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slfn5基因在卵巢癌上皮-间质转化中的作用及机制
1
作者 徐巧萍 邓魁 +1 位作者 林青青 张珍 《浙江医学》 CAS 2022年第19期2056-2063,共8页
目的探讨slfn5基因在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化(EMT)的影响。方法收集杭州市第一人民医院确诊的卵巢癌患者手术切除标本,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测卵巢癌组织中slfn5 mRNA的相对表达量... 目的探讨slfn5基因在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化(EMT)的影响。方法收集杭州市第一人民医院确诊的卵巢癌患者手术切除标本,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测卵巢癌组织中slfn5 mRNA的相对表达量。采用Western blot法检测并比较卵巢癌细胞系A2780、SKOV3、OVCAR3、HO8910中SLFN5蛋白的相对表达量;选取表达高的SKOV3、OVCAR3细胞株转染沉默slfn5基因,分为si-NC组,si-slfn5^(#1)组、si-slfn5^(#2)组。Transwell和细胞划痕实验比较各组细胞侵袭、迁移能力。Western blot法考察各组细胞SLFN5及E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形纤维蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和Snail等EMT相关蛋白和Wnt/β-链环蛋白(β-catenin)信号通路关键蛋白β-catenin的相对表达量。结果相比正常组织,卵巢癌组织slfn5 mRNA相对表达量明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。相比人卵巢表面上皮细胞IOSE80,SKOV3、OVCAR3和HD8910细胞系slfn5 mRNA均显著高表达,差异均有统计学意义(均P<0.01);其中SKOV3、OVCAR3表达量最高。Transwell迁移实验结果显示,相比si-NC组,si-slfn5^(#1)组、si-slfn5^(#2)组穿过基底膜的细胞数量比均减少,差异均有统计学意义(均P<0.01)。Transell侵袭实验结果显示,相比si-NC组,si-slfn5^(#1)组、si-slfn5^(#2)组穿过基底膜的细胞数量比均减少,差异均有统计学差异(均P<0.01)。si-slfn5^(#1)组、si-slfn5^(#2)组EMT相关蛋白Vimentin、Snail、N-cadherin相对表达量下降,E-cadherin上升,相比si-NC组,差异均有统计学意义(均P<0.01);si-slfn5^(#1)组、si-slfn5^(#2)组β-catenin相对表达量降低,相比si-NC组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论slfn5基因在人卵巢癌细胞系中高表达,沉默slfn5基因降低了卵巢癌细胞系EMT相关蛋白的表达,并抑制细胞迁移和侵袭,其机制可能与调控β-catenin的表达有关。 展开更多
关键词 卵巢癌 slfn5 上皮-间质转化 迁移 侵袭
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川陈皮素通过上调SLFN5调控PTEN/Akt途径对肾细胞癌细胞的作用研究 被引量：4
2
作者 杜伟 孙伟 《中国中西医结合肾病杂志》 2022年第9期781-785,I0002,共6页
目的:探究川陈皮素对肾细胞癌的作用及其可能的作用机制。方法:将人肾透明细胞腺癌细胞786-O随机分为对照组、15μmol/L组、30μmol/L组、30μmol/L+sh-NC组和30μmol/L+sh-SLFN5组。按照分组,进行sh-NC、sh-SLFN5慢病毒转染以及川陈皮... 目的:探究川陈皮素对肾细胞癌的作用及其可能的作用机制。方法:将人肾透明细胞腺癌细胞786-O随机分为对照组、15μmol/L组、30μmol/L组、30μmol/L+sh-NC组和30μmol/L+sh-SLFN5组。按照分组,进行sh-NC、sh-SLFN5慢病毒转染以及川陈皮素给药处理,CCK-8试剂盒检测细胞活力;克隆形成实验检测细胞增殖;流式细胞数检测细胞凋亡;RT-PCR检测SLFN5 mRNA表达;Western blot检测Bax、Bcl-2、SLFN5、PTEN、p-Akt和Akt蛋白表达。结果:川陈皮素对786-O细胞的IC50=30.08μmol/L;与对照组相比,川陈皮素15μmol/L组和30μmol/L组24 h、48 h和72 h的细胞活力、细胞克隆数以及Bcl-2、p-Akt/Akt蛋白表达水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、SLFN5 mRNA表达水平以及SLFN5、Bax、PTEN蛋白表达水平显著升高(P<0.05);30μmol/L组和30μmol/L+sh-NC组细胞中各检测指标差异均无统计学意义(P>0.05);与30μmol/L+sh-NC组相比,30μmol/L+sh-SLFN5组24 h、48 h和72 h的细胞活力、细胞克隆数以及Bcl-2、p-Akt/Akt蛋白表达水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率、SLFN5 mRNA表达水平以及SLFN5、Bax、PTEN蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论:川陈皮素可能通过上调SLFN5调控PTEN/Akt途径抑制肾细胞癌细胞增殖,促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 川陈皮素 肾细胞癌 slfn5 PTEN Akt途径
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小鼠pMSV-Slfn5-GFP表达质粒构建及基因结构分析
3
作者 况春燕 杨藩 《重庆医学》 CAS 北大核心 2017年第22期3033-3035,共3页
目的构建小鼠pMSV-Slfn5-GFP基因重组表达质粒及基因结构分析。方法提取小鼠肝脏组织中总RNA,反转录为cDNA。PCR扩增小鼠Slfn5编码序列片段,并与pGEM-T Easy载体连接,连接产物转化到大肠埃希菌DH5α中。挑取阳性克隆提取质粒,经限制性... 目的构建小鼠pMSV-Slfn5-GFP基因重组表达质粒及基因结构分析。方法提取小鼠肝脏组织中总RNA,反转录为cDNA。PCR扩增小鼠Slfn5编码序列片段,并与pGEM-T Easy载体连接,连接产物转化到大肠埃希菌DH5α中。挑取阳性克隆提取质粒,经限制性内切酶HpaⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定。酶切鉴定正确的质粒送Macrogen USA测序。测序正确的质粒通过HindⅢ和XhoⅠ与pMSV-GFP连接,并命名为pMSV-Slfn5-GFP。通过UCSC(http://genome.ucsc.Edu/)分析小鼠Slfn5及其家族基因组结构,并通过NCBI确定Slfn5的蛋白结构域。结果 Slfn5全长基因序列克隆到表达载体pMSV-GFP中,酶切鉴定片段大小为2.65kb。Slfn5的AAA_4蛋白结构域由phylogeny.fr确定了该结构在Slfn蛋白家族中的保守性。结论成功构建了小鼠pMSV-Slfn5-GFP全长基因表达载体。 展开更多
关键词 pMSV-slfn5-GFP 构建 基因结构 分析
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