重组Sj26(rSj26)抗原免疫酶测定新方法诊断日本血吸虫病的研究 被引量：22

1

作者 谢可鸣 陈家旭 +5 位作者 刘述先 龚唯 胡永德 夏超明 宋光承 李允鹤 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 1995年第4期219-222,共4页

将日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)和重组Sj26(rSj26)抗原致敏的硝酸纤维素膜片(NCD)用于膜片免疫酶测定(D-IEA),分别检测同批日本血吸虫病人、卫氏并殖吸虫病人、华支睾吸虫病人和健康人血清104例的特异性抗体,同时用目测及光密度(OD)... 将日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)和重组Sj26(rSj26)抗原致敏的硝酸纤维素膜片(NCD)用于膜片免疫酶测定(D-IEA),分别检测同批日本血吸虫病人、卫氏并殖吸虫病人、华支睾吸虫病人和健康人血清104例的特异性抗体,同时用目测及光密度(OD)值测定两种方法判断反应结果。结果显示,分别采用上述两种抗原检测所获的阳性率或假阳性率间无显著性差异。此结果首次提示rSj26抗原的血清诊断效果与目前血吸虫病血清学方法常用抗原SEA相似。本文报告的免疫酶测定新方法,可同时采用两种方法判断结果,迄今尚未见到类似报道。试验结果均表明用D-IEA检测时显示高度的敏感性(92.1％—94.7％)和特异性(0.0％—2.9％),具有实用价值。 展开更多

关键词 日本血吸虫病 血清学诊断 膜片免疫酶测定法 重组sj26抗原 可溶性血吸虫卵抗原

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Sj26基因转染的树突状细胞对日本血吸虫感染的免疫保护机制研究 被引量：4

2

作者 沈定文 罗金萍 +2 位作者 李雍龙 刘文琪 龙小纯 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期17-21,共5页

目的探讨日本血吸虫Sj26基因转染的树突状细胞(DC)对日本血吸虫感染的保护性免疫作用机制。方法BALB/c小鼠48只随机均分4组,于小鼠耳廓分别注射细胞悬液(浓度1×106/ml)0.2 ml,A组注射Sj26基因转染的DC、B组注射质粒pcDNA3转染的DC... 目的探讨日本血吸虫Sj26基因转染的树突状细胞(DC)对日本血吸虫感染的保护性免疫作用机制。方法BALB/c小鼠48只随机均分4组,于小鼠耳廓分别注射细胞悬液(浓度1×106/ml)0.2 ml,A组注射Sj26基因转染的DC、B组注射质粒pcDNA3转染的DC、C组注射未处理的DC,D组注射RPMI-1640。共免疫3次,间隔2周。末次免疫后2周,每鼠经皮肤感染40±2条尾蚴。分别于免疫前、末次免疫后第2周以及攻击感染后第6周采血,ELISA法检测血清IgG抗体、γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)水平,免疫印迹法(Western blot)检测血清特异性抗Sj26 IgG抗体,双夹心ELISA法检测脾淋巴细胞经伴刀豆球蛋白A(ConA)和可溶性虫卵抗原(SEA)刺激后培养上清中IFN-γ和IL-4含量。噻唑蓝法(MTT)检测脾淋巴细胞增殖情况。结果A组血清IgG抗体水平(吸光度A491值),免疫后(A491=0.117)显著高于免疫前(A491=0.049)(t=2.73,P<0.05),也显著高于B组(A491=0.061)和C组(A491=0.058)(t值为2.48和2.56,P<0.05)。A组血清能特异识别血吸虫成虫抗原Mr 26 000蛋白。血清IL-4水平,各组免疫前、后均无明显变化。IFN-γ水平,A组血清免疫后为(101.4±4.9)pg/ml,明显高于免疫前的(15.0±1.9)pg/ml(t=5.80,P<0.01),亦高于免疫后的B组(40.1±3.1)pg/ml和C组(35.6±1.2)pg/ml(t值为3.98和4.13,P<0.01)。脾淋巴细胞经ConA刺激诱生的IFN-γ,A组(171.2 pg/ml)显著高于D组(91.0 pg/ml)(t=4.25,P<0.01)。经SEA刺激诱生的IFN-γ,A组(70.8 pg/ml)显著高于D组(49.7 pg/ml)(t=2.83,P<0.01)。经ConA刺激诱生的IL-4水平,A组(79.7 pg/ml)明显低于D组(125.2 pg/ml)(t=4.40,P<0.01)。经SEA刺激诱生的IL-4,A组(50.7 pg/ml)明显低于D组(70.5 pg/ml)(t=2.62,P<0.05)。A组脾淋巴细胞经ConA和SEA刺激后的刺激指数分别为4.1和2.82,均高于其他各组(与D组比较,t=3.20,P<0.01和t=2.15,P<0.05)。结论Sj26基因转染的树突状细胞免疫小鼠主要诱导Th1型免疫应答。 展开更多

关键词 日本血吸虫 树突状细胞 sj26基因 基因转染 保护性免疫

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Sj26基因转染树突状细胞抗血吸虫感染作用 被引量：7

3

作者 沈定文 罗金萍 李雍龙 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期1393-1394,共2页

目的探讨日本血吸虫Sj 26基因转染树突状细胞(DC)抗血吸虫感染保护性免疫作用。方法利用Sj26基因转染、空质粒pcDNA 3转染和未处理DC分别免疫BALB/c小鼠3次,攻击感染后计数成虫和虫卵。结果Sj26基因转染DC免疫小鼠诱导34.5%的减虫率和48... 目的探讨日本血吸虫Sj 26基因转染树突状细胞(DC)抗血吸虫感染保护性免疫作用。方法利用Sj26基因转染、空质粒pcDNA 3转染和未处理DC分别免疫BALB/c小鼠3次,攻击感染后计数成虫和虫卵。结果Sj26基因转染DC免疫小鼠诱导34.5%的减虫率和48.5%的减卵率,明显高于空质粒pcDNA 3转染DC组(16.8%和15.8%)和未处理DC组(14.6%和14.4%),空质粒pcDNA 3转染DC和未处理DC组之间差异无统计学意义。结论Sj 26基因转染DC可诱导抗血吸虫感染的保护性免疫作用。 展开更多

关键词 日本血吸虫 树突状细胞 sj26 基因转染 保护性免疫

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日本血吸虫Sj26基因转染对树突状细胞功能的影响 被引量：2

4

作者 沈定文 李雍龙 +2 位作者 刘文琪 龙小纯 刘娟 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2005年第1期21-23,共3页

目的探讨日本血吸虫Sj26基因转染对树突状细胞(DC)功能的影响。方法利用脂质体介导的基因转染技术将日本血吸虫Sj26基因转染DC,流式细胞术(FACS)检测Sj26基因转染的DC摄取抗原的能力,混合淋巴细胞反应检测Sj26基因转染的DC对同种异体T... 目的探讨日本血吸虫Sj26基因转染对树突状细胞(DC)功能的影响。方法利用脂质体介导的基因转染技术将日本血吸虫Sj26基因转染DC,流式细胞术(FACS)检测Sj26基因转染的DC摄取抗原的能力,混合淋巴细胞反应检测Sj26基因转染的DC对同种异体T淋巴细胞的刺激作用。结果Sj26基因转染后Sj26蛋白在DC中高表达,摄取抗原的能力降低,与pcDNA3转染的DC和未转染的DC相比,Sj26基因转染的DC能明显刺激混合淋巴细胞反应。结论Sj26基因转染DC后能促进DC的活化,增强DC的生物学活性。 展开更多

关键词 树突状细胞 基因转染 日本血吸虫 sj26

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Sj26和Sj23基因转染树突状细胞联合抗血吸虫感染的研究 被引量：2

5

作者 沈定文 罗金萍 +1 位作者 李雍龙 刘文琪 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期901-904,共4页

目的探讨Sj26和Sj23基因转染树突状细胞(DC)联合抗日本血吸虫感染保护性免疫机制。方法BALB/c小鼠耳廓分别注射Sj26和Sj23基因转染DC(A组)、Sj26基因转染DC(B组)、Sj23基因转染DC(C组)、pcDNA3转染DC(D组)、未处理DC(E组)和RPMI-1640(F... 目的探讨Sj26和Sj23基因转染树突状细胞(DC)联合抗日本血吸虫感染保护性免疫机制。方法BALB/c小鼠耳廓分别注射Sj26和Sj23基因转染DC(A组)、Sj26基因转染DC(B组)、Sj23基因转染DC(C组)、pcDNA3转染DC(D组)、未处理DC(E组)和RPMI-1640(F组),免疫3次,间隔2周,末次免疫后2周,每鼠经皮肤感染40条日本血吸虫尾蚴。ELISA法检测血清特异性IgG抗体、干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)水平,双夹心ELISA法检测脾淋巴细胞经ConA和可溶性虫卵抗原(SEA)刺激后培养上清中IFN-γ和IL-4水平,噻唑蓝(MTT)法检测脾淋巴细胞增殖情况。结果末次免疫后第2周,A组小鼠血清IgG抗体水平显著升高(P<0.001)。血清IL-4的水平,各组免疫前、后无明显变化。血清IFN-γ水平,A组小鼠免疫后明显升高(P<0.01)。经ConA和SEA刺激后,A组小鼠脾淋巴细胞诱生的IFN-γ水平显著增高,而IL-4水平显著降低(与F组比较,P<0.001)。A组小鼠脾淋巴细胞经ConA和SEA刺激后的刺激指数均高于其他各组(与F组比较,P<0.001)。结论体液免疫和细胞免疫共同参与了Sj26和Sj23基因转染DC诱导的保护性免疫作用,其中Th1型免疫应答在抗日本血吸虫感染的保护性免疫中起主要作用。 展开更多

关键词 日本血吸虫 树突状细胞 sj26 SJ23 基因转染 保护性免疫

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日本血吸虫重组抗原rSj26的磁分离酶联免疫分析的建立及其在低感染度血清抗体检测中的应用 被引量：3

6

作者 余琴 朱艳红 +1 位作者 关飞 杨海 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期303-307,共5页

目的建立基于重组日本血吸虫抗原Sj26(rSj26)的磁分离酶联免疫分析(rSj26-MEIA),并将其用于检测低感染度的日本血吸虫病患者的血清抗体。方法将重组质粒pET28a-Sj26转化至大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21,用0.6 mmol/L异丙基-β-D-硫... 目的建立基于重组日本血吸虫抗原Sj26(rSj26)的磁分离酶联免疫分析(rSj26-MEIA),并将其用于检测低感染度的日本血吸虫病患者的血清抗体。方法将重组质粒pET28a-Sj26转化至大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21,用0.6 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物经镍柱亲和层析法纯化后,二喹啉甲酸(BCA)法测定蛋白含量,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)检测分析rSj26。将纯化后的rSj26与磁珠偶联(100μg抗原/mg磁珠),优化反应条件,建立rSj26-MEIA方法。用rSj26-MEIA和ELISA分别检测58份低密度感染的日本血吸虫病患者血清、30份非血吸虫病流行区阴性血清和6份并殖吸虫病患者血清,并比较两者的检测结果。结果纯化后的重组蛋白含量测定结果显示,rSj26浓度为2.5 mg/ml。SDS-PAGE结果显示,rSj26相对分子质量约27 000,主要以可溶性的形式表达。Western blotting结果显示,rSj26可被感染日本血吸虫的兔血清和小鼠血清特异识别。rSj26-MEIA优化反应条件结果显示,采用rSj26-磁珠0.2 mg(含rSj26 10μg)、血清稀释度为1∶100时,阳性血清平均吸光度(A_550值)/阴性血清平均A_550值(P/N)最大,为3.97。rSj26-MEIA和rSj26-ELISA检测低密度感染日本血吸虫病患者血清的结果显示,两者的阳性检出率均为24.14%(14/58),两者P/N分别为3.61和2.56;相关分析结果表明,两者检测的抗体A_550值间存在正相关关系(r=0.658,P<0.01)。rSj26-MEIA和ELISA检测6例并殖吸虫病患者血清和30例非血吸虫病流行区阴性血清,均未出现阳性反应。结论rSj26-MEIA可作为检测低密度感染日本血吸虫血清抗体的一种新技术。 展开更多

关键词 日本血吸虫 重组抗原sj26 抗体 磁分离酶联免疫法 ELISA

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rSj26-Sj32-IgM-ELISA法用于急性日本血吸虫病的诊断价值 被引量：3

7

作者 王敏 李文桂 +1 位作者 蔡世飞 周必英 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2010年第8期594-597,共4页

目的探讨rSj26-Sj32-IgM-ELISA法用于急性日本血吸虫病的诊断价值。方法用纯化的rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫抗原(SjAWA)建立ELISA方法,检测急性日本血吸虫病患者血清中的特异性IgM抗体,并以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、棘... 目的探讨rSj26-Sj32-IgM-ELISA法用于急性日本血吸虫病的诊断价值。方法用纯化的rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫抗原(SjAWA)建立ELISA方法,检测急性日本血吸虫病患者血清中的特异性IgM抗体,并以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、棘球蚴病、乙型肝炎、肺结核病患者和健康人血清作对照,比较二者的敏感性、特异性和交叉反应性。结果 rSj26-Sj32-IgM-ELISA和SjAWA-IgM-ELISA检测急性日本血吸虫病患者血清特异性IgM抗体的敏感性分别为98.0%和96.0%,特异性均为97.7%;SjAWA-IgM-ELISA检测华支睾吸虫病和卫氏并殖吸虫病患者血清时存在不同程度的交叉反应,而rSj26-Sj32-IgM-ELISA则未见交叉反应。结论纯化的rSj26-Sj32融合蛋白对急性日本血吸虫病具有较高诊断价值,可用作急性日本血吸虫病的诊断抗原。 展开更多

关键词 血吸虫病 日本 rsj26-Sj32融合蛋白 ELISA法 免疫诊断

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日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj26GST)疫苗免疫BALB/c小鼠脾细胞动态观察 被引量：2

8

作者 张丽 李文桂 谭建蓉 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1028-1032,1038,共6页

目的观察日本血吸虫重组Bb（pGEX—Sj26GST）疫苗免疫BALB／c小鼠后脾细胞增殖、亚群和凋亡的动态变化。方法将疫苗分别经皮下注射（SC组）和鼻腔粘膜接种（IN组）免疫BALB／c鼠，在免疫后O～22周每2周每组随机剖杀4只小鼠，无菌取脾，... 目的观察日本血吸虫重组Bb（pGEX—Sj26GST）疫苗免疫BALB／c小鼠后脾细胞增殖、亚群和凋亡的动态变化。方法将疫苗分别经皮下注射（SC组）和鼻腔粘膜接种（IN组）免疫BALB／c鼠，在免疫后O～22周每2周每组随机剖杀4只小鼠，无菌取脾，制成单个悬浮脾细胞，用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测脾细胞增殖水平、用流式细胞仪（FACsort）检测T细胞亚群和脾细胞凋亡状况。结果未刺激及sjAWA刺激时SC组小鼠脾细胞增值水平于免疫后4～20周明显升高，ConA刺激时于4～18周显著升高，均于免疫后8周达最高水平；IN组脾细胞增殖水平原液组、SjAwA组和ConA组分别于2～18周、2～10周及14～18周、2～8周和12～18周显著升高，均于免疫后4周达最大值（P〈0．01或P〈0．05）。SC组和IN组CD＋T细胞分别于免疫后2～14周、2周及6～16周升高，并于8周达峰值（P〈0．01或P〈0．05）；两组CD＋T细胞均于2～20周轻微升高，分别于8周和6周达较高值（P〉0．05）。未刺激和ConA刺激时SC组脾细胞凋亡水平分别于免疫后2～4周、2～6周升高显著，均于免疫后2周达最大值（P〈O．01或P〈O．05）；IN组均于4周显著升高并达峰值（P〈O．01）。结论日本血吸虫重组Bb（pGEX-Sj26GST）疫苗可诱导脾细胞的增殖，增加cD＋T细胞的数目，抑制脾细胞的凋亡而发挥保护性免疫应答。 展开更多

关键词 日本血吸虫 重组Bb(pGEX—sj26GST)疫苗 脾细胞增殖 T细胞亚群 脾细胞凋亡

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日本血吸虫Sj26GST疫苗研究进展 被引量：3

9

作者 李文桂 陈雅棠 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1008-1013,共6页

关键词 sj26GST疫苗 日本血吸虫 人兽共患寄生虫病 农田水利建设 血吸虫病 钉螺面积 国家卫生部 人类健康

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日本血吸虫重组质粒pET32α-Sj26GST-Sj32的构建及其在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达 被引量：1

10

作者 李文桂 肖邦忠 +2 位作者 罗兴建 陈雅棠 吴成果 《热带医学杂志》 CAS 2010年第2期147-152,共6页

目的构建日本血吸虫重组质粒pET32α-Sj26GST-Sj32,分析该质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达情况。方法超声粉碎日本血吸虫成虫提取总RNA,通过RT-PCR扩增获得Sj26GST和Sj32抗原编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)剪接Sj26GST和S... 目的构建日本血吸虫重组质粒pET32α-Sj26GST-Sj32,分析该质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达情况。方法超声粉碎日本血吸虫成虫提取总RNA,通过RT-PCR扩增获得Sj26GST和Sj32抗原编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)剪接Sj26GST和Sj32,得到Sj26GST-Sj32融合基因,克隆至原核表达载体pET32α(+),构建重组质粒pET32α-Sj26GST-Sj32,转化入大肠埃希菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行分析和鉴定。结果基因拼接法扩增出约1991bp的Sj26GST-Sj32融合基因;双酶切和PCR鉴定证实Sj26GST-Sj32融合基因成功插入pET32α(+)中,SDS-PAGE分析显示表达产物为分子质量约82000Mr的重组蛋白,与预期结果一致,表达的蛋白约占菌体总蛋白的22%;Western-blot鉴定重组蛋白能被日本血吸虫感染的兔血清识别。结论成功构建了日本血吸虫重组质粒pET32α-Sj26GST-Sj32,该质粒在大肠埃希菌BL21中获得了高效融合表达,表达的融合蛋白具有特异的抗原性。 展开更多

关键词 日本血吸虫 重组质粒pET32α—sj26GST—Sj32 大肠埃希菌 表达

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日本血吸虫混合DNA疫苗pBK-CMV-Sj26/Sj32诱导小鼠的免疫应答 被引量：1

11

作者 李柳哲 石佑恩 +1 位作者 江侃 宁长修 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第1期36-38,共3页

目的　观察含日本血吸虫候选疫苗分子谷胱甘肽S -转移酶 (Sj2 6 )和天冬酰胺肽链酶 (Sj32 )的真核载体 pBK-CMV -Sj2 6 /Sj32诱导小鼠的免疫应答情况。 方法　将质粒按 5 0 μg/只在 0w ,3w ,5w免疫小鼠股四头肌 ,第一次免疫后取小鼠脾... 目的　观察含日本血吸虫候选疫苗分子谷胱甘肽S -转移酶 (Sj2 6 )和天冬酰胺肽链酶 (Sj32 )的真核载体 pBK-CMV -Sj2 6 /Sj32诱导小鼠的免疫应答情况。 方法　将质粒按 5 0 μg/只在 0w ,3w ,5w免疫小鼠股四头肌 ,第一次免疫后取小鼠脾细胞作T淋巴细胞转化实验 ;在 0w、3w和 6w经小鼠尾静脉取血 ,ELISA检测血清中抗体效价及阳性反应率。结果　淋巴细胞转化实验示血吸虫成虫抗原能特异性刺激免疫鼠脾细胞 ;第一次免疫后特异性抗体效价开始升高。抗体最高效价为 1∶2 0 ,3次免疫后有 91.7%小鼠血清呈阳性反应。结论　真核载体 pBK -CMV -Sj2 6 展开更多

关键词 日本血吸虫 sj26/Sj32 混合DNA疫苗 免疫应答

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日本血吸虫Sj26gst mRNA候选疫苗的免疫原性研究 被引量：1

12

作者 谭潇 朱琪 +2 位作者 刘众齐 李佳 彭丁晋 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CSCD 北大核心 2023年第5期546-551,共6页

目的制备日本血吸虫谷胱甘肽S⁃转移酶相对分子质量(Mr)26000亚基(Sj26gst)mRNA并评价其免疫原性。方法根据Sj26gst编码区序列(NC_002544.1),用人类常用的密码子优化Sj26gst编码序列,两端加β球蛋白3′和5′非编码区(UTR),合成后连接至pc... 目的制备日本血吸虫谷胱甘肽S⁃转移酶相对分子质量(Mr)26000亚基(Sj26gst)mRNA并评价其免疫原性。方法根据Sj26gst编码区序列(NC_002544.1),用人类常用的密码子优化Sj26gst编码序列,两端加β球蛋白3′和5′非编码区(UTR),合成后连接至pcDNA3.1(+),构建pcDNA3.1/Sj26gst质粒,以线性化的pcDNA3.1/Sj26gst质粒为模版,体外转录Sj26gst mRNA。用脂质体将Sj26gst mRNA转染至HeLa细胞中,转染后2、6、12、24、48 h取HeLa细胞,免疫荧光定量PCR(qRT⁃PCR)检测Sj26gst mRNA的相对水平,蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测Sj26GST蛋白的表达水平。雌性BALB/c小鼠随机均分为Sj26gst mRNA组、pcDNA3.1/Sj26gst组、pcDNA3.1组和PBS组(每组6只),分别于小鼠左后腿股四头肌肌内注射100μg的Sj26gst mRNA、pcDNA3.1/Sj26gst质粒、pcDNA3.1质粒和PBS(100μl),共免疫3次,每次间隔2周。分别采集免疫前(0),首次免疫后2、4、6、8周小鼠尾静脉血,制备血清,ELISA检测血清Sj26GST特异性IgG抗体水平。首次免疫后8周,无菌分离小鼠脾组织,制备脾淋巴细胞悬液,37℃培养48 h后,加入10μl细胞增殖试剂培养4 h后测定脾细胞刺激指数,ELISA法检测脾淋巴细胞上清中Th1型[肿瘤坏死因子α(TNF⁃α)、干扰素γ(INF⁃γ)],Th2型[白细胞介素4(IL⁃4)、IL⁃10]和Th17型(IL⁃17)细胞因子的水平。组间比较采用单因素方差分析。结果优化后的Sj26gst编码序列长858 bp,GC含量为63.2%,二级结构的自由能变为-485.6 kcal/mol。电泳结果显示,体外转录的Sj26gst mRNA条带呈单一且无弥散的条带。RT⁃PCR结果显示,Sj26gst mRNA转染后2 h,HeLa细胞Sj26gst mRNA相对水平为6.21±0.83,6 h达到峰值(14.26±1.23),随后下降;Western blotting结果显示,Sj26gst mRNA转染后6、12、24、48 h均检出Mr 26000的Sj26GST蛋白条带。ELISA检测结果显示,首次免疫后8周,Sj26gst mRNA组、pcDNA3.1/Sj26gst组、pcDNA3.1组和PBS组的A450分别为0.85±0.16、0.42±0.21、0.14±0.03和0.11±0.02,Sj26gst mRNA组与pcDNA3.1/Sj26gst组、pcDNA3.1/Sj26gst组与pcDNA3.1组之间差异均有统计学意义(t=16.46、12.35,均P<0.05)。首次免疫后8周,Sj26gst mRNA组、pcDNA3.1/Sj26gst组小鼠脾淋巴细胞增殖指数分别为11.25±1.22、6.37±2.45,高于pcDNA3.1组(2.56±0.38)和PBS组(1.27±0.45)(t=9.98、5.25,均P<0.05)。ELISA检测结果显示,Sj26gst mRNA组小鼠脾淋巴细胞上清中TNF⁃α、INF⁃γ、IL⁃10和IL⁃17的表达水平分别为(756.23±134.35)、(598.46±50.47)、(713.42±118.25)、(301.45±48.23)pg/ml,pcDNA3.1/Sj26gst组分别为(587.26±32.48)、(401.45±46.25)、(386.27±23.75)、(175.24±41.23),均高于pcDNA3.1组的(19.34±2.01)、(35.14±5.25)、(32.11±15.20)、(19.75±7.21)pg/ml和PBS组的(18.75±1.98)、(34.12±4.78)、(29.36±8.72)、(15.34±2.51)pg/ml(t=54.59、19.57、52.36、26.47,均P<0.05)。结论构建了稳定表达Sj26gst mRNA的质粒,Sj26gst mRNA可诱导产生高水平的特异性Sj26GST蛋白抗体并诱导Th1型细胞免疫应答。 展开更多

关键词 日本血吸虫 sj26gst mRNA疫苗 序列优化 细胞免疫

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日本血吸虫真核表达重组质粒pcDNA3-Sj26的构建及其在树突状细胞中的表达 被引量：1

13

作者 沈定文 李雍龙 +2 位作者 刘文琪 龙小纯 刘娟 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2005年第2期65-70,共6页

本研究构建日本血吸虫2 6kDa谷胱苷肽转移酶(Sj2 6 )基因的真核表达重组质粒(pcDNA3 Sj2 6 ) ,并探讨其在树突状细胞(DC)中的表达。采用PCR扩增Sj2 6基因片段,定向克隆至真核表达载体pcDNA3中,阳性克隆经双酶切、PCR扩增鉴定后,双脱氧... 本研究构建日本血吸虫2 6kDa谷胱苷肽转移酶(Sj2 6 )基因的真核表达重组质粒(pcDNA3 Sj2 6 ) ,并探讨其在树突状细胞(DC)中的表达。采用PCR扩增Sj2 6基因片段,定向克隆至真核表达载体pcDNA3中,阳性克隆经双酶切、PCR扩增鉴定后,双脱氧链末端终止法进行序列测定。用脂质体介导DNA转染法将pcDNA3- Sj2 6转染DC ,G4 18加压筛选获得阳性克隆并传代培养,用RT PCR检测Sj2 6mRNA的转录水平,用SDS- PAGE、Westernblot和间接免疫荧光法检测Sj2 6蛋白在DC中的表达。结果PCR扩增得到特异的Sj2 6基因片段,双酶切及PCR鉴定表明获得正确的pcDNA3 -Sj2 6重组质粒;测序结果表明,核苷酸序列和推导的氨基酸序列与GenBank报道的Sj2 6的一致性均为99% ;RT PCR结果显示pcDNA3- Sj2 6转染的DC中有Sj2 6基因mRNA的表达,SDS -PAGE和Westernblot、间接免疫荧光法显示pcDNA3- Sj2 6转染的DC中有Sj2 6的表达。结果证实构建的真核表达重组质粒pcDNA3- Sj2 6成功的转染至DC中并在DC中获得表达。 展开更多

关键词 日本血吸虫 真核表达重组质粒 pcDNA3-sj26 树突状细胞 基因转染 免疫功能

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rSj26-Sj32融合蛋白用于急性日本血吸虫病患者的诊断价值 被引量：1

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作者 王敏 李文桂 蔡世飞 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期49-53,69,共6页

目的探讨rSj26-Sj32融合蛋白用于急性日本血吸虫病患者的诊断价值。方法以纯化获得的rSj26-Sj32融合蛋白和SjAWA为包被抗原建立酶联免疫吸附试验(ELISA)、斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)和Dipstick三种方法分别检测急性日本血吸虫病... 目的探讨rSj26-Sj32融合蛋白用于急性日本血吸虫病患者的诊断价值。方法以纯化获得的rSj26-Sj32融合蛋白和SjAWA为包被抗原建立酶联免疫吸附试验(ELISA)、斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)和Dipstick三种方法分别检测急性日本血吸虫病患者血清中IgG抗体,并以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、泡型棘球蚴病、囊型棘球蚴病、乙型肝炎和肺结核患者以及健康人血清作对照。结果 rSj26-Sj32三种方法检测急性日本血吸虫病患者血清的敏感性分别为90.00%、100.00%和96.00%;特异性分别为97.67%、95.35%和97.67%。结论 rSj26-Sj32融合蛋白作为诊断抗原用于急性日本血吸虫病患者血清的诊断具有较好的敏感性和特异性,对急性日本血吸虫病的诊断有较大的应用价值。 展开更多

关键词 日本血吸虫病 rsj26-Sj32融合蛋白 免疫诊断

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乳酸乳球菌介导日本血吸虫重组LL-Sj26GST疫苗的构建、鉴定及表达 被引量：4

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作者 李文桂 欧兴坤 何爱琳 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2023年第12期1375-1380,共6页

目的构建以乳酸乳球菌(LL)为载体的日本血吸虫(Sj)rLL-Sj26GST疫苗,并研究其表达效率。方法以pGEX-Sj26GST为模板PCR扩增Sj26GST基因片段,经XbaⅠ和HindⅢ双酶切后插入pMG36e,构建重组质粒pMG36e-Sj26GST,转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受... 目的构建以乳酸乳球菌(LL)为载体的日本血吸虫(Sj)rLL-Sj26GST疫苗,并研究其表达效率。方法以pGEX-Sj26GST为模板PCR扩增Sj26GST基因片段,经XbaⅠ和HindⅢ双酶切后插入pMG36e,构建重组质粒pMG36e-Sj26GST,转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞。抽提质粒,经双酶切鉴定正确后电穿孔转化乳酸乳球菌MG1363株,构建日本血吸虫rLL-Sj26GST疫苗,抽提质粒进行PCR鉴定。结果pMG36e-Sj26GST经双酶切获得预期大小的目的片段,重组质粒构建正确。提取具有罗红霉素抗性的rLL质粒进行PCR,扩增出676 bp的Sj26GST基因片段;SDS-PAGE分析显示rLL可表达26 ku的Sj26GST蛋白,表达蛋白约占菌体总蛋白的18%;Western blot检测表达蛋白可被Sj感染者血清识别。结论成功构建日本血吸虫rLL-Sj26GST疫苗,表达的Sj26GST蛋白具有反应原性。 展开更多

关键词 乳酸乳球菌 日本血吸虫 sj26GST 疫苗

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rSj26-Sj32-IgG4-ELISA法用于慢性日本血吸虫病疗效考核价值的研究

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作者 蔡世飞 李文桂 +1 位作者 王敏 周必英 《热带医学杂志》 CAS 2010年第10期1160-1162,1211,共4页

目的 探讨rSj26-Sj32-IgG4-ELISA法用于慢性日本血吸虫病疗效考核价值的研究。方法 采用rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫粗抗原(SjAWA)作为包被抗原建立ELISA方法检测慢性日本血吸虫病患者体内治疗前后血清中特异性IgG4抗体水平... 目的 探讨rSj26-Sj32-IgG4-ELISA法用于慢性日本血吸虫病疗效考核价值的研究。方法 采用rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫粗抗原(SjAWA)作为包被抗原建立ELISA方法检测慢性日本血吸虫病患者体内治疗前后血清中特异性IgG4抗体水平的变化。结果 rSj26-Sj32融合蛋白组中,化疗前、化疗后3个月、化疗后6个月和化疗后12个月血清中IgG4抗体阳性率分别为95.00%、77.27%、60.00%和30.43%;而SjAWA组中血清特异性IgG4抗体阳性率分别为97.50%、81.82%、55.00%和34.78%。结论 rSj26-Sj32-IgG4-ELISA法可用于慢性日本血吸虫病的疗效考核。 展开更多

关键词 ELISA rsj26-Sj32融合蛋白 疗效考核 IGG4

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rSj26-Sj32-Immunogold-IgG-Dot-ELISA用于急性日本血吸虫病的诊断价值

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作者 王敏 李文桂 +1 位作者 蔡世飞 周必英 《热带医学杂志》 CAS 2010年第6期643-646,共4页

目的探讨rSj26-Sj32-Immunogold-IgG-Dot-ELISA用于急性日本血吸虫病患者的诊断价值。方法利用纯化的rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫抗原(SjAWA)建立Immunogold-IgG-Dot-ELISA方法检测急性日本血吸虫病患者血清,并以华支睾吸虫病... 目的探讨rSj26-Sj32-Immunogold-IgG-Dot-ELISA用于急性日本血吸虫病患者的诊断价值。方法利用纯化的rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫抗原(SjAWA)建立Immunogold-IgG-Dot-ELISA方法检测急性日本血吸虫病患者血清,并以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、棘球蚴病、乙型肝炎、肺结核病患者和健康人血清作对照,比较检测结果。结果 rSj26-Sj32和SjAWA检测急性日本血吸虫病患者的阳性检出率均为100%,特异性分别为97.67%和95.35%;SjAWA与华支睾吸虫病和卫氏并殖吸虫病血清均存在不同程度的交叉反应。结论纯化的rSj26-Sj32融合蛋白是一种较好的免疫诊断抗原。 展开更多

关键词 日本血吸虫病 rsj26-Sj32融合蛋白 Immunogold-IgG-Dot-ELISA 免疫诊断

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血吸虫Sj26膜锚定表达DNA疫苗的构建、表达及其免疫原性 被引量：4

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作者 杨平 戴五星 +4 位作者 刘朔捷 郭萍 马彦彬 唐成武 程继忠 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期141-144,152,共5页

目的构建含日本血吸虫相对分子质量为26 000的抗原(Sj26GST)基因的膜锚定表达DNA疫苗,观察其免疫BALB/c小鼠后的免疫应答效应。方法用RT-PCR法,以血吸虫成虫RNA为模板,扩增获得Sj26的全长基因。利用重组PCR技术,在Sj26基因的5′端加上编... 目的构建含日本血吸虫相对分子质量为26 000的抗原(Sj26GST)基因的膜锚定表达DNA疫苗,观察其免疫BALB/c小鼠后的免疫应答效应。方法用RT-PCR法,以血吸虫成虫RNA为模板,扩增获得Sj26的全长基因。利用重组PCR技术,在Sj26基因的5′端加上编码IL-2的信号肽核苷酸序列,3′端加上编码胎盘碱性磷酸酶的膜锚定序列,然后将其克隆入pIRES载体中,构建一个膜锚定型真核表达质粒pIRES-Sj26。将重组质粒转染HeLa细胞,通过RT-PCR及间接免疫荧光技术检测目的基因的表达。用构建的pIRES-Sj26疫苗肌肉注射免疫BALB/c小鼠后,以ELISA试剂盒检测小鼠血清中的总IgG抗体浓度,脾细胞培养法检测脾淋巴细胞培养上清的干扰素γ(INF-γ)含量,淋巴细胞刺激指数(SI)反映淋巴细胞增殖能力,流式细胞术检测脾细胞CD4/CD8亚群。结果经过酶切鉴定、PCR及测序证实重组质粒pIRES-Sj26构建成功,经转染HeLa细胞及免疫荧光检测证明质粒pIRES-Sj26能在体外进行表达。免疫小鼠后检测结果表明pIRES-Sj26组的血清总IgG抗体浓度、INF-γ的含量明显高于空白对照组和空载体组(均P<0.01);其脾SI高于空白对照组和空载体组(P<0.05);CD8+细胞百分比高于空白对照组和空载体组(均P<0.05),CD4+细胞百分比没有显著变化(P>0.05)。结论成功构建日本血吸虫膜锚定表达DNA疫苗pIRES-Sj26,表达的Sj26蛋白大部分锚定在细胞膜上。pIRES-Sj26疫苗能增强BALB/c小鼠的免疫应答反应。 展开更多

关键词 抗原 血吸虫 sj26 疫苗 DNA 免疫性

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日本血吸虫24-26kDa抗原和重组Sj26抗原的抗原性和免疫原性比较研究 被引量：20

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作者 刘述先 宋光承 +2 位作者 丁丽韻 徐裕信 吴公责 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1992年第3期190-193,共4页

本文报告从日本血吸虫大陆株成虫抽提的24—26kDa抗原与源于日本血吸虫菲律宾株的重组Sj26抗原之间在抗原性和免疫原性上所进行的一系列比较研究。ELISA、IFA和Westernblotting等方法观察结果均表明,24—26kDa和rSj26抗原免疫后所诱导... 本文报告从日本血吸虫大陆株成虫抽提的24—26kDa抗原与源于日本血吸虫菲律宾株的重组Sj26抗原之间在抗原性和免疫原性上所进行的一系列比较研究。ELISA、IFA和Westernblotting等方法观察结果均表明,24—26kDa和rSj26抗原免疫后所诱导的特异性抗体与其对应的抗原之间具有明显的抗原交叉反应,而与其它血吸虫抗原如可溶性虫卵抗原也有交叉反应。若以两种抗原加福氏佐剂分别免疫小鼠,以日本血吸虫大陆株尾蚴攻击感染,减虫率相似(26～32％),表明两种抗原存在一定程度的交叉免疫保护性。这些研究结果为开发rSj26抗原,或是根据已知Sj26 cDNA核苷酸序列制备DNA探针,从已构建的日本血吸虫(大陆株)cDNA库筛选相关目的基因,加速血吸虫疫苗的研制起着重要作用。 展开更多

关键词 抗原 血吸虫 抗原性 免疫原性

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日本血吸虫三价DNA疫苗pVIVO2-SjFABP/Sj26.SjGAPDH的构建及其免疫保护作用评价 被引量：3

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作者 朱路 龙全科 +4 位作者 刘海峰 鲁明波 胡媛 石佑恩 余龙江 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期36-42,共7页

目的:构建含有日本血吸虫中国大陆株脂肪酸结合蛋白(SjFABP),3-磷酸甘油醛脱氢酶(SjGAPDH),26kDa谷胱甘肽S转移酶(Sj26)的三价DNA疫苗,并通过药理实验评价其抗血吸虫感染的免疫保护作用。方法:以血吸虫成虫RNA为模板制备cDNA第一链,RT-... 目的:构建含有日本血吸虫中国大陆株脂肪酸结合蛋白(SjFABP),3-磷酸甘油醛脱氢酶(SjGAPDH),26kDa谷胱甘肽S转移酶(Sj26)的三价DNA疫苗,并通过药理实验评价其抗血吸虫感染的免疫保护作用。方法:以血吸虫成虫RNA为模板制备cDNA第一链,RT-PCR扩增得到抗原基因片段,再通过重组PCR技术,将Sj26和SjGAPDH融合为Sj26.SjGAPDH基因。将SjFABP和Sj26.SjGAPDH分别克隆入pVIVO2的mcs1和mcs2,获得重组质粒pVIVO2-SjFABP/Sj26.SjGAPDH。瞬时转染MCF-7细胞,通过逆转录PCR(RT-PCR)检测抗原基因在mRNA水平的表达,通过间接荧光免疫(IIF)检测抗原基因在小鼠体内抗原水平表达,验证了DNA疫苗的有效性;并免疫小鼠后进行免疫保护性初步试验。结果:经过酶切、测序及体内外表达验证,该三价DNA疫苗pVIVO2-SjFABP/Sj26.SjGAPDH构建成功;该三价DNA疫苗在小鼠抗血吸虫感染中诱发减虫率和减卵率达到58.6%和59.8%。结论:该三价DNA疫苗组具有比单价和双价DNA疫苗组更加良好的免疫保护作用,为日本血吸虫DNA疫苗的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 日本血吸虫 脂肪酸结合蛋白 3-磷酸甘油醛脱氢酶 26kDa谷胱甘肽S转移酶 三价DNA疫苗

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