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谷胱甘肽转运蛋白SLC25A39在肝癌细胞凋亡中的作用
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作者 黄新怡 白瑞萍 +3 位作者 花福增 席浩博 于卫华 郑刚 《癌变·畸变·突变》 2026年第1期34-40,58,共8页
目的:探讨谷胱甘肽转运蛋白SLC25A39在调节肝癌细胞线粒体稳态和细胞凋亡中的作用。方法:通过HCCDB公共数据库,分析肝癌与癌旁组织中SLC25A39表达水平及其与肝癌患者生存期的关系。然后采用转染shSLC25A39慢病毒建立SLC25A39敲减HepG2... 目的:探讨谷胱甘肽转运蛋白SLC25A39在调节肝癌细胞线粒体稳态和细胞凋亡中的作用。方法:通过HCCDB公共数据库,分析肝癌与癌旁组织中SLC25A39表达水平及其与肝癌患者生存期的关系。然后采用转染shSLC25A39慢病毒建立SLC25A39敲减HepG2细胞模型,实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blot法验证敲减效率。通过检测SLC25A39敲减细胞在不同时段的增殖活力,探究SLC25A39表达对肝癌细胞的影响。选用50μmol/L叔丁基过氧化氢(TBHP)处理HepG2细胞12 h诱导细胞凋亡模型,分别采用CCK-8法检测细胞活力变化,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡。此外,采用MitoRT染色和提纯线粒体法检测线粒体中GSH含量;JC-1染色法检测线粒体膜电位;MitoSOX染色法检测线粒体活性氧(ROS)水平;生物荧光法检测细胞内ATP水平。结果:肝癌公共库数据分析表明,肝癌组织中SLC25A39表达较癌旁组织升高(P<0.05),且与患者不良预后密切相关。qPCR和Western blot法检测结果显示SLC25A39敲减细胞中SLC25A39 mRNA和蛋白表达均较对照组明显下降(P<0.05),表明SLC25A39敲减HepG2细胞模型构建成功。检测0~96 h细胞数量结果显示,与对照组相比,SLC25A39敲减细胞增殖速度明显减慢,且随培养时间延长两组存活细胞数量差异逐渐增大(P<0.05)。使用TBHP刺激引起细胞氧化损伤后发现,与空载对照组相比,SLC25A39敲减组细胞活力明显下降(P<0.05);且细胞线粒体中GSH水平和膜电位、细胞内ATP含量均下降,同时细胞凋亡率、线粒体ROS水平升高(均为P<0.05),提示SLC25A39敲减使线粒体氧化应激和功能损伤加重(P<0.05)。结论:抑制肝癌细胞中SLC25A39高表达介导的线粒体GSH摄取可促进肝癌细胞的凋亡,靶向抑制SLC25A39有望为肝癌治疗提供新思路。 展开更多
关键词 slc25a39 肝癌细胞 抗凋亡 谷胱甘肽 线粒体稳态
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斑马鱼slc25a39基因突变体构建及其表达特征分析
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作者 裴煜 张晨旭 +3 位作者 邓志霖 李汉香 胡杨 黄四洲 《成都医学院学报》 2025年第6期901-905,920,共6页
目的构建斑马鱼溶质载体家族25成员39(slc25a39)基因敲除突变体,并对其表达特征及进化保守性进行分析。方法利用CRISPR/Cas9系统构建斑马鱼slc25a39基因突变体;通过测序验证突变位点及类型;利用原位杂交、反转录定量聚合酶链式反应(RT-q... 目的构建斑马鱼溶质载体家族25成员39(slc25a39)基因敲除突变体,并对其表达特征及进化保守性进行分析。方法利用CRISPR/Cas9系统构建斑马鱼slc25a39基因突变体;通过测序验证突变位点及类型;利用原位杂交、反转录定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)和O-二茴香胺染色检测突变体中slc25a39的表达变化及血红蛋白积累情况;结合蛋白序列比对、系统发育树构建与数据库挖掘分析该基因的保守性及潜在功能。结果成功获得在靶点处插入“GC”碱基的突变体,产生移码突变并引入提前终止密码子,导致蛋白结构明显缩短。原位杂交与RT-qPCR结果显示,突变体中slc25a39 mRNA表达水平明显下调;O-二茴香胺染色结果显示,突变体胚胎血红蛋白信号明显减弱。多物种蛋白序列比对结果显示,SLC25A39在进化过程中具有一定保守性。结论本研究构建了稳定的斑马鱼slc25a39突变体模型,初步揭示了其表达特征与潜在功能,并发现其缺失可能影响血红蛋白积累。 展开更多
关键词 斑马鱼 溶质载体家族25成员39 基因敲除 造血
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基于TCGA数据分析线粒体溶质载体SLC25A39在肝癌中的表达及其临床意义 被引量:1
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作者 别蓓蓓 王亚 +1 位作者 葛维娟 孙晋 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1018-1022,1028,共6页
目的:利用癌症基因图谱(TCGA)数据探讨线粒体溶质载体SLC25A39在肝细胞癌(HCC)中的表达及其临床意义。方法:从TCGA数据库下载HCC样本和正常肝组织的RNA-seq数据及临床信息,利用相关R语言软件包分析SLC25A39在HCC中的表达情况及其与临床... 目的:利用癌症基因图谱(TCGA)数据探讨线粒体溶质载体SLC25A39在肝细胞癌(HCC)中的表达及其临床意义。方法:从TCGA数据库下载HCC样本和正常肝组织的RNA-seq数据及临床信息,利用相关R语言软件包分析SLC25A39在HCC中的表达情况及其与临床病理指标、预后及免疫细胞浸润的相关性,并评估其在HCC中的诊断价值。结果:与正常组织相比,SLC25A39在HCC组织中表达上调(P<0.001),其表达水平与肿瘤T分期、病理分期、肿瘤状态、肿瘤残留、组织学分级及AFP水平显著相关(P<0.05),Cox回归模型分析显示SLC25A39高表达,是影响HCC患者总生存期(OS)的独立危险因素(HR=1.752,P=0.017)。肿瘤免疫细胞浸润分析显示,SLC25A39与中性粒细胞、CD8+T细胞、中央记忆型T细胞(Tcm)、GammaDelta T细胞(Tgd)、Th2细胞和CD56bright NK细胞的浸润水平显著相关(|Spearman’s r|>0.2,P<0.05)。ROC曲线分析显示SLC25A39表达水平对HCC的早期诊断和预后均具有良好的评估价值(AUC均>0.50)。结论:SLC25A39高表达是HCC预后不良的独立危险因素且具有良好的诊断价值,具有成为HCC诊断和预后评估生物标志物以及免疫治疗靶点的潜在价值。 展开更多
关键词 肝细胞癌 癌症基因图谱 线粒体溶质载体slc25a39 生物标志物 临床意义
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溶质载体家族成员SLC25A39基因促进乳腺癌细胞线粒体分裂 被引量:1
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作者 符静 薛春源 +6 位作者 朱祥 霍楠 丛瑞 孙志佳 亢小峰 闫志风 徐小洁 《军事医学》 CAS 2022年第4期280-284,共5页
目的 构建带Flag标签的人溶质载体家族成员蛋白SLC25A39基因的真核表达载体,在获得FlagSLC25A39融合蛋白表达后,研究SLC25A39表达对人乳腺癌细胞线粒体稳态的影响。方法 以人乳腺文库为模板采用PCR技术扩增出人SLC25A39的编码区序列,双... 目的 构建带Flag标签的人溶质载体家族成员蛋白SLC25A39基因的真核表达载体,在获得FlagSLC25A39融合蛋白表达后,研究SLC25A39表达对人乳腺癌细胞线粒体稳态的影响。方法 以人乳腺文库为模板采用PCR技术扩增出人SLC25A39的编码区序列,双酶切后将其插入到带Flag标签的pcDNA3.0载体上,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,菌液PCR鉴定阳性的克隆再进行质粒提取,测序正确后将重组质粒与空载体分别转染人乳腺癌细胞ZR75-1。Western印迹鉴定SLC25A39目的基因的表达;Mitotracker对乳腺癌细胞的线粒体进行染色,共聚焦显微镜对线粒体进行观察;Western印迹检测线粒体融合蛋白1(Mfn1)、线粒体分裂蛋白1(Fis1)的表达变化。结果双酶切鉴定表明,Flag-SLC25A39真核表达载体构建成功;Western印迹验证SLC25A39基因表达成功;激光共聚焦显微镜下观察发现SLC25A39过表达的乳腺癌ZR75-1细胞分裂的线粒体较多;Western印迹证实SLC25A39基因过表达后线粒体分裂蛋白Fis1表达增高,线粒体融合蛋白Mfn1表达减弱。结论 成功构建带Flag标签的SLC25A39基因真核表达载体,该基因可促进人乳腺癌细胞的线粒体分裂,有望成为靶向线粒体治疗乳腺癌的潜在新靶点。 展开更多
关键词 线粒体溶质载体蛋白slc25a39 真核表达 人乳腺癌细胞ZR75-1 线粒体分裂
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