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茄子花青素糖基转移酶基因SmGT的克隆与生物信息学分析 被引量:4
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作者 胡德龙 《浙江农业科学》 2017年第11期2029-2033,共5页
葡萄糖基转移酶(SmGT)是植物花青素合成途径中的一种关键酶,在植物果实颜色调控方面具有重要的作用。试验以紫色茄子三月茄为材料,设计一对特异性引物,克隆SmGT基因的ORF(开放阅读框),获得长度为1 413 bp的全长序列。序列分析表明,SmGT... 葡萄糖基转移酶(SmGT)是植物花青素合成途径中的一种关键酶,在植物果实颜色调控方面具有重要的作用。试验以紫色茄子三月茄为材料,设计一对特异性引物,克隆SmGT基因的ORF(开放阅读框),获得长度为1 413 bp的全长序列。序列分析表明,SmGT肽链含有470个氨基酸,分子量为52.75 ku,等电点为4.98,是一种参与生物体代谢途径的亲水性多肽。结构域和三级结构分析均表明,SmGT含有典型的UDP-葡萄糖基转移酶结构域,是一种糖基转移酶。蛋白质相似性分析表明,SmGT蛋白与马铃薯、野生番茄、辣椒和矮牵牛的葡萄糖基转移酶相似性分别为93%、93%、91%和87%。SmGT基因的克隆对于研究茄子花青素的生物合成途径以及分子机理具有重要意义。 展开更多
关键词 茄子 糖基转移酶 smgt基因 花青素 生物信息学分析
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纳米化聚酰胺-胺型树枝状聚合物对猪精子介导基因转移效率的影响 被引量:3
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作者 吴斌 戴建军 +6 位作者 张廷宇 张树山 吴彩凤 顾晓龙 陈会兰 张德福 马恒东 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期466-471,共6页
为优化猪精子介导的基因转移(SMGT)技术,提高转基因效率,本试验利用纳米化聚酰胺-胺型树枝状聚合物(PAMAM-D)为载体介导猪精子转染外源DNA,经原位杂交检测其阳性率,体外受精(IVF)分析外源基因的表达。结果显示,0.5μg线状质粒DNA中加入P... 为优化猪精子介导的基因转移(SMGT)技术,提高转基因效率,本试验利用纳米化聚酰胺-胺型树枝状聚合物(PAMAM-D)为载体介导猪精子转染外源DNA,经原位杂交检测其阳性率,体外受精(IVF)分析外源基因的表达。结果显示,0.5μg线状质粒DNA中加入PAMAM-D(质量比20∶1)阳性率最高(P<0.05);孵育时间为90、120min时,阳性率显著高于30、60min组(19.94%、18.57%与8.50%、13.87%;P<0.05);以此条件处理精子,阳性率显著高于无载体和脂质体处理组(23.93%与7.25%、13.25%;P<0.05)。各处理精子经IVF后,PAMAM-D组EGFP表达率显著高于其他2组(9.19%与4.81%、3.43%;P<0.05),各组绿色荧光胚胎经基因组PCR分析均能检测到EGFP基因。结果表明,PAMAM-D可有效介导猪精子转染外源DNA,并通过体外受精将外源基因导入胚胎中。 展开更多
关键词 smgt 精子 PAMAM-D
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CD_4分子结构和功能研究新进展 被引量:1
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作者 赵博渊 徐菊梅 +1 位作者 任天武 赵永聚 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第6期35-37,共3页
CD4分子属于免疫球蛋白超家族,其胞外区由4个免疫球蛋白样的结构域组成,在胸腺细胞发育的过程中,CD4分子的表达受多种因素的影响。由于该分子在T淋巴细胞发育、信号转导、细胞间通讯、细胞免疫应答和体液免疫应答的过程中发挥着重要作用... CD4分子属于免疫球蛋白超家族,其胞外区由4个免疫球蛋白样的结构域组成,在胸腺细胞发育的过程中,CD4分子的表达受多种因素的影响。由于该分子在T淋巴细胞发育、信号转导、细胞间通讯、细胞免疫应答和体液免疫应答的过程中发挥着重要作用,而被深入研究,对其功能有了初步的了解。成熟人类Th细胞表面表达的CD4(T4)受体,具有调控并识别抗原的能力,最新研究发现,CD4分子在精子介导转基因过程的外源DNA内化机制中还扮演着不可或缺的角色。 展开更多
关键词 CD4 结构 功能 人类免疫缺陷病毒(HIV) 精子介导(smgt)
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通过睾丸内注射转染外源DNA在小鼠精子的表达 被引量:7
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作者 谢畅 于明举 +3 位作者 惠楠 王岭斌 李文杰 赵永聚 《动物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期151-157,共7页
为研究睾丸内注射外源DNA法生产转基因小鼠(Mus musculus)的可行性,并探讨注射DNA的最佳浓度。将环形的质粒DNA pEGFP-N1与脂质体混合制备DNA-脂质体复合物,按DNA浓度不同分为0.08μg/μl、0.12μg/μl和0.24μg/μl3组,分别注射入成年... 为研究睾丸内注射外源DNA法生产转基因小鼠(Mus musculus)的可行性,并探讨注射DNA的最佳浓度。将环形的质粒DNA pEGFP-N1与脂质体混合制备DNA-脂质体复合物,按DNA浓度不同分为0.08μg/μl、0.12μg/μl和0.24μg/μl3组,分别注射入成年SPF级昆明小鼠睾丸内,同时设空白对照;每组处理公鼠2只,注射5d后每只与3只成年母鼠同笼,20d后在荧光显微镜下检测公鼠附睾精子,并制作睾丸石蜡切片,检测绿色荧光蛋白(GFP)的表达;PCR法检测各组后代阳性率。结果显示,3组小鼠附睾荧光精子比例分别为9.09%、47.06%和27.78%。3组小鼠的睾丸石蜡切片中均可看到不同强度的GFP表达。后代经PCR检测阳性率分别为17.26%、47.61%和22.11%。本实验证实了睾丸注射法能使外源DNA整合进入精子基因组,并能在自身和后代中得到表达,本研究中外源DNA注射浓度以0.12μg/μl效果为最佳。 展开更多
关键词 PEGFP 睾丸注射 精子介导基因转移 转基因小鼠
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精子与慢病毒共孵育条件的优化以及转基因猪的制备 被引量:5
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作者 蔡伟光 习欠云 +7 位作者 肖敏 关立增 孟繁明 束刚 朱晓彤 江青艳 吴珍芳 张永亮 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1903-1914,共12页
【目的】探索慢病毒与精子共孵育的方法,并制备转基因猪。【方法】采用正交试验分析精子密度、病毒量、精子与慢病毒共孵育时间、精子与慢病毒共孵育温度对精子活力的影响,采用PCR和Southern blotting检测转基因。【结果】①优化慢病毒... 【目的】探索慢病毒与精子共孵育的方法,并制备转基因猪。【方法】采用正交试验分析精子密度、病毒量、精子与慢病毒共孵育时间、精子与慢病毒共孵育温度对精子活力的影响,采用PCR和Southern blotting检测转基因。【结果】①优化慢病毒与精子共孵育条件为:100μL慢病毒原液(5×105cfu)与1.0×107个/mL精子在17℃下孵育30 min;②与病毒孵育后的精子(109个/mL)给母猪人工授精时,经PCR检测49头仔猪中有14头呈阳性;③Southern blotting结果表明,8头PCR阳性仔猪中,4头融合了外源基因。【结论】优化了精子与慢病毒共孵育的条件(100μL慢病毒原液(5×105cfu)与1.0×107个/mL精子在17℃下孵育30 min),成功制备了转基因猪,并检测有外源基因的融合。 展开更多
关键词 慢病毒 精子介导转基因 转基因猪
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精子介导法制备GHRH转基因猪的研究 被引量:4
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作者 丁景华 吴珍芳 +7 位作者 习欠云 刘小龙 蔡伟光 孟繁民 束刚 王松波 江青艳 张永亮 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期693-697,共5页
以eGFP为报告基因,生长激素释放激素(GHRH)为目的基因,利用精子介导的基因转移方法,将构建慢病毒载体质粒LV-EGFP-GHRH直接和猪精子孵育,再通过体外人工受精建立GHRH转基因猪模型。经PCR检测,52头后代中发现7头阳性个体,转基因效率为7.... 以eGFP为报告基因,生长激素释放激素(GHRH)为目的基因,利用精子介导的基因转移方法,将构建慢病毒载体质粒LV-EGFP-GHRH直接和猪精子孵育,再通过体外人工受精建立GHRH转基因猪模型。经PCR检测,52头后代中发现7头阳性个体,转基因效率为7.42%。本研究探索了应用精子介导的转基因方法将GHRH转移到动物体内,为猪的转基因育种提供了新的依据。 展开更多
关键词 转基因 精子介导 GHRH
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利用精子介导法建立hHT/hDAF双基因转移小鼠模型 被引量:1
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作者 郭战军 马毅 +6 位作者 李三华 韩瑞发 李胜芝 孙光 乔宝民 马腾骧 陈永福 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2010年第3期43-46,共4页
为探讨超急排斥反应(Hyperacute rejection,HAR)及延迟性异种排斥反应(Delayed xenograft rejection,DXR)的分子调控机制,采用优化的精子介导法(Sperm-mediated gene transfer,SMGT)对建立hHT/hDAF双基因转移小鼠模型进行了研究。结果表... 为探讨超急排斥反应(Hyperacute rejection,HAR)及延迟性异种排斥反应(Delayed xenograft rejection,DXR)的分子调控机制,采用优化的精子介导法(Sperm-mediated gene transfer,SMGT)对建立hHT/hDAF双基因转移小鼠模型进行了研究。结果表明,应用树枝状聚合物(Dendrimers)优化SMGT后,2细胞胚GFP+RFP的阳性率达到4.51%,同对照组相比差异极显著(P<0.01)。选取标记基因GFP+RFP双阳性的胚胎进行移植后获得36只仔鼠,PCR及Southern Blot检测结果表明,17只小鼠PCR结果呈hHT+hDAF双阳性,其中5只小鼠Southern Blot结果呈hHT+hDAF双阳性。上述结果表明,成功建立了Hht/hDAF双基因转移小鼠模型。 展开更多
关键词 精子介导法 双基因 HHT hDAF 转基因 小鼠
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精子介导转基因动物的制备 被引量:1
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作者 秦洁 李碧春 +1 位作者 蔡琳琳 季从亮 《生物技术通报》 CAS CSCD 2005年第1期34-38,共5页
近年来 ,通过显微注射DNA至孵育的卵母细胞原核或外源基因转染后的胚胎干细胞进行转基因动物的生产已取得了令人瞩目的成就。在过去的 1 0年中 ,以精子作载体制备转基因哺乳动物或脊椎动物也取得了一些不同程度的进展。这些技术主要包... 近年来 ,通过显微注射DNA至孵育的卵母细胞原核或外源基因转染后的胚胎干细胞进行转基因动物的生产已取得了令人瞩目的成就。在过去的 1 0年中 ,以精子作载体制备转基因哺乳动物或脊椎动物也取得了一些不同程度的进展。这些技术主要包括 :直接将外源DNA与精子共孵育至成熟 ;提取分离的精子DNA或进行预处理至精子发育成熟 ;以及在辅助受精前分离精子细胞等。此外 ,一些显微注射技术 ,如在输精管内进行体内直接转染雄性生殖细胞 ;将体内转染的雄性生殖细胞植入已分离的雄性生殖细胞 ,再显微注射至受体的睾丸 ,这些技术也逐渐成熟起来。研究表明 ,通过体内、体外转染外源DNA的显微操作技术只需将雄性受体与野生型雌性交配就可产生出转基因的后代个体 ,同时也避免了辅助受精和胚胎操作带来的机械损伤 ,因此具有一定的优势。本文综述了精子介导转基因 (SMGT)技术的发展历程、研究现状及前沿进展。 展开更多
关键词 精子 体内 转染 介导 辅助 受体 显微操作 转基因 成熟 外源DNA
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精子介导法制备转基因猪的研究 被引量:1
9
作者 刘羞菲 苗向阳 +1 位作者 白林 张红涛 《中国农学通报》 CSCD 2007年第7期19-22,共4页
主要简述了应用转基因猪的研究概况,介绍了几种以精子作为载体的转基因方法,分析了外源DNA进入精子的影响因素,展望了利用精子为载体生产转基因猪的应用前景。
关键词 精子介导法 转基因
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Fluorescence Tracking of Exogenous DNA in Genetic Transformation of the Chinese Oak Silkmoth Antheraea Pernyi via Sperm-Mediated Gene Transfer 被引量:1
10
作者 刘丹梅 李文利 《Journal of Donghua University(English Edition)》 EI CAS 2014年第4期391-395,共5页
Exogenous DNA expressing green fluorescent protein( GFP) and labeled with fluorescein isothiocyanate( FITC) was used to transform the Chinese oak silkmoth Antheraea pernyi( A. pernyi)via sperm-mediated gene transfer( ... Exogenous DNA expressing green fluorescent protein( GFP) and labeled with fluorescein isothiocyanate( FITC) was used to transform the Chinese oak silkmoth Antheraea pernyi( A. pernyi)via sperm-mediated gene transfer( SMGT). Sperms entry into the female reproductive system and eggs were observed using fluorescence microscopy. The ability of A. pernyi sperms to uptake exogenous DNA was confirmed,and transfer of the exogenous DNA was shown by GFP expression in the transgenic eggs. Our result suggested that SMGT could also be used to directly generate transgenic A. pernyi expressing functional genes of interest. 展开更多
关键词 Antheraea pernyi(A.pernyi) exogenous DNA fluorescein isothiocyanate(FITC) label green fluorescent protein(GFP) sperm-mediated gene transfer(smgt)
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表面机械自身纳米化研究进展 被引量:2
11
作者 赵云龙 《新技术新工艺》 2015年第3期135-139,共5页
棒状和板状金属材料是工程领域中应用广泛的金属型材。采用表面机械自身纳米化技术可以提高材料的力学性能和抗磨损性能。本文从表面机械自身纳米化的基本原理与制备技术、表面机械自身纳米化对材料性能的影响以及表面机械自身纳米化需... 棒状和板状金属材料是工程领域中应用广泛的金属型材。采用表面机械自身纳米化技术可以提高材料的力学性能和抗磨损性能。本文从表面机械自身纳米化的基本原理与制备技术、表面机械自身纳米化对材料性能的影响以及表面机械自身纳米化需要解决的主要问题等3个方面,介绍了表面机械自身纳米化研究工作取得的进展和发展方向。 展开更多
关键词 自纳米化 强度 塑性 梯度纳米材料 表面机械碾磨技术 梯度纳米晶
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脂质体介导FecB基因转染太行山羊精子的研究
12
作者 崔凯 刘月琴 +2 位作者 张英杰 孙军龙 王鹏 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期97-100,110,共5页
以太行山羊为研究对象,探索精子作为外源基因载体建立转FecB目的基因山羊的可行性,以及脂质体对转染效率的影响。采用共培养与阳离子脂质体介导2种方法转染精子,用原位杂交等技术检测FecB目的基因片段在精子中的存在及存在部位,并对2种... 以太行山羊为研究对象,探索精子作为外源基因载体建立转FecB目的基因山羊的可行性,以及脂质体对转染效率的影响。采用共培养与阳离子脂质体介导2种方法转染精子,用原位杂交等技术检测FecB目的基因片段在精子中的存在及存在部位,并对2种方法进行分析。结果表明:太行山羊的精子具有主动捕获外源基因的能力,共培养法精子阳性率为18.3%,脂质体介导精子阳性率为38.7%,脂质体的存在显著提高了精子的转染效率。太行山羊的精子能够被脂质体包被的FecB目的基因片段转染,为精子载体法制备FecB转基因太行山羊提供依据。 展开更多
关键词 FECB基因 脂质体 精子介导基因转移 太行山羊
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预应变对梯度结构IF钢力学性能的影响 被引量:1
13
作者 孙将达 武晓雷 +1 位作者 姚春发 韩培德 《热加工工艺》 CSCD 北大核心 2016年第4期34-36,共3页
通过对表面机械研磨技术(Surface mechanical grinding treatment,SMGT)的改进,加工出具有梯度结构的IF钢板。并且通过准静态拉伸试验,研究得出:SMGT加工过程中,随压入深度的增加,屈服强度越来越高,但均匀塑性越来越低。
关键词 IF钢 表面机械研磨 梯度结构 力学性能
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转基因鸡的制备方法探讨
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作者 张红涛 苗向阳 +1 位作者 白林 刘羞菲 《生物技术通报》 CAS CSCD 2007年第5期79-83,共5页
由于鸡本身的众多优点,转基因鸡的研究逐渐受到了研究者的重视,简要介绍了转基因鸡的发展史,对各种转基因技术方法进行了比较和分析,提出了每种方法的优缺点,尤其在精子介导法上作了较为详细的论述,并展望了转基因鸡的应用前景。
关键词 转基因 精子介导法 禽类 显微注射
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阳离子多聚物PEI结合电穿孔实现小鼠精子的核内转染
15
作者 黄吴键 袁进 +1 位作者 安靓 李进 《中国比较医学杂志》 CAS 2008年第6期35-38,I0005,共5页
目的联合运用阳离子多聚物PEI和方波电穿孔两种不同机制的转染手段,以期克服精子难转染的问题。方法采用FITC标记的线性阳离子多聚物JetPEI-FluoF与适量的质粒pCX-EGFP形成复合物作为转染示踪物质进行转染,通过激光共聚焦显微镜,检测复... 目的联合运用阳离子多聚物PEI和方波电穿孔两种不同机制的转染手段,以期克服精子难转染的问题。方法采用FITC标记的线性阳离子多聚物JetPEI-FluoF与适量的质粒pCX-EGFP形成复合物作为转染示踪物质进行转染,通过激光共聚焦显微镜,检测复合物在细胞的分布情况。结果与对照组单纯使用PEI转染相比较,联合使用组虽然精子活力和活率有一定程度的下降,但是无论胞质还是胞核荧光物质的携带量都有很大程度的提高,实现了对精子的核内转染。结论本实验为我们以后开展大动物精子载体法的研究提供了一个成功的模式。 展开更多
关键词 电穿孔 JetPEI-FluoF 小鼠精子 核内转染 精子载体法
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胞质内精子注射法介导外源DNA生产转基因动物
16
作者 王荣祥 刘国辉 +2 位作者 徐旭俊 陈建泉 成国祥 《上海交通大学学报(农业科学版)》 2012年第2期60-65,共6页
通过胞质内精子注射法介导转基因已经成为生产转基因动物的一种有效手段。然而传统的ICSI介导法用冻融精子或Triton X-100处理的精子作为携带外源DNA的载体,经胚胎移植后生产转基因后代的效率很低,主要原因为这些处理方式在提高转染效... 通过胞质内精子注射法介导转基因已经成为生产转基因动物的一种有效手段。然而传统的ICSI介导法用冻融精子或Triton X-100处理的精子作为携带外源DNA的载体,经胚胎移植后生产转基因后代的效率很低,主要原因为这些处理方式在提高转染效率的同时对精子染色体造成了较大程度的损伤。最近研究者们提出了一种使用高浓度碱液对精子进行简单的预处理,高效地生产转基因后代的方法。这些精子完全失去了质膜与顶体,但仍保留有核的完整性,并且可以高效的将外源基因插入宿主基因组,比传统的精子处理方法获得了更理想的转基因动物的生产效率。 展开更多
关键词 胞质内精子注射 精子介导的转基因 转基因效率 DNA损伤
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