为解析分泌型免疫球蛋白A(sIgA)中特有成分SC蛋白的结构和功能,通过PCR扩增猪SC基因的跨膜区,克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,经测序验证后,诱导表达重组SC蛋白,用镍柱亲和层析纯化的重组SC蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术筛选出...为解析分泌型免疫球蛋白A(sIgA)中特有成分SC蛋白的结构和功能,通过PCR扩增猪SC基因的跨膜区,克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,经测序验证后,诱导表达重组SC蛋白,用镍柱亲和层析纯化的重组SC蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术筛选出能够稳定分泌抗SC蛋白的细胞株,采用免疫荧光试验和Western-blot验证单抗特异性。结果表明,成功获得分子质量约72 k Da的重组SC蛋白;筛选出2株效价高达1∶32000的单抗细胞株(3F7A9和6F10E11)。结论:成功表达了SC蛋白,并制备出了抗SC蛋白的单克隆抗体,为研究SC蛋白的结构特性、功能作用以及构建高效、快速的sIgA抗体检测方法奠定了实验基础。展开更多
文摘为解析分泌型免疫球蛋白A(sIgA)中特有成分SC蛋白的结构和功能,通过PCR扩增猪SC基因的跨膜区,克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,经测序验证后,诱导表达重组SC蛋白,用镍柱亲和层析纯化的重组SC蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术筛选出能够稳定分泌抗SC蛋白的细胞株,采用免疫荧光试验和Western-blot验证单抗特异性。结果表明,成功获得分子质量约72 k Da的重组SC蛋白;筛选出2株效价高达1∶32000的单抗细胞株(3F7A9和6F10E11)。结论:成功表达了SC蛋白,并制备出了抗SC蛋白的单克隆抗体,为研究SC蛋白的结构特性、功能作用以及构建高效、快速的sIgA抗体检测方法奠定了实验基础。