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巨噬细胞向肌成纤维细胞转分化通过TGF-β1/Smad3信号通路加重缺血-再灌注损伤后肾纤维化
1
作者 杨艳燕 黄静蓉 +1 位作者 罗朋立 陶涛 《器官移植》 北大核心 2026年第2期266-274,共9页
目的探讨巨噬细胞-肌成纤维细胞转分化(MMT)在缺血-再灌注损伤(IRI)所致急性肾损伤(AKI)后肾纤维化过程中的作用及可能的机制。方法采用肾缺血-再灌注构建小鼠AKI模型,随机分为对照组(Con组)、假手术组(Sham组)、IRI术后1 d组(IRI 1d组)... 目的探讨巨噬细胞-肌成纤维细胞转分化(MMT)在缺血-再灌注损伤(IRI)所致急性肾损伤(AKI)后肾纤维化过程中的作用及可能的机制。方法采用肾缺血-再灌注构建小鼠AKI模型,随机分为对照组(Con组)、假手术组(Sham组)、IRI术后1 d组(IRI 1d组)、IRI术后3 d组(IRI 3 d组)、IRI术后14 d组(IRI 14 d组),每组5只。检测肾系数、血清肌酐(Scr)和肾损伤分子-1(KIM-1)评估肾损伤情况;过碘酸-雪夫(PAS)染色评估肾小管损伤及炎症细胞浸润情况;Masson染色和免疫组织化学染色评估胶原沉积及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(COLⅠ)表达情况;流式细胞术分析巨噬细胞浸润及表型;流式细胞术和免疫荧光染色分析MMT;蛋白质印迹法检测转化生长因子(TGF)-β1/Smad3信号通路蛋白。结果与Sham组比较,IRI 1 d组肾系数、Scr和KIM-1水平升高,IRI 3 d组肾系数、KIM-1水平升高;与IRI 1 d组比较,IRI 14 d组肾系数和KIM-1水平下降;与IRI 3 d组比较,IRI 14 d组肾系数、Scr和KIM-1水平下降(均为P<0.05)。PAS染色显示肾小管损伤在IRI 3 d最严重。Masson染色显示胶原沉积随时间延长逐渐增加,免疫组织化学染色显示,α-SMA和COLⅠ于IRI后1 d开始增加,持续到14 d(均为P<0.05)。巨噬细胞浸润自IRI术后1 d开始增加,并持续至14 d(P<0.05)。M1型巨噬细胞在IRI术后1 d迅速升高后下降,而M2型巨噬细胞则在IRI术后3 d增加并持续高水平至14 d(P<0.05)。MMT自IRI术后3 d开始增加,持续到14 d,M2型巨噬细胞是MMT细胞的主要表型(均为P<0.05)。与Sham组比较,IRI 1 d组、IRI 3 d组、IRI 14 d组TGF-β1蛋白表达增加,pSmad3/Smad3升高(均为P<0.05)。结论M2型巨噬细胞可能通过MMT促进IRI-AKI后肾纤维化进展,此过程与TGF-β1/Smad3信号通路的激活密切相关。 展开更多
关键词 巨噬细胞 缺血-再灌注损伤 急性肾损伤 巨噬细胞-肌成纤维细胞转分化 肾纤维化 胶原蛋白 转化生长因子β1 smad3
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5′tiRNA-His-GTG促进Smad3磷酸化加重心脏纤维化
2
作者 蔡子阳 蔡煜炜 严江涛 《华中科技大学学报(医学版)》 北大核心 2026年第1期1-10,共10页
目的本研究旨在探索心脏纤维化相关的转运RNA衍生小RNA(tsRNA),并探究其调控机制与临床相关性。方法通过PANDORA-seq筛选心脏纤维化相关tsRNA,发现5′tiRNA-His-GTG表达显著上调。采用qRT-PCR、Western blot、CCK-8、EdU等方法评估5′ti... 目的本研究旨在探索心脏纤维化相关的转运RNA衍生小RNA(tsRNA),并探究其调控机制与临床相关性。方法通过PANDORA-seq筛选心脏纤维化相关tsRNA,发现5′tiRNA-His-GTG表达显著上调。采用qRT-PCR、Western blot、CCK-8、EdU等方法评估5′tiRNA-His-GTG对心脏纤维化过程的影响。此外,通过RNA pulldown和RIP-qPCR探究5′tiRNA-His-GTG在TGF-β1/Smad3通路中的调控机制。检测临床病患血浆样本中5′tiRNA-His-GTG的表达水平,并使用多因素Logistic回归分析5′tiRNA-His-GTG是否构成冠状动脉粥样硬化性心脏病(CAD)的独立危险因素。结果过表达5′tiRNA-His-GTG促进心脏成纤维细胞的纤维化反应,增强TGF-β1/Smad3通路中Smad3的磷酸化进而激活下游纤维化相关基因COL1A1和ACTA2的转录和翻译。5′tiRNA-His-GTG与Smad3互相作用。5′tiRNA-His-GTG在CAD组血浆中的水平大约为对照组的4倍,并且5′tiRNA-His-GTG与CAD发病之间存在独立相关性。结论5′tiRNA-His-GTG通过与Smad3相互作用促进Smad3磷酸化,进而调节心脏纤维化过程。 展开更多
关键词 心脏纤维化 转运RNA衍生小RNA 非编码小RNA 磷酸化 TGF-β1/smad3通路
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树豆酮酸A衍生物XJ-60通过抑制SP1/TGF-β/Smad3信号轴改善非酒精性脂肪肝病小鼠的肝纤维化
3
作者 耿召碟 胡丽 +6 位作者 代云莉 罗荣刚 徐韬 廖旭阳 袁质平 王建塔 肖瑛 《南方医科大学学报》 北大核心 2026年第2期362-373,共12页
目的探讨树豆酮酸A衍生物XJ-60是否可通过抑制SP1/TGF-β/Smad3信号通路发挥改善非酒精性脂肪肝肝纤维化的作用。方法体内实验:12只db/db小鼠采用完全随机设计分成非酒精性脂肪肝模型组(NAFLD组)和给药组(XJ-60组),6只/组;db/m小鼠为正... 目的探讨树豆酮酸A衍生物XJ-60是否可通过抑制SP1/TGF-β/Smad3信号通路发挥改善非酒精性脂肪肝肝纤维化的作用。方法体内实验:12只db/db小鼠采用完全随机设计分成非酒精性脂肪肝模型组(NAFLD组)和给药组(XJ-60组),6只/组;db/m小鼠为正常对照组(NC组),6只/组,XJ-60组给予XJ-6050 mg/(kg/d)灌胃给药。HE、油红O染色和组织上清液丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)判断NAFLD成模情况;免疫组织化学染色观察肝组织中特异性蛋白1(Sp1)、纤连蛋白(FN)的表达部位,Western blotting观察肝组织中Sp1、上皮细胞向间充质细胞转分化(EMT)、细胞外基质(ECM)相关指标的表达情况;ELISA检测肝组织中白介素-6(IL-6)的表达;Sp1与钙黏蛋白(E-ca)和Sp1与α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)进行相关性分析。体外实验:采用CCK8法筛选XJ-60治疗NAFLD的有效浓度;AML12细胞分为正常对照组(NC组),NAFLD模型组(PO组)采用游离脂肪酸刺激复制模型;溶剂对照组(PO+DMSO组)在PO组的基础上加入与XJ-60相同剂量的DMSO作对照;药物治疗组(PO+XJ-60组)加入游离脂肪酸后加入不同浓度梯度的XJ-60。油红O染色观察各组肝细胞脂滴沉积情况;Western blotting和Real-time qPCR检测各组SP1、转化生长因子-β(TGF-β)、Smad3、p-Smad3、EMT、ECM相关指标的表达情况;免疫荧光染色观察SP1、p-Smad3定位情况;并通过敲低SP1验证TGF-β/Smad3信号轴在NAFLD中的作用。结果体内实验结果表明XJ-60可降低db/db小鼠甘油三酯和总胆固醇(P<0.05);模型组HE、油红O染色以及ALT、AST提示存在肝细胞损伤且肝脏脂滴沉积模型复制成功(P<0.05);NAFLD组小鼠肝脏已出现炎性细胞浸润和纤维化表型,XJ-60组有所改善;XJ-60组IL-6降低(P<0.05);FN、SP1分别在细胞质和细胞核中表达增多;相关性分析结果提示Sp1和E-ca呈负相关和α-SMA呈正相关(P<0.05)。体外实验中XJ-60治疗NAFLD最佳浓度为10μmol/L(P<0.01),且PO组AML12细胞中的脂滴沉积增多,XJ-60组脂滴沉积减少(P<0.01);与PO组相比,XJ-60治疗后ECM和EMT相关指标mRNA水平和蛋白水平表达均降低(P<0.05),SP1、TGF-β、p-Smad3蛋白表达水平降低(P<0.05)。敲低SP1可显著降低TGF-β、p-Smad3和ECM的表达(P<0.05)。结论XJ-60在db/db小鼠NAFLD肝脏中发挥的抗纤维化作用及改善脂滴沉积的作用机制可能是通过抑制SP1的表达从而抑制TGF-β/Smad3信号通路致纤维化作用,减少下游细胞外基质的分泌和沉积。 展开更多
关键词 非酒精性脂肪肝 特异性蛋白1 转化生长因子-β smad3蛋白 树豆酮酸A衍生物
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基于PUP-IT技术的Smad3稳转细胞系构建及其蛋白互作生物素标记分析
4
作者 李倩倩 张璐娜 +3 位作者 倪玉芳 王洪连 王丽 李健春 《中国药理学通报》 北大核心 2026年第2期393-398,共6页
目的开发并评估PUP-IT邻近标记技术在筛选Smad3互作蛋白及构建蛋白互作网络中的应用价值,为药理学研究提供高效可重复的新方法。方法通过同源重组构建PafAlinker-Smad3和羧化酶融合Pup(E)蛋白(Bccp)表达系统,分别克隆入转座子载体,转座... 目的开发并评估PUP-IT邻近标记技术在筛选Smad3互作蛋白及构建蛋白互作网络中的应用价值,为药理学研究提供高效可重复的新方法。方法通过同源重组构建PafAlinker-Smad3和羧化酶融合Pup(E)蛋白(Bccp)表达系统,分别克隆入转座子载体,转座酶介导稳定整合至TCMK1细胞,建立稳定过表达细胞系。优化Bccp诱导条件后,利用链霉亲和素磁珠富集生物素标记蛋白,结合质谱分析鉴定Smad3互作蛋白,并与Co-IP实验结果对比。结果成功构建PUPIT稳定过表达细胞系,鉴定出多种Smad3互作蛋白,包括已报道的疾病相关蛋白及新候选蛋白。PUP-IT技术相比Co-IP覆盖范围更广,能检测到短暂或低亲和力互作,表现出更高灵敏度和特异性。结论PUP-IT技术作为创新蛋白互作检测方法,具备高效、可重复和实用性,可有效补充传统Co-IP技术,为解析Smad3相关蛋白互作网络及其细胞信号转导和疾病机制提供新思路。 展开更多
关键词 邻近标记 PUP-IT系统 smad3 肾小管上皮细胞 蛋白质互作网络 肾纤维化
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基于TGF-β_(1)/Smad3信号通路探讨姜黄素对皮肤创伤大鼠瘢痕形成的影响
5
作者 俞志敏 宋英 黄道强 《中国美容医学》 2026年第2期45-51,共7页
目的:旨在探讨姜黄素对皮肤创伤大鼠瘢痕形成的调控作用,并基于转化生长因子-β_(1)(Transforming Growth Factor-β_(1),TGF-β_(1))/SMAD家族成员3(SMAD Family Member 3,Smad3)信号通路探讨其潜在作用机制。方法:构建皮肤创伤SD大鼠... 目的:旨在探讨姜黄素对皮肤创伤大鼠瘢痕形成的调控作用,并基于转化生长因子-β_(1)(Transforming Growth Factor-β_(1),TGF-β_(1))/SMAD家族成员3(SMAD Family Member 3,Smad3)信号通路探讨其潜在作用机制。方法:构建皮肤创伤SD大鼠模型,将66只大鼠随机分为六组:对照组(n=6)、模型组(n=12)、阳性药物组(n=12)、姜黄素低剂量组(n=12)、姜黄素中剂量组(n=12)、姜黄素高剂量组(n=12)。通过形态学观察评估创面愈合率、愈合时间和瘢痕增生指数;采用HE染色观察各组皮肤创伤组织病理变化;采用ELISA试验检测皮肤创伤组织中羟脯氨酸(Hydroxyproline,HYP)含量、肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)以及白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)水平变化;采用RT-qPCR和WB分析皮肤创伤大鼠中TGF-β_(1)、Smad2、Smad3 mRNA表达水平以及血管内皮细胞生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)、α平滑肌肌动蛋白(Alpha-smooth Muscle Actin,αSMA)、Ⅰ型胶原蛋白(Collagen TypeⅠ,ColⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(Collagen TypeⅢ,ColⅢ)、TGF-β_(1)、Smad2、Smad3蛋白表达水平。结果:与对照组相比,模型组皮肤创伤大鼠创面愈合率、HYP含量、VEGF、αSMA、ColⅠ、ColⅢ明显降低(P<0.05),且皮肤创面组织可见大量炎性细胞浸润,而创面完全愈合时间、瘢痕增生指数、TNF-α、IL-6、TGF-β_(1)、Smad2、Smad3水平明显增加(P<0.05);与模型组相比,阳性药物组和姜黄素中、高剂量组皮肤创伤大鼠创面愈合率、HYP含量、VEGF、αSMA、ColⅠ、ColⅢ明显升高(P<0.05),且皮肤创面组织可见大量炎性细胞浸润,而创面完全愈合时间、瘢痕增生指数、TNF-α、IL-6、TGF-β_(1)、Smad2、Smad3水平明显降低(P<0.05);与姜黄素低剂量组相比,姜黄素中、高剂量组皮肤创伤大鼠创面愈合率、HYP含量、VEGF、αSMA、ColⅠ、ColⅢ明显升高(P<0.05),且皮肤创面组织可见大量炎性细胞浸润,而创面完全愈合时间、瘢痕增生指数、TNF-α、IL-6、TGF-β_(1)、Smad2、Smad3水平明显降低(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论:姜黄素能够通过抑制TGF-β_(1)/Smad3信号通路来抑制皮肤创伤大鼠瘢痕形成,促进创面愈合。 展开更多
关键词 姜黄素 皮肤创伤 瘢痕 TGF-β_(1)/smad3信号通路
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微小RNA-328-5p通过靶向Saa3调控TGF-β/Smad3信号通路抑制慢性胰腺炎纤维化进展
6
作者 洪生杰 李瑞曦 +5 位作者 何勇飞 陶强 王继才 翟航 史宪杰 张广权 《中华实验外科杂志》 2026年第1期41-44,共4页
目的探讨微小RNA-328-5p(miR-328-5p)在慢性胰腺炎纤维化中的作用及其机制。方法2023年11月至2024年8月在体外以转化生长因子-β(TGF-β)激活胰腺星状细胞(PSCs),按照转染miR-328-5p mimic或inhibitor分为活化组和静息组,观察其对细胞... 目的探讨微小RNA-328-5p(miR-328-5p)在慢性胰腺炎纤维化中的作用及其机制。方法2023年11月至2024年8月在体外以转化生长因子-β(TGF-β)激活胰腺星状细胞(PSCs),按照转染miR-328-5p mimic或inhibitor分为活化组和静息组,观察其对细胞活化及胶原合成的影响;采用生物信息学与荧光素酶报告基因实验验证靶基因;通过qRT-PCR与蛋白质印迹法(Western blot)分析相关信号通路;在慢性胰腺炎小鼠模型中评估miR-328-5p对胰腺纤维化的影响。组间比较采用独立样本t检验。结果在TGF-β刺激的PSCs活化组中miR-328-5p表达低于静息组(0.53±0.04比1.00±0.03,t=11.01,P<0.01);而活化组靶基因Saa3的RNA表达高于静息组(3.57±0.15比1.00±0.12,t=16.71,P<0.01)。通过HE染色、马松染色、天狼星红染色以及免疫组化评估miR-328-5p对CP小鼠胰腺组织的影响,miR-328-5p过表达通过抑制胰腺星状细胞活化,减轻慢性胰腺炎小鼠的胰腺纤维化及组织损伤。结论miR-328-5p通过靶向Saa3抑制TGF-β/Smad3通路,从而减缓慢性胰腺炎纤维化进程。 展开更多
关键词 慢性胰腺炎 胰腺星状细胞 微小核糖核酸-328-5p 血清淀粉样蛋白A3 转化生长因子-β/Smad同源物3信号通路
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基于TGF-β_(1)/p-Smad3信号通路探究补肺通痹汤抑制糖尿病相关性肺纤维化的作用机制 被引量：3
7
作者 王岗 岳仁宋 +2 位作者 杨启悦 张丹 陈新 《中国实验方剂学杂志》 北大核心 2025年第10期176-184,共9页
目的:基于转化生长因子β_(1)/磷酸化Smad同源物3(TGF-β_(1)/p-Smad3)信号通路研究补肺通痹汤对糖尿病相关性肺纤维化的影响。方法:采用链脲佐菌(60 mg·kg^(-1))及博来霉素(24.80 U·kg^(-1))气管内注射给药法制备糖尿病复合... 目的:基于转化生长因子β_(1)/磷酸化Smad同源物3(TGF-β_(1)/p-Smad3)信号通路研究补肺通痹汤对糖尿病相关性肺纤维化的影响。方法:采用链脲佐菌(60 mg·kg^(-1))及博来霉素(24.80 U·kg^(-1))气管内注射给药法制备糖尿病复合肺纤维化大鼠模型将60只大鼠随机分为空白组、模型组、补肺通痹汤低剂量组(3.98 g·kg^(-1))、补肺通痹汤中剂量组(7.95 g·kg^(-1))、补肺通痹汤高剂量组(15.90 g·kg^(-1))、吡非尼酮组(0.36 mg·kg^(-1)),每组10只。造模成功后给药,连续4周,每日1次。给药结束后测定空腹血糖、肺功能;化学免疫法检测血清羟脯氨酸(Hyp)、透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)水平;干湿法测定肺系数;苏木素-伊红(HE)染色检测肺组织病理学变化,马松(Masson)染色检测肺组织纤维化程度;聚合酶链式反应(PCR)检测TGF-β_(1)、p-Smad3、Smad3、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白α1链(Col1A1)、纤维连接蛋白(Fibronectin)mRNA表达;蛋白免疫印迹法检测肺组织中TGF-β_(1)、p-Smad3、Smad3、α-SMA、Col1A1、Fibronectin蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组HE染色显示肺组织内存在肺泡间隔增厚、肺血管基底膜明显增厚,肺泡结构被严重破坏,肺实质结构紊乱,炎性细胞浸润比例增加;Masson染色结果显示可见大量的蓝色胶原沉淀,支气管壁、血管壁、肺间质、肺泡壁均可见大量的胶原纤维增生,纤维化程度显著。与模型组比较,补肺通痹汤低、中、高剂量组和吡非尼酮组空腹血糖值明显降低(P<0.05);用力肺活量(FVC)和胞质动力蛋白(Cydn)明显上升(P<0.05);FEV0.3/FEV水平、肺系数明显升高(P<0.05);HE、Masson染色提示肺纤维化程度减轻;Hyp、HA、LN水平明显升高;α-SMA、Col1A1、Fibronectin mRNA表达显著降低;TGF-β_(1)、Smad3、p-Smad3、α-SMA、Col1A1、Fibronectin蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论:补肺通痹汤可抑制糖尿病肺纤维化,其机制和抑制TGF-β_(1)/p-Smad3信号通路有关。 展开更多
关键词 转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))/磷酸化Smad同源物3(p-smad3)信号通路 补肺通痹汤 补肺汤加减 糖尿病大鼠 肺纤维化
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益肺抗纤方水煎剂通过调节TGF-β1/Smad3通路改善特发性肺纤维化的作用机制研究 被引量：3
8
作者 李卫斌 李莉 +2 位作者 胡鸿雨 林刚 徐泽彪 《西藏医药》 2025年第1期31-33,共3页
目的研究益肺抗纤方水煎剂对博来霉素诱导的小鼠特发性肺纤维化(Idiopathic Pulmonary Fibrosis,IPF)的影响,并初步探讨其作用机制。方法在动物实验中,将24只C57小鼠通过气管滴注博来霉素(Bleomycin,BLM)建立小鼠IPF模型。7天后把小鼠... 目的研究益肺抗纤方水煎剂对博来霉素诱导的小鼠特发性肺纤维化(Idiopathic Pulmonary Fibrosis,IPF)的影响,并初步探讨其作用机制。方法在动物实验中,将24只C57小鼠通过气管滴注博来霉素(Bleomycin,BLM)建立小鼠IPF模型。7天后把小鼠随机分为模型组(BLM)、益肺抗纤方水煎剂低剂量组(YFKXF-L,10ml/kg)、高剂量组(YFKXF-H,20ml/kg)和正常组,每组各6只。连续灌胃给药7天后,取出肺组织,用苏木素-伊红(Hematoxylin-Eosin staining,H&E)染色观察肺脏病理改变;羟脯氨酸法测量右肺中的羟脯氨酸含量,评价肺纤维化程度;Western blot检测肺纤维化相关蛋白α-SMA(alpha-smooth-muscle actin),COL1A1(Collagen Type I),Smad3(Smad homologue 3),pSmad3(Phosphorylation of Smad homologue 3)的表达。结果对博来霉素诱导小鼠肺组织结构破坏情况;益肺抗纤方水煎剂可以抑制肺成纤维化细胞活化蛋白α-SMA和COL1A1的蛋白表达,同时显著的改善小鼠的炎症反应和减缓肺纤维化进程。结论益肺抗纤方水煎剂可以抑制博来霉素诱导的炎症、减少肺成纤维化细胞活化和抑制细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)生成,同时显著的改善小鼠肺纤维化进程,机制上可能是通过抑制TGF-β/Smad3通路而发挥作用。 展开更多
关键词 益肺抗纤方水煎剂 特发性肺纤维化 细胞外基质 TGF-β/smad3 pathway
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淫羊藿苷对脓毒症心肌损伤大鼠心肌细胞凋亡和TGF-β1/Smad3信号通路的影响
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作者 张希 张蒙 +1 位作者 李江 徐成阳 《中国医科大学学报》 北大核心 2025年第8期697-701,708,共6页
目的探讨淫羊藿苷对脓毒症心肌损伤大鼠心肌细胞凋亡和转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad3信号通路的影响。方法SD大鼠腹腔注射脂多糖建立脓毒症心肌损伤模型,随机分为模型组、淫羊藿苷低剂量组、淫羊藿苷高剂量组、淫羊藿苷高剂量+SRI-011... 目的探讨淫羊藿苷对脓毒症心肌损伤大鼠心肌细胞凋亡和转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad3信号通路的影响。方法SD大鼠腹腔注射脂多糖建立脓毒症心肌损伤模型,随机分为模型组、淫羊藿苷低剂量组、淫羊藿苷高剂量组、淫羊藿苷高剂量+SRI-011381组,每组10只。另取10只大鼠腹腔注射等量生理盐水,设为对照组。分组干预后,应用超声诊断仪检测各组大鼠左心室舒张末内径(LVEDD)、左心室收缩末内径(LVESD)、左室射血分数(LVEF)、左心室收缩压(LVSP)。采用HE染色检测各组大鼠心肌组织形态,采用透射电镜观察各组大鼠心肌组织超微结构,采用酶联免疫吸附试验检测各组大鼠血清心肌损伤标志物[心肌肌钙蛋白T(cTnT)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)]和炎性细胞因子[白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)]水平,采用Western blotting检测各组大鼠心肌组织TGF-β1/Smad3通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠LVEDD和LVESD,心肌病理评分,心肌细胞凋亡率,cTnT、CK-MB、IL-6、TNF-α水平,TGF-β1蛋白表达水平,p-Smad3/Smad3升高(P<0.05),LVEF和LVSP降低(P<0.05)。与模型组比较,淫羊藿苷低剂量组、淫羊藿苷高剂量组大鼠上述病理指标均得到改善,且高剂量淫羊藿苷组作用更强。SRI-011381可减弱淫羊藿苷对脓毒症心肌损伤大鼠各病理指标的改善作用。结论淫羊藿苷可通过阻止TGF-β1/Smad3信号通路激活,抑制脓毒症大鼠炎症反应,进而减轻心肌细胞凋亡和心肌损伤。 展开更多
关键词 淫羊藿苷 脓毒症 心肌损伤 凋亡 TGF-β1/smad3信号通路
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血清PAR ATF5 Smad3与2型糖尿病肾病患者肾功能指标血脂水平及预后的相关性分析
10
作者 笪晨星 杨姝洁 许蒙蒙 《河北医学》 2025年第9期1508-1514,共7页
目的:探究血清血小板白蛋白比值(PAR)、激活转录因子5(ATF5)、Smad3与2型糖尿病肾病患者肾功能指标、血脂水平及预后的相关性。方法:选择2019年12月至2022年1月于本院就诊的152例2型糖尿病肾病患者(糖尿病肾病组)和100例T2DM患者(单纯... 目的:探究血清血小板白蛋白比值(PAR)、激活转录因子5(ATF5)、Smad3与2型糖尿病肾病患者肾功能指标、血脂水平及预后的相关性。方法:选择2019年12月至2022年1月于本院就诊的152例2型糖尿病肾病患者(糖尿病肾病组)和100例T2DM患者(单纯糖尿病组),糖尿病肾病组根据预后分为良好组(119例)与不良组(33例),Pearson分析糖尿病肾病组血清PAR、ATF5、Smad3与肾功能指标、血脂水平的相关性。Logistics分析2型糖尿病肾病患者预后影响因素。ROC分析血清PAR、ATF5、Smad3对2型糖尿病肾病患者预后的预测价值。结果:与单纯糖尿病组相比,糖尿病肾病组UACR、PAR、ATF5、Smad3水平明显升高、eGFR水平明显降低(P<0.05);不良组血清PAR、ATF5、Smad3水平明显高于良好组(P<0.05)。血清PAR、ATF5、Smad3水平分别与UACR呈正相关(r=0.423、0.439、0.431,P<0.05)、分别与eGFR呈负相关(r=-0.408、-0.389、-0.396,P<0.05)。血清PAR、ATF5、Smad3水平升高是2型糖尿病肾病患者预后不良的危险因素(P<0.05)。血清PAR、ATF5、Smad3三者联合预测2型糖尿病肾病患者预后的AUC为0.919,敏感度84.85%,特异度89.92%,三者联合对2型糖尿病肾病患者预后的预测价值高于单独预测(Z三者联合-PAR=2.562、P=0.010,Z三者联合-ATF5=2.842、P=0.005,Z三者联合-Smad3=2.781、P=0.005)。结论:2型糖尿病肾病患者血清PAR、ATF5、Smad3水平升高,并且三者分别与肾功能有一定相关性,三者联合检测对2型糖尿病肾病患者预后具有潜在预测价值。 展开更多
关键词 2型糖尿病肾病 血小板白蛋白比值 激活转录因子5 smad3
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隐丹参酮通过TGF-β1/Smad3信号改善小鼠急性心肌梗死后心室重构 被引量：6
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作者 余汇 郭海彪 +4 位作者 林娟 张峰 寿佳 余细勇 王德勤 《药物评价研究》 北大核心 2025年第1期85-92,共8页
目的研究隐丹参酮对急性心肌梗死后心室重构的保护作用,并研究其可能的机制。方法采用左前降支冠状动脉结扎术构建急性心肌梗死模型,将60只雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、氯沙坦钾(阳性药,15 mg·kg^(-1))和隐丹参酮低... 目的研究隐丹参酮对急性心肌梗死后心室重构的保护作用,并研究其可能的机制。方法采用左前降支冠状动脉结扎术构建急性心肌梗死模型,将60只雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、氯沙坦钾(阳性药,15 mg·kg^(-1))和隐丹参酮低、高剂量(21、63 mg·kg^(-1))组,每组12只,术后1 h给药,连续给药7 d;小动物超声检测心脏功能,TTC染色检测心肌梗死面积,苏木素-伊红(HE)染色检测心脏形态学变化,免疫组化检测纤维化相关蛋白肌动蛋白α(α-SMA)、I型胶原蛋白(Col I)的表达,生化仪检测血清中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和心肌肌钙蛋白T(cTnT)的水平,Western blotting检测转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad3信号通路相关蛋白的表达。结果与假手术组相比,模型组小鼠心脏功能显著降低(P<0.01),心肌梗死面积显著增加(P<0.01),心肌细胞排列混乱,大量炎症细胞浸润,血清中LDH、CK、CK-MB、ALT、AST和cTnT的水平均显著增加(P<0.01);纤维化标志蛋白α-SMA、ColⅠ的表达增加(P<0.01),TGF-β1、p-Smad3的表达增加(P<0.01);与模型组比较,高剂量隐丹参酮和氯沙坦钾均可显著改善急性心肌梗死小鼠的心脏功能(P<0.05),降低心肌梗死面积(P<0.01),减少心肌细胞中炎症细胞浸润,降低血清LDH、CK、CK-MB、ALT、AST和cTnT水平(P<0.01),降低α-SMA、ColⅠ、TGF-β1、p-Smad3蛋白表达(P<0.01)。结论隐丹参酮可能通过抑制急性心肌梗死小鼠心肌细胞中TGF-β/Smad3信号通路,减少心肌纤维化和心肌梗死面积,改善心脏功能,减少心室重构。 展开更多
关键词 隐丹参酮 急性心肌梗死 心室重构 心肌纤维化 TGF-β1/smad3信号通路
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TGF-β_(1)/SMAD3信号通路在背部循经推拿促进慢性疲劳综合征大鼠NK细胞活性中的作用研究
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作者 黄平 黄璟 +5 位作者 王伟 金梦雨 李字卿 黄辉 邓陈英 江晓鸣 《中医康复》 2025年第6期8-14,20,共8页
目的:观察背部循经推拿对慢性疲劳综合征(CFS)大鼠行为学、自然杀伤(NK)细胞活性及TGF-β_(1)/SMAD3信号通路的影响。方法:24只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、背部循经推拿组、人参皂苷组各6只,采用慢性疲劳双重应激法(慢性束缚+... 目的:观察背部循经推拿对慢性疲劳综合征(CFS)大鼠行为学、自然杀伤(NK)细胞活性及TGF-β_(1)/SMAD3信号通路的影响。方法:24只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、背部循经推拿组、人参皂苷组各6只,采用慢性疲劳双重应激法(慢性束缚+冷水力竭游泳)建立CFS大鼠模型。背部循经推拿组依次予平推“督脉及膀胱经”4 min、食中指按揉“背俞穴”4 min、食中指点按“背俞穴”4 min,70~90次/min,12 min/次,连续干预4周。使用“实验大鼠一般情况半定量评分观察表”评估大鼠一般状态,旷场实验评价大鼠焦虑抑郁状态,力竭游泳时间评估大鼠疲劳情况,LDH释放法检测脾脏组织NK细胞活性,ELISA法检测血清转化生长因子(TGF-β_(1))、干扰素(IFN-γ)水平,实时荧光定量PCR法检测脾脏组织转化生长因子受体1(TβR1)、SMAD3的mRNA相对表达量。结果:与空白组相比,模型组大鼠一般情况半定量评分升高(P<0.05),旷场活动时间、力竭游泳时间均显著减少(P<0.05);脾脏组织NK细胞活性显著降低(P<0.05),TβR1和SMAD3的mRNA表达量显著升高(P<0.05);血清TGF-β_(1)水平显著升高(P<0.05)、IFN-γ水平显著降低(P<0.05)。与模型组相比,背部循经推拿组一般情况半定量评分显著降低(P<0.05),旷场活动时间、力竭游泳时间显著增加(P<0.05);NK细胞活性显著升高(P<0.05),TβR1、SMAD3 mRNA相对表达量显著降低(P<0.05);血清TGF-β_(1)含量显著降低(P<0.05),IFN-γ含量显著升高(P<0.05)。结论:背部循经推拿可有效增加CFS大鼠旷场活动和力竭游泳时间,改善疲劳、焦虑抑郁等症状,可能与调节NK细胞TGF-β_(1)/SMAD3通路信号传导,从而促进IFN-γ分泌增强NK细胞活性有关。 展开更多
关键词 背部循经推拿 慢性疲劳综合征 NK细胞活性 TGF-β_(1)/smad3 IFN-γ
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解毒活血汤对慢性肾脏病大鼠肾脏Smad2、Smad3表达的影响 被引量：3
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作者 杨灡 孙妲男 +6 位作者 李勇 徐丽 周鹏 代璇 侯兴 褚宇鹏 李敬槟 《陕西中医》 CAS 2025年第1期19-24,共6页
目的:观察解毒活血汤通过调控慢性肾脏病(CKD)大鼠Smads蛋白在肾脏组织中的表达对CKD的作用。方法:将72只雄性SD大鼠随机分成六组,空白组、模型组、阳性对照组,中药低剂量组、中药中剂量组以及中药高剂量组,每组各12只。除空白组外,其... 目的:观察解毒活血汤通过调控慢性肾脏病(CKD)大鼠Smads蛋白在肾脏组织中的表达对CKD的作用。方法:将72只雄性SD大鼠随机分成六组,空白组、模型组、阳性对照组,中药低剂量组、中药中剂量组以及中药高剂量组,每组各12只。除空白组外,其余组的大鼠均通过腺嘌呤悬浮液灌胃并饲喂高磷饮食以建立CKD大鼠模型,造模8周后开始对大鼠进行为期12周的药物灌胃处理,在第12周末,对大鼠血液样本进行肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、磷(P)和血钙(Ca)的生化检测,并用免疫组化法分析肾组织中Smad2、Smad3蛋白的表达。结果:与空白组相比,其余组大鼠血清中的Scr、BUN、P和Ca含量均有显著性差异(P<0.01或P<0.05);与模型组相比,其余组大鼠血清中的Scr、BUN和P的含量普遍降低(P<0.05或P<0.05),而Ca含量则有所上升(P<0.05);与空白组相比,其余组大鼠肾组织中Smad2和Smad3的表达显著增加(P<0.05)。与模型组相比,其余组肾组织中Smad2和Smad3的表达均有所降低(P<0.05)。相较于解毒活血汤低剂量组,高剂量组、中剂量组及阳性对照组的Smad2蛋白和Smad3蛋白表达量均进一步下降(P<0.05)。结论:解毒活血汤显示出对延缓CKD进程的积极作用,并能有效升高肾组织中Smad2、降低Smad3的表达。相较于其余用药组,解毒活血汤高剂量组展现出更显著的疗效,药物剂量与疗效之间存在正相关关系。 展开更多
关键词 慢性肾脏病 解毒活血汤 大鼠 去宛陈莝 免疫组化法 SMAD2 smad3
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葫芦巴碱通过TGF-β1/SMAD3通路抑制大鼠肾纤维化 被引量：1
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作者 丁彦才 刘丽 +7 位作者 张红梅 杨涛 黄琦 马晓云 席海峰 王乔峰 白旺 李飞宇 《中国药学杂志》 北大核心 2025年第22期2385-2391,共7页
目的探讨葫芦巴碱对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的肾纤维化的保护作用及其分子机制。方法通过在大鼠肾小管上皮细胞系NRK-52E中使用TGF-β1诱导上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT... 目的探讨葫芦巴碱对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的肾纤维化的保护作用及其分子机制。方法通过在大鼠肾小管上皮细胞系NRK-52E中使用TGF-β1诱导上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)建立体外模型,并在单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠模型中模拟肾纤维化。采用蛋白免疫印迹(Western blot)检测纤维化标志物的表达,采用苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin,HE)和马松(Masson)染色检测肾组织结构的变化。结果在UUO大鼠模型中,葫芦巴碱显著降低尿蛋白和尿素氮水平,并改善肾组织结构。葫芦巴碱显著抑制了TGF-β1诱导的EMT,降低α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达、增加E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达。葫芦巴碱处理还显著降低UUO大鼠模型α-SMA的表达、增加E-cadherin的表达,抑制SMAD家族成员3(SMAD family member 3,SMAD3)通路蛋白的表达。结论葫芦巴碱通过抑制TGF-β1/SMAD3通路发挥抗肾纤维化作用,改善肾组织结构和功能,具有潜在的抗肾纤维化应用前景。 展开更多
关键词 肾纤维化 葫芦巴碱 转化生长因子-Β1 上皮-间质转化 TGF-β1/smad3信号通路
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自体黄韧带干预TGF-β1/Smad3信号通路抑制兔硬膜外纤维瘢痕形成的实验研究
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作者 王鹏 张德宝 +5 位作者 张杨 张海斌 时嘉 张少杰 李树文 吴一民 《中国临床解剖学杂志》 北大核心 2025年第1期69-75,共7页
目的通过对不同组别的兔分别行椎板切除术,对比其各组术后3、6周TGF-β1、Smad3蛋白表达量以及两者相应的mRNA表达水平,从而探讨自体黄韧带抑制腰椎术后硬膜外纤维瘢痕形成与TGF-β1/Smad3信号通路的关系。方法将于内蒙古医科大学实验... 目的通过对不同组别的兔分别行椎板切除术,对比其各组术后3、6周TGF-β1、Smad3蛋白表达量以及两者相应的mRNA表达水平,从而探讨自体黄韧带抑制腰椎术后硬膜外纤维瘢痕形成与TGF-β1/Smad3信号通路的关系。方法将于内蒙古医科大学实验动物中心购买的48只6~8月龄的日本大白兔,分为保留黄韧带组,自体脂肪回置组,不保留黄韧带组,对不同组别进行手术造模。术后对每组间的实验动物分别饲养3、6周后进行处死(3、6周各处死8只)。采用Western blot蛋白定量分析、RTPCR技术测定各组样本中的TGF-β1、Smad3蛋白含量及mRNA表达水平,并将以上数据分别进行组间比较,分析其差异性。结果①Western blot检测结果:3、6周保留组TGF-β1、Smad3蛋白表达量小于不保留组和脂肪组(P<0.05),不保留组和脂肪组之间并未发现明显差异。②RT-PCR结果显示:对于TGF-β1、Smad3两者的mRNA表达量而言,3、6周保留组明显小于不保留组和脂肪组(P<0.05),不保留组和脂肪组之间并未见明显差异。结论腰椎手术术后,会形成不同程度的硬膜外纤维瘢痕。若在术中保留自体黄韧带,可减少硬膜外成纤维细胞的形成,其机制与TGF-β1/Smad3信号通路有关。 展开更多
关键词 黄韧带 纤维瘢痕 TGF-β1/smad3信号通路 Western blot RT-PCR技术
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益元灸调控TGF-β1/SMAD3信号通路对骶髓损伤后神经源性膀胱纤维化大鼠的影响
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作者 黄靖 尚文雅 +3 位作者 郭佳 杨溢珂 李冰 任亚锋 《时珍国医国药》 北大核心 2025年第11期2187-2194,共8页
目的基于TGF-β1/SMAD3通路探讨益元灸对骶髓损伤(SCI)后神经源性膀胱(NB)纤维化大鼠的治疗效果及可能机制。方法80只大鼠随机分假手术组12只,剩余68只造模成功后分为模型组、益元灸组、激动剂组和益元灸+激动剂组,益元灸组行益元灸治疗... 目的基于TGF-β1/SMAD3通路探讨益元灸对骶髓损伤(SCI)后神经源性膀胱(NB)纤维化大鼠的治疗效果及可能机制。方法80只大鼠随机分假手术组12只,剩余68只造模成功后分为模型组、益元灸组、激动剂组和益元灸+激动剂组,益元灸组行益元灸治疗,激动剂组注射TGF-β1激动剂,益元灸+激动剂组两者皆施,假手术组和模型组不额外处理。14d后尿动力学检测膀胱功能,HE和Masson染色观察膀胱病理改变和纤维化程度,电镜观察膀胱线粒体形态结构变化,Western blot法、RT-qPCR检测相关蛋白及mRNA表达。结果与模型组比较,益元灸组大鼠膀胱上皮细胞排列有序,空泡细胞数量减少,固有膜及肌层结构完整,胶原纤维增生减少,线粒体分布增多且结构较完整;最大膀胱容量和顺应性、TGF-β1和α-SMA蛋白及mRNA表达均降低(P<0.05),漏尿点压力和C-kit蛋白及mRNA水平增加(P<0.05)。与益元灸+激动剂组相比,益元灸组细胞结构清晰完整,胶原纤维增生减少,线粒体外膜及嵴结构相对完整;最大膀胱容量和顺应性、TGF-β1、α-SMA蛋白及mRNA表达均降低(P<0.05),漏尿点压力和C-kit蛋白及mRNA水平升高(P<0.05)。结论益元灸可改善SCI后NB纤维化大鼠排尿功能,其与下调TGF-β1/SMAD3活性来抑制膀胱纤维化,以恢复膀胱Cajal间质细胞数量进而增强逼尿肌收缩有关。 展开更多
关键词 纤维化 神经源性膀胱 骶髓损伤 转化生长因子-β1 smad3 Α-平滑肌肌动蛋白 CAJAL间质细胞
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基于HIF-1α/TGF-β1/Smad3通路探讨顾步汤治疗糖尿病足溃疡的作用机制
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作者 王继雪 杨稀瑞 +4 位作者 周涛 燕树勋 王思琦 夏联恒 袁星星 《海南医科大学学报》 北大核心 2025年第23期1770-1777,共8页
目的:探讨顾步汤通过调控HIF-1α/TGF-β1/Smad3通路改善糖尿病足溃疡(diabetic foot ulcer,DFU)愈合的作用机制。方法:构建C57BL/6J小鼠DFU模型,随机分为模型组和顾步汤低、中、高剂量组,每组10只,另取10只小鼠设为空白组,连续给药14 ... 目的:探讨顾步汤通过调控HIF-1α/TGF-β1/Smad3通路改善糖尿病足溃疡(diabetic foot ulcer,DFU)愈合的作用机制。方法:构建C57BL/6J小鼠DFU模型,随机分为模型组和顾步汤低、中、高剂量组,每组10只,另取10只小鼠设为空白组,连续给药14 d。给药结束后,采用H&E染色和Masson染色观察溃疡组织病理形态和胶原沉积,EdU标记免疫荧光检测溃疡组织成纤维细胞增殖,TUNEL检测溃疡组织成纤维细胞凋亡,ELISA检测溃疡组织中炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-10)及氧化应激(MDA、SOD、GSH-PX)水平,Western blot检测HIF-1α/TGF-β1/Smad3通路相关蛋白表达。结果:与模型组相比,顾步汤可明显降低溃疡组织中炎性细胞浸润,增加溃疡组织中胶原纤维、肉芽组织及新生毛细血管的数量,减少成纤维细胞增殖率,降低ROS阳性细胞率,成纤维细胞凋亡数量,IL-6、TNF-α水平,MDA含量,HIF-1α、TGF-β1、TβR1及p-Smad3蛋白表达,升高IL-10水平,SOD、GSH-PX含量(P<0.01)。结论:顾步汤可降低DFU炎症及氧化应激水平,激活HIF-1α/TGF-β1/Smad3通路,促进成纤维细胞生成,改善溃疡组织愈合。 展开更多
关键词 顾步汤 糖尿病足溃疡 HIF-1α/TGF-β1/smad3信号通路 创面愈合
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基于TGF-β1/Smad3通路探究苦参碱对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠的改善作用及机制 被引量：3
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作者 雷灵倩 戴周丽 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第6期1401-1406,共6页
目的:基于转化生长因子-β1(TGF-β1)/信号传导蛋白Smad3通路探究苦参碱(Mat)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠炎症和肺纤维化的改善作用及机制。方法:采用烟熏联合脂多糖(LPS)法建立COPD模型大鼠,将大鼠分为COPD组、Mat组(100 mg/kg)... 目的:基于转化生长因子-β1(TGF-β1)/信号传导蛋白Smad3通路探究苦参碱(Mat)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠炎症和肺纤维化的改善作用及机制。方法:采用烟熏联合脂多糖(LPS)法建立COPD模型大鼠,将大鼠分为COPD组、Mat组(100 mg/kg)、Mat+TGF-β1组(100 mg/kg Mat+1.25μg/kg TGF-β1),每组15只,另设置造模前随机选取的15只大鼠作为对照组(control)。肺功能分析仪检测大鼠肺功能;HE染色观察大鼠肺组织病理学变化;ELISA检测肺泡灌洗液(BALF)上清中TNF-α、IL-1β、TGF-β1的含量;TUNEL染色观察肺组织细胞凋亡;免疫组化检测肺组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cas-pase-3)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达;Western blot检测TGF-β/Smad通路相关蛋白表达。结果:与control组比较,COPD组大鼠肺组织出现明显的炎症细胞浸润和细胞脱落,FVC、FEV0.1/FVC、FEV0.3/FVC明显下降(P<0.05),TNF-α、IL-1β、TGF-β1水平、细胞凋亡数目、caspase-3、MMP-9、TGF-β1、p-Smad3、纤维连接蛋白(Fibronectin)、胶原蛋白(CollagenⅠ)和肌动蛋白(α-SMA)表达明显上升(P<0.05);与COPD组比较,Mat组大鼠肺组织病理损伤明显好转,FVC、FEV0.1/FVC、FEV0.3/FVC明显上升(P<0.05),TNF-α、IL-1β、TGF-β1水平、细胞凋亡数目、caspase-3、MMP-9、TGF-β1、p-Smad3、Fibronectin、CollagenⅠ和α-SMA表达明显下降(P<0.05);与Mat组比较,Mat+TGF-β1组明显逆转了Mat对COPD大鼠的改善作用。结论:Mat可改善COPD大鼠肺部炎症和纤维化,可能与抑制TGF-β1/Smad3通路激活有关。 展开更多
关键词 苦参碱 慢性阻塞性肺疾病 转化生长因子-β1/信号传导蛋白smad3通路 肺纤维化
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利用CRISPR/Cas9技术构建Smad3基因敲除MPC5细胞系 被引量：2
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作者 杨秀 史姜珊 +4 位作者 王洪连 王丽 粟宏伟 陈晨 赵长英 《生物工程学报》 北大核心 2025年第4期1658-1670,共13页
本研究旨在利用CRISPR/Cas9构建Smad3基因敲除的MPC5小鼠足细胞系细胞模型,并探讨TGF-β1刺激对Smad3基因敲除后MPC5细胞去分化的影响,为Smad3在小鼠足细胞中的功能研究提供工具细胞。根据CRISPR/Cas9设计原理设计针对靶向小鼠Smad3基... 本研究旨在利用CRISPR/Cas9构建Smad3基因敲除的MPC5小鼠足细胞系细胞模型,并探讨TGF-β1刺激对Smad3基因敲除后MPC5细胞去分化的影响,为Smad3在小鼠足细胞中的功能研究提供工具细胞。根据CRISPR/Cas9设计原理设计针对靶向小鼠Smad3基因单向导sgRNA序列,将连接后的pX458-Smad3载体转化至感受态细胞中,提取质粒并转染MPC5细胞。将转染后的细胞采用流式细胞分选仪分选出转染成功的细胞,经单克隆细胞扩增后采用PCR扩增Smad3基因敲除靶点附近序列并测序,分析筛选出潜在敲除细胞并在蛋白水平上验证Smad3蛋白缺失情况来确定敲除效果。在RNA水平和蛋白水平上采用逆转录-聚合酶链反应(reversetranscription-polymerase chainreacting,RT-PCR)和Westernblotting、细胞免疫荧光检测分析Smad3敲除对TGF-β1诱导的MPC5的去分化的影响。根据CRISPR/Cas9设计原理,sgRNA最终设计在Smad3第5个外显子。成功构建pX458-Smad3质粒,并将质粒转染MPC5细胞24h后,根据EGFP荧光蛋白的表达情况确定质粒转染是否成功,将转染成功的细胞经流式细胞分析转染效率,成功率约为0.1%。采用流式细胞分选仪筛选出带有绿色荧光标签转染成功的细胞,经单克隆扩增培养,最终可以得到21个细胞克隆。对Smad3基因位点上sgRNA靶点附近序列PCR扩增测序分析,发现了2个双等位基因移码突变细胞克隆,在蛋白水平上验证其Smad3蛋白表达缺失,表明成功获得2株Smad3基因敲除MPC5细胞株。在正常MPC5细胞中,TGF-β1刺激促进纤维化基因fibronectin和Col1a1(collagen I)mRNA和蛋白的表达,同时抑制足细胞分子标记蛋白synaptopodin和podocin的表达,提示足细胞的上皮-间质转分化。然而,在2株Smad3敲除MPC5细胞中,TGF-β1诱导上皮-间质转分化基因表达特征被显著抑制。本研究成功构建了2株Smad3基因敲除MPC5小鼠足细胞系,为进一步研究Smad3蛋白的功能建立了细胞模型,为研究Smad3在MPC5细胞去分化中的作用提供了思路。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 smad3 基因敲除 MPC5细胞
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基于TGF-β1/Smad3信号通路探讨新会陈皮多糖对小鼠皮肤成纤维细胞的抑制作用 被引量：2
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作者 梁景南 卢巍 +1 位作者 廖颖怡 冼文娇 《西安交通大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第2期333-338,共6页
目的探究新会陈皮多糖对小鼠皮肤成纤维细胞的抑制作用及机制。方法提取和纯化新会陈皮的陈皮多糖成分,原代分离并培养C57BL/6小鼠皮肤成纤维细胞;设置空白对照组(正常培养)及低、中、高剂量实验组(50、100、200μg/mL陈皮多糖),处理24 ... 目的探究新会陈皮多糖对小鼠皮肤成纤维细胞的抑制作用及机制。方法提取和纯化新会陈皮的陈皮多糖成分,原代分离并培养C57BL/6小鼠皮肤成纤维细胞;设置空白对照组(正常培养)及低、中、高剂量实验组(50、100、200μg/mL陈皮多糖),处理24 h后,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法观察陈皮多糖对细胞存活率影响。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blotting法分别检测陈皮多糖对小鼠皮肤成纤维细胞的瘢痕疙瘩形成相关基因Col1a1、Col3a1、TGF-β1和ACTA2的mRNA和蛋白表达水平。Western blotting检测陈皮多糖对成纤维细胞中磷酸化p-Smad3的激活水平。结果空白对照组和中、高剂量实验组的细胞存活率分别为100%、(90.54±6.75)%和(78.90±4.24)%;Col1a1蛋白相对表达水平分别为1.13±0.15、0.57±0.16和0.48±0.05;Col3a1蛋白相对表达水平分别为0.81±0.13、0.49±0.11和0.50±0.03;TGF-β1蛋白相对表达水平分别为1.11±0.15、0.60±0.13和0.33±0.11;p-Smad3/Smad3蛋白相对表达水平分别为0.96±0.05、0.75±0.06和0.71±0.03。Col1a1 mRNA表达水平分别为1.01±0.17、0.58±0.11和0.52±0.12;Col3a1 mRNA表达水平分别为1.01±0.12、0.56±0.19和0.65±0.14;ACTA2 mRNA表达水平分别为1.01±0.13、0.24±0.04和0.22±0.07;TGF-β1 mRNA表达水平分别为1.00±0.09、0.50±0.10和0.49±0.15。高剂量陈皮多糖时间处理的p-Smad3/Smad3蛋白相对表达水平分别为0.86±0.06、0.66±0.06、0.55±0.13、0.43±0.09、0.35±0.06和0.27±0.12。中、高剂量的陈皮多糖实验组的上述指标与空白对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论陈皮多糖通过抑制TGF-β1/Smad3通路激活来抑制成纤维细胞增殖及瘢痕疙瘩形成相关基因表达。 展开更多
关键词 瘢痕疙瘩 陈皮多糖 成纤维细胞 增殖 TGF-β1/smad3信号通路
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