15μmol/L槲皮素处理A549-R细胞并用8 Gy的X射线进行照射,CCK-8法检测细胞的增殖活性,平板克隆形成实验检测细胞的克隆形成能力,流式细胞术检测细胞的凋亡率。Western blot法检测不同剂量槲皮素处理对A549-R细胞SPINK6/EGFR信号通路的影响。采用慢病毒建立稳定过表达SPINK6的A549-R细胞,平板克隆形成实验和流式细胞术用于评价槲皮素处理对A549-R细胞放射敏感性的影响。结果 成功建立放射抵抗的A549-R细胞,放射处理后,其增殖活性较亲本A549细胞明显升高。槲皮素处理降低放射处理的A549-R细胞的增殖活性,抑制细胞的克隆形成能力并增加细胞的凋亡率。槲皮素降低A549-R细胞中SPINK6和p-EGFR表达,过表达SPINK6部分逆转槲皮素对放射抵抗的A549-R细胞中p-EGFR表达的下调作用,并部分逆转槲皮素对放射抵抗的A549-R细胞放射敏感性的增敏作用。结论 槲皮素通过下调SPINK6增加放射抵抗的非小细胞肺癌细胞对放射治疗的敏感性,其机制与抑制SPINK6介导的EGFR激活有关。 展开更多
关键词 槲皮素 非小细胞肺癌 放射敏感性 spink6 EGFR
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人源SPINK6在大肠杆菌中的表达优化 被引量：1
2
作者 郑戎秉 李旦 +2 位作者 沈佳怡 Ulf Meyer-Hoffert 吴志宏 《浙江科技学院学报》 CAS 2020年第6期516-522,共7页
丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal型6(serine protease inhibitor Kazal-type 6,SPINK6)蛋白是医学上的重要蛋白。为了高效制备具有生物活性的SPINK6蛋白,使用大肠杆菌表达系统重组表达SPINK6蛋白,经过纯化和酶切后测定了其生物活性,并对其表达... 丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal型6(serine protease inhibitor Kazal-type 6,SPINK6)蛋白是医学上的重要蛋白。为了高效制备具有生物活性的SPINK6蛋白,使用大肠杆菌表达系统重组表达SPINK6蛋白,经过纯化和酶切后测定了其生物活性,并对其表达条件进行了优化。结果表明,飞行时间质谱测得产物的分子量为6061.51 Da,通过此法成功制备获得了重组SPINK6蛋白,并且重组SPINK6蛋白对激肽释放酶相关肽酶5(kallikrein-related peptidase 5,KLK5)(K i=3.02±0.26 nmol/L)和KLK14(K i=1.85±0.05 nmol/L)有较强的抑制作用,具有生物活性。采用pE-SUMO3质粒为载体,在菌体OD 600=0.4时加入1 mmol/L异丙基-β-D硫代半乳糖苷(Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达3 h,重组SPINK6蛋白获得最大表达量,1 L培养液中获得重组SPINK63.32 mg。研究结果可为SPINK6蛋白功能及应用研究提供操作性强的制备方法和稳定的蛋白来源。 展开更多
关键词 丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal型6 激肽释放酶相关肽酶 重组表达
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腺病毒介导的SPINK6表达在肝癌细胞QGY-7703中功能的初步研究 被引量：1
3
作者 戴薪传 俞一鸣 +1 位作者 葛葵葵 黄青山 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期35-41,共7页
为了探讨SPINK6对肝癌细胞的抑制作用,使用缺陷型腺病毒载体构建载有SPINK6基因的重组腺病毒,感染肝脏肿瘤细胞QGY-7703,上调SPINK6蛋白的表达.通过CCK8细胞增殖实验和软琼脂克隆形成实验证实SPINK6对QGY-7703细胞生长的抑制,通过Transw... 为了探讨SPINK6对肝癌细胞的抑制作用,使用缺陷型腺病毒载体构建载有SPINK6基因的重组腺病毒,感染肝脏肿瘤细胞QGY-7703,上调SPINK6蛋白的表达.通过CCK8细胞增殖实验和软琼脂克隆形成实验证实SPINK6对QGY-7703细胞生长的抑制,通过Transwell实验和细胞划痕试验证实SPINK6对QGY-7703细胞的体外细胞迁移与侵袭能力的抑制,为我们进一步揭示SPINK6的作用机制奠定了基础. 展开更多
关键词 重组腺病毒 丝氨酸蛋白酶抑制剂 spink6 抗肿瘤
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SPINK6蛋白在人乳腺癌细胞MCF-7中的表达与定位研究 被引量：1
4
作者 钱雯琼 葛葵葵 +1 位作者 黄晋江 黄青山 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期28-34,F0003,共8页
为探讨Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂6(SPINK6)蛋白的表达定位与其抗肿瘤作用之间的关系,本文通过免疫荧光的方法研究SPINK6蛋白在不同细胞系中的表达与定位,并构建产生pEGFPN1-SPINK6载体转染至乳腺癌细胞系MCF-7中,使用ER-Tracker标记内... 为探讨Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂6(SPINK6)蛋白的表达定位与其抗肿瘤作用之间的关系,本文通过免疫荧光的方法研究SPINK6蛋白在不同细胞系中的表达与定位,并构建产生pEGFPN1-SPINK6载体转染至乳腺癌细胞系MCF-7中,使用ER-Tracker标记内质网、lyso-Tracker标记溶酶体、Dil标记细胞膜,共聚焦显微镜观察SPINK6-GFP融合蛋白的定位.结果表明,天然状态的SPINK6蛋白主要分布在细胞质和细胞膜上,并在细胞质中有一定的聚集.对照载体pEGFP-N1转染的细胞表达的绿色荧光主要分布在细胞核中,细胞质中也有均匀分布,而SPINK6-GFP融合蛋白聚集于内质网和细胞膜上.说明SPINK6蛋白在合成后被分泌到细胞膜外发挥其作用,可能与抗炎症与抗肿瘤转移相关. 展开更多
关键词 丝氨酸蛋白酶抑制剂 spink6 亚细胞定位 抗肿瘤
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