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鸭肠炎病毒SORF3基因的原核表达及其多克隆抗体的制备 被引量：1
1
作者 母晓宇 董井泉 +3 位作者 孟祥莉 张雪莲 马波 王君伟 《中国家禽》 北大核心 2012年第23期14-17,共4页
以鸭肠炎病毒(DEV)C-KCE株基因组DNA为模板,PCR扩增获得SORF3(S3)基因,在pET-32a(+)/Rosetta(DE3)pLys系统中原核表达。S3重组蛋白经IPTG诱导,SDS-PAGE分析显示外源基因以包涵体形式表达为主,分子质量约为52ku。重组蛋白经Ni-NTA纯化后... 以鸭肠炎病毒(DEV)C-KCE株基因组DNA为模板,PCR扩增获得SORF3(S3)基因,在pET-32a(+)/Rosetta(DE3)pLys系统中原核表达。S3重组蛋白经IPTG诱导,SDS-PAGE分析显示外源基因以包涵体形式表达为主,分子质量约为52ku。重组蛋白经Ni-NTA纯化后免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,琼脂扩散法测得抗体效价为1:4。经Western blotting分析制备的多克隆抗体具有较高的特异性,间接免疫荧光试验证实制备的多克隆抗体与DEV的SORF3编码产物反应性良好,为进一步研究DEVSORF3结构与功能特性奠定了基础。 展开更多
关键词 鸭肠炎病毒 sorf3基因 原核表达
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鸭肠炎病毒SORF3基因的克隆及表达载体的构建
2
作者 刘存霞 吴静 +5 位作者 田雪 赵巧雅 路晓 王林 李玉峰 宋敏训 《家禽科学》 2018年第11期34-37,共4页
克隆鸭病毒性肠炎病毒(Duck Enteritis Virus,DEV)SORF3基因并进行原核表达,为研究SORF3基因功能奠定基础。以DEV基因组为模板,PCR扩增SOFR3基因克隆至表达载体pET32a,构建重组表达质粒pET32a-SORF3,将重组质粒转化至感受态细胞BL21中,I... 克隆鸭病毒性肠炎病毒(Duck Enteritis Virus,DEV)SORF3基因并进行原核表达,为研究SORF3基因功能奠定基础。以DEV基因组为模板,PCR扩增SOFR3基因克隆至表达载体pET32a,构建重组表达质粒pET32a-SORF3,将重组质粒转化至感受态细胞BL21中,IPTG诱导表达并进行SDS-PAGE及Werstern-blot鉴定。结果构建的原核表达质粒pET32aSORF3转化BL21后经IPTG诱导4h,可表达分子量约50kDa融合蛋白,Western blot显示重组蛋白可以被Anti-His标签抗体识别,表明成功构建了pET32a-SORF3原核表达质粒,并能在大肠杆菌中表达具有免疫反应性的SORF3,为SORF3基因的功能研究奠定基础。 展开更多
关键词 鸭肠炎病毒 sorf3 原核表达
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