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猪大肠杆菌水肿毒素SLT-IIeA基因的克隆和序列分析 被引量：8
1
作者 刘国平 吴斌 +2 位作者 刘梦元 何启盖 陈焕春 《动物医学进展》 CSCD 2004年第1期122-125,共4页
研究以本地猪水肿病大肠杆分离物ED1株为材料 ,利用 PCR克隆了含猪水肿病大肠杆菌 (VTEC) slt-IIe A基因 987bp的片段 ,并测定了含该克隆片段的 Bam HI、Hind 酶切片段的核苷酸序列。结果表明 ,slt-IIe A基因的编码区全长 960 bp,编码 3... 研究以本地猪水肿病大肠杆分离物ED1株为材料 ,利用 PCR克隆了含猪水肿病大肠杆菌 (VTEC) slt-IIe A基因 987bp的片段 ,并测定了含该克隆片段的 Bam HI、Hind 酶切片段的核苷酸序列。结果表明 ,slt-IIe A基因的编码区全长 960 bp,编码 3 1 9个氨基酸的蛋白质 ,序列与国外报导的 S1 1 79株进行比较发现其核苷酸同源性为 98.9%。经推导的氨基酸序列的同源性为 99.7%。这为进一步研究 slt-IIe A的生物学特性。 展开更多
关键词 猪 大肠杆菌 水肿毒素 SLT—ⅡeA基因 基因克隆 序列分析
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SLT-IIeA基因在原核系统中的克隆与表达及其鉴定 被引量：1
2
作者 严振龙 陈雷 +4 位作者 姜连连 成大荣 徐建生 董国雄 李俊宝 《动物医学进展》 CSCD 2002年第5期73-75,88,共4页
PCR扩增并克隆在 p UC1 8质粒中的类志贺样毒素 II型变异体 ( SL T-IIe) A亚单位基因片段切出 ,按预定阅读框架插入到原核性表达载体 p GEX-6p-1的谷胱甘肽 S-转移酶( GST)基因的下游 ,获得重组质粒 pp GEX-A。重组质粒导入大肠杆菌 BL2... PCR扩增并克隆在 p UC1 8质粒中的类志贺样毒素 II型变异体 ( SL T-IIe) A亚单位基因片段切出 ,按预定阅读框架插入到原核性表达载体 p GEX-6p-1的谷胱甘肽 S-转移酶( GST)基因的下游 ,获得重组质粒 pp GEX-A。重组质粒导入大肠杆菌 BL2 1 ,用 IPTG进行诱导表达 ,通过对重组大肠杆菌的菌体裂解物的SDS-PAGE电泳分析及 Western-blot鉴定 ,表明重组菌能大量表达融合蛋白形式的 SL T-IIe A,即 SL T-IIe A蛋白与谷胱甘肽转移酶相连组成的蛋白质。本实验的研究结果 ,为进一步研究 SL T-IIe的生物学特性及研制仔猪水肿病亚单位苗提供了有效的生物材料。 展开更多
关键词 SLT-ⅡeA基因 原核系统 克隆 表达 鉴定 类志贺样毒素Ⅱ型变异体 仔猪 水肿瘤
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猪水肿病大肠杆菌志贺样毒素Ⅱ型突变体新基因的分子特征 被引量：8
3
作者 冉雪琴 王红珍 +2 位作者 艾虎 吴拥军 王嘉福 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期167-171,共5页
从仔猪水肿病样品中分离的一株大肠杆菌菌株NP96 2 1,抽提染色体DNA ,构建NP96 2 1的总DNA文库 ,经菌落原位杂交筛选、限制酶酶切和Southern印迹等分析 ,获得含有志贺样毒素基因的重组质粒 ,核苷酸序列分析表明 ,该基因的A亚基与SLT IIe... 从仔猪水肿病样品中分离的一株大肠杆菌菌株NP96 2 1,抽提染色体DNA ,构建NP96 2 1的总DNA文库 ,经菌落原位杂交筛选、限制酶酶切和Southern印迹等分析 ,获得含有志贺样毒素基因的重组质粒 ,核苷酸序列分析表明 ,该基因的A亚基与SLT IIes的同源性为 97 6 %～ 98 1% ,与SLT IIc、SLT IId及EHECO15 7:H7产生的SLT II的A亚基之间的同源性分别为 93 1%、93 0 %和 92 9% ;B亚基与SLT IIes的同源性为 99 6 2 %～ 10 0 % ,与SLT IIc、SLT IId及SLT II的同源性分别为 81 5 %、81 1%和 81 5 % ;与 2 9种已知序列的SLT II、SLT I及志贺毒素STX进行聚类分析 ,结果证实大肠杆菌NP96 2 1菌株中的志贺样毒素基因属于一种新的SLT IIe亚型。SLT IIe NP96 2 1的A亚基与其它SLT IIe之间存在 7～ 9个氨基酸的差异 ,B亚基的氨基酸序列完全相同 ,与A亚基毒力活性密切相关的氨基酸分别为Thr4、Glu16 7、Arg170和Arg176。 展开更多
关键词 猪水肿病 大肠杆菌 志贺样毒素Ⅱ型突变体 基因 菌株NP9621 同源性 slt-iie亚型
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猪水肿病的成因及发病机制 被引量：10
4
作者 王建华 王跃虎 吴达 《动物科学与动物医学》 2001年第6期38-41,共4页
猪水肿病 (ED)由肠毒血症大肠杆菌 (ETEEC)引起。在母源抗体 Ig A下降、饲料中蛋白质含量过高、缺硒和过食等诱因的刺激下 ,猪肠道内大肠杆菌迅速繁殖 ,依靠定植因子粘附到肠粘膜细胞上 ,并产生 SL T- IIe毒素。 SL T- IIe是一种热不稳... 猪水肿病 (ED)由肠毒血症大肠杆菌 (ETEEC)引起。在母源抗体 Ig A下降、饲料中蛋白质含量过高、缺硒和过食等诱因的刺激下 ,猪肠道内大肠杆菌迅速繁殖 ,依靠定植因子粘附到肠粘膜细胞上 ,并产生 SL T- IIe毒素。 SL T- IIe是一种热不稳定蛋白质 ,它能与血管内皮细胞和平滑肌细胞上的受体结合 ,阻碍细胞内蛋白质合成 ,造成血管损害而致水肿。 展开更多
关键词 猪水肿病 发病机制 大肠杆菌 slt-iie 病因
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猪水肿毒素单抗竞争ELISA试剂盒的研制及应用 被引量：1
5
作者 张建民 吴斌 +6 位作者 赵战勤 卢顺 何华 向敏 李利娅 张福涛 陈焕春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期1054-1058,共5页
本研究旨在建立猪水肿毒素抗体的快速检测方法。以纯化的猪水肿毒素A亚基基因片段的原核表达产物作为抗原免疫BALB/c小鼠制备单抗,并利用表达蛋白和猪水肿毒素A亚基单抗酶结合物建立了竞争ELISA方法检测猪水肿毒素抗体。经过研究确定抗... 本研究旨在建立猪水肿毒素抗体的快速检测方法。以纯化的猪水肿毒素A亚基基因片段的原核表达产物作为抗原免疫BALB/c小鼠制备单抗,并利用表达蛋白和猪水肿毒素A亚基单抗酶结合物建立了竞争ELISA方法检测猪水肿毒素抗体。经过研究确定抗原包被浓度为0.32μg.mL-1,待检血清最佳稀释度为1∶2,酶标单抗工作浓度为1∶3200,血清抑制率大于40%为阳性。应用单抗竞争ELISA和细胞毒性中和试验同时对60份血清进行猪水肿毒素抗体检测,竞争ELISA的检出率为33.8%,细胞毒性中和试验检出率为30.9%,两者符合率达88.2%。试验结果表明,该ELISA方法特异性强,敏感性高,稳定性和重复性好,操作简便。本方法的建立在实验室诊断的标准化、猪水肿病疫苗免疫效果的评价及流行病学调查方面具有较高的应用价值。 展开更多
关键词 猪水肿毒素 单克隆抗体 单抗竞争ELISA 抗体检测
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猪水肿病新型亚单位菌苗对小鼠的效力研究 被引量：1
6
作者 胡利群 刘俞君 +2 位作者 郭利伟 杨小林 刘国平 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2016年第1期57-61,共5页
利用大肠杆菌表达猪水肿病大肠杆菌的水肿毒素SLT-IIe B,提取表达产物包涵体,再加入自行分离的我国流行的猪水肿病大肠杆菌Ee株(O139),和油乳佐剂乳化后制成亚单位菌苗,免疫昆明鼠,间隔2 w加强免疫1次。每次免疫后采血检测毒素的ELISA... 利用大肠杆菌表达猪水肿病大肠杆菌的水肿毒素SLT-IIe B,提取表达产物包涵体,再加入自行分离的我国流行的猪水肿病大肠杆菌Ee株(O139),和油乳佐剂乳化后制成亚单位菌苗,免疫昆明鼠,间隔2 w加强免疫1次。每次免疫后采血检测毒素的ELISA抗体和Ee株的凝集效价,第2次免疫2 w后用5LD50的猪水肿病大肠杆菌Ee株进行攻毒。结果显示,亚单位菌苗组与灭活菌苗组ELISA抗体水平有显著性差异,两种疫苗对Ee的保护力分别为90%和70%。本研究表明新型亚单位菌苗模式对同型菌株具有较好的保护力,为进一步研制高效的亚单位菌苗打下基础。 展开更多
关键词 分泌毒素表达蛋白 亚单位菌苗 小鼠 保护力
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类志贺毒素Ⅱ型变异体(SLT-Ⅱe)基因表达及间接ELISA方法的建立
7
作者 王警 张雪寒 +3 位作者 郭芸芸 张碧成 吴庆侠 何孔旺 《畜牧兽医科学（电子版）》 2019年第8期5-6,共2页
试验针对产类志贺毒素大肠杆菌SLT-IIe初步建立一种猪水肿病大肠杆菌的血清学检测方法。通过原核表达构建出重组菌pET28a-sumo-SLT-IIe/BL21在IPTG诱导下获得表达,表达产物以包涵体形式产生,使用十二烷基肌氨酸钠(SKL)变性的生化提纯步... 试验针对产类志贺毒素大肠杆菌SLT-IIe初步建立一种猪水肿病大肠杆菌的血清学检测方法。通过原核表达构建出重组菌pET28a-sumo-SLT-IIe/BL21在IPTG诱导下获得表达,表达产物以包涵体形式产生,使用十二烷基肌氨酸钠(SKL)变性的生化提纯步骤获取有生物学活性的重组蛋白。将提取的SLT-IIe蛋白作为抗原包被ELISA板,初步建立了特异性强的猪水肿病诊断方法,方阵滴定确定抗原最佳包被浓度为2μg/孔,最佳血清稀释浓度是l∶25,HRP-羊抗猪二抗的工作浓度1∶15000,5%脱脂奶封闭lh,显色15min。该方法的建立对猪水肿病流行病学调查以及预防和控制该病的发生有重要意义。 展开更多
关键词 猪水肿病 产类志贺毒素大肠杆菌 slt-iie ELISA
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