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猪SPACA4蛋白的原核表达与多克隆抗体的制备 被引量:1
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作者 曾繁文 王明明 +3 位作者 朱雪丹 李莉 卫恒习 张守全 《中国畜牧杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期405-410,共6页
本研究旨在制备公猪精子顶体蛋白4(Sperm Acrosome Associated 4,SPACA4)的多克隆抗体(Polyclonal antibody,PAb),以期为揭示猪SPACA4蛋白参与精子受精过程的分子机制提供试验材料。从GeneBank上选取公猪SPACA4基因序列(登录号:NM_00117... 本研究旨在制备公猪精子顶体蛋白4(Sperm Acrosome Associated 4,SPACA4)的多克隆抗体(Polyclonal antibody,PAb),以期为揭示猪SPACA4蛋白参与精子受精过程的分子机制提供试验材料。从GeneBank上选取公猪SPACA4基因序列(登录号:NM_001177929.1)编码区,去掉信号肽与终止子,克隆至pET-SUMO表达载体并转化E.coli Rosstta(DE3)感受态细胞,经1 mol/L IPTG诱导表达及亲和层析纯化后获得重组SPACA4蛋白。将重组蛋白免疫小鼠制备SPACA4 PAb,使用间接ELISA检测抗体效价,并利用WesternBlot法验证SPACA4PAb对公猪精子天然蛋白的特异性。重组质粒pET-SUMO-SPACA4能被IPTG诱导表达,主要以包涵体形式存在,SUMO-SPACA4重组蛋白相对分子质量约为25 KDa,鼠源SPACA4PAb能特异性结合重组蛋白,最高效价为1:2048000。经WesternBlot法检测,SPACA4PAb能识别天然SPACA4蛋白。本研究利用原核表达系统成功制备出效价高、特异性好的公猪SPACA4PAb,并能应用于识别天然SPACA4蛋白,为SPACA4基因的功能和应用研究提供素材。 展开更多
关键词 公猪 精子顶体蛋白4(spaca4) 原核表达 多克隆抗体
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Expression and Bioinformatics Analysis of SPACA4 in Human and Mice
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作者 Ai-fa TANG Zhen-dong YU +5 位作者 Yao-ting GUI Xin GUO Xian-xin LI Wei-xiang LIU Hui ZHU Zhi-ming CAI 《Journal of Reproduction and Contraception》 CAS 2008年第1期9-15,共7页
Objective To analyze the expression of SPACA4 in human and mice. Methods Testes cRNA samples from Balb/c mice of different postnatal days were performed with mouse affymetrix chip to screen the expression of SPACA4 in... Objective To analyze the expression of SPACA4 in human and mice. Methods Testes cRNA samples from Balb/c mice of different postnatal days were performed with mouse affymetrix chip to screen the expression of SPACA4 in mice. Sub-quantitative RT-PCR and bioinformatic tools were used here to describe the expression profile of SPACA4 in mice and human. Results The results of gene chip analysis indicated that the expression of mSPACA4 began after d 35 of postnatal testis in mice. Sub-quantitative RT-PCR assay showed that SPACA4 gene expressed exclusively in mouse and human testis, and mouse mSPACA4 gene expressed after d 35 of postnatal testis that was consistency with the results of gene chip analysis. By bioinformatics analysis, mSPACA4 is located in cell membrane (34.8%) or plasma membrane (34.8%), the signal peptide cleavage site between position 19 and 20 amino acids, transmembrane region between 2-20 and 101-126 amino acids, respectively, on mSPACA4 protein. Conclusion mSPACA4 and hSPACA4 were testis-specific genes, and the expression of mSPACA4 begins after d 35 of postnatal testis in mice. SPACA4 is a candidate for targeting in a sperm-based contraceptive vaccine. 展开更多
关键词 gene chips spaca4 gene SPERMATOGENESIS male contraceptive vaccine
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SPACA4基因在人和小鼠的表达及其生物信息学分析 被引量:2
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作者 唐爱发 余振东 +7 位作者 桂耀庭 郭新 龙云 李贤新 周锦堂 朱辉 高新 蔡志明 《中国男科学杂志》 CAS CSCD 2007年第7期6-9,共4页
目的 分析SPACA4在小鼠和人的表达特性.方法 本研究通过对小鼠SPACA4基因(mSPACA4)在4、9、18、35、54d和6月龄小鼠睾丸中的Affymetrix芯片杂交,结合RT-PCR实验和生物信息学软件,分析mSPACA4及其同源基因hSPACA4的表达特性.结果 芯片... 目的 分析SPACA4在小鼠和人的表达特性.方法 本研究通过对小鼠SPACA4基因(mSPACA4)在4、9、18、35、54d和6月龄小鼠睾丸中的Affymetrix芯片杂交,结合RT-PCR实验和生物信息学软件,分析mSPACA4及其同源基因hSPACA4的表达特性.结果 芯片杂交结果显示,mSPACA4基因在小鼠35d睾丸中开始表达,半定量RT-PCR结果与之完全一致.RT-PCR结果还显示,mSPACA4和hSPACA4分别在8种小鼠组织和10种人组织中呈现睾丸特异性表达.生物信息学分析显示,亚细胞定位预测该基因是跨膜蛋白(34.8%)或质膜上(34.8%)表达.mSPACA4蛋白的信号肽剪切位点在第19~20个氨基酸之间,跨膜区在第2~20及101~126个氨基酸之间.结论 mSPACA4和hSPACA4均为睾丸特异性表达基因,mSPACA4特异性地在35d龄后的小鼠睾丸中表达,SPACA4具有作为男子避孕药的靶点进行研究的潜在价值. 展开更多
关键词 基因芯片 spaca4基因 精子发生 避孕药 男用
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