目的:探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)模拟的炎症环境是否通过下调转运及高尔基体组织蛋白1(transport and Golgi organization protein 1,TANGO1)表达干扰含Sec1家族结构域蛋白1(Sec1 family domain-containing 1,SCFD1)功能,进而...目的:探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)模拟的炎症环境是否通过下调转运及高尔基体组织蛋白1(transport and Golgi organization protein 1,TANGO1)表达干扰含Sec1家族结构域蛋白1(Sec1 family domain-containing 1,SCFD1)功能,进而导致血管内皮细胞功能障碍和炎症恶化。方法:以人脐静脉内皮细胞为细胞模型,设置二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)组(培养液中加入0.1%DMSO);LPS组培养液中加入(1 mg/L的LPS);OE-NC组(细胞转染过表达质粒空载体);LPS+TANGO1过表达组(细胞转染过表达质粒后,再加入1 mg/L的LPS处理),每组重复样本数为3。采用内质网与高尔基体荧光探针进行共标记,观察荧光强度变化;Actin-Tracker Red检测TANGO1过表达对细胞骨架重塑的影响;Western blot检测TANGO1、SCFD1、肌醇需求酶1和剪接型X盒结合蛋白1的表达;流式细胞仪检测细胞的凋亡情况;通过检测活性氧、一氧化氮、超氧化物歧化酶和丙二醛水平以评估内皮细胞氧化应激水平。利用免疫共沉淀实验和敲减SCFD1同时过表达TANGO1的共转染实验,验证TANGO1与SCFD1的相互作用关系。结果:与DMSO组相比,LPS组显著促进细胞氧化应激水平(P<0.01),并增加细胞凋亡率(P<0.01);同时,LPS显著增强内质网荧光强度(P<0.01),降低高尔基体荧光强度(P<0.01),诱导细胞骨架重塑异常(伪足收缩),并下调TANGO1和SCFD1蛋白表达(P<0.01)。在LPS刺激下,过表达TANGO1可有效拮抗上述LPS诱导的细胞损伤(P<0.01)。免疫共沉淀实验证实TANGO1与SCFD1存在直接相互作用,过表达SCFD1对TANGO1的表达水平无显著影响,敲减SCFD1后,TANGO1缓解内质网应激的功能受阻。结论:LPS可通过下调TANGO1/SCFD1表达,破坏内质网-高尔基体稳态,导致血管内皮细胞氧化应激与凋亡,而过表达TANGO1可维持内质网-高尔基体稳态,降低细胞凋亡且发挥保护作用。展开更多
文摘目的:探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)模拟的炎症环境是否通过下调转运及高尔基体组织蛋白1(transport and Golgi organization protein 1,TANGO1)表达干扰含Sec1家族结构域蛋白1(Sec1 family domain-containing 1,SCFD1)功能,进而导致血管内皮细胞功能障碍和炎症恶化。方法:以人脐静脉内皮细胞为细胞模型,设置二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)组(培养液中加入0.1%DMSO);LPS组培养液中加入(1 mg/L的LPS);OE-NC组(细胞转染过表达质粒空载体);LPS+TANGO1过表达组(细胞转染过表达质粒后,再加入1 mg/L的LPS处理),每组重复样本数为3。采用内质网与高尔基体荧光探针进行共标记,观察荧光强度变化;Actin-Tracker Red检测TANGO1过表达对细胞骨架重塑的影响;Western blot检测TANGO1、SCFD1、肌醇需求酶1和剪接型X盒结合蛋白1的表达;流式细胞仪检测细胞的凋亡情况;通过检测活性氧、一氧化氮、超氧化物歧化酶和丙二醛水平以评估内皮细胞氧化应激水平。利用免疫共沉淀实验和敲减SCFD1同时过表达TANGO1的共转染实验,验证TANGO1与SCFD1的相互作用关系。结果:与DMSO组相比,LPS组显著促进细胞氧化应激水平(P<0.01),并增加细胞凋亡率(P<0.01);同时,LPS显著增强内质网荧光强度(P<0.01),降低高尔基体荧光强度(P<0.01),诱导细胞骨架重塑异常(伪足收缩),并下调TANGO1和SCFD1蛋白表达(P<0.01)。在LPS刺激下,过表达TANGO1可有效拮抗上述LPS诱导的细胞损伤(P<0.01)。免疫共沉淀实验证实TANGO1与SCFD1存在直接相互作用,过表达SCFD1对TANGO1的表达水平无显著影响,敲减SCFD1后,TANGO1缓解内质网应激的功能受阻。结论:LPS可通过下调TANGO1/SCFD1表达,破坏内质网-高尔基体稳态,导致血管内皮细胞氧化应激与凋亡,而过表达TANGO1可维持内质网-高尔基体稳态,降低细胞凋亡且发挥保护作用。
