SEC-HPLC法测定CN_(10)冻干品中CN_(10)的蛋白含量 被引量：1

1

作者 梁凌宇 高雪峰 +3 位作者 应莲芳 张轶 杨军 蒋琳 《药物生物技术》 CAS 2014年第3期246-249,共4页

通过高效液相色谱法(HPLC)建立一种测定CN10冻干品中蛋白含量的方法。以0.1 mol/L TrisHCl、0.1 moL/L NaCl、pH 7.2缓冲液作为流动相,色谱柱为TSK2000SWxl(4.6 mm×250 mm)凝胶过滤色谱柱,体积流量为0.65 mL/min,进样体积50μL,检... 通过高效液相色谱法(HPLC)建立一种测定CN10冻干品中蛋白含量的方法。以0.1 mol/L TrisHCl、0.1 moL/L NaCl、pH 7.2缓冲液作为流动相,色谱柱为TSK2000SWxl(4.6 mm×250 mm)凝胶过滤色谱柱,体积流量为0.65 mL/min,进样体积50μL,检测波长选择280 nm,依据HPLC外标法原理建立CN10含量测定方法,并根据《生物制品质量控制分析方法验证技术审评一般原则》对方法进行相关验证。结果:在该条件下,CN10和人血白蛋白之间有良好的分离度,CN10浓度在0.1~0.6 mg/mL的范围内与其峰面积呈良好的线形关系(R2=0.998 1),最低检出限和最低定量限分别0.01 mg/mL和0.04 mg/mL。方法的重复性RSD(%)为0.38,平均回收率为(100.40±2.28)%。用该方法检测CN10冻干制剂中的CN10蛋白含量时,不受人血白蛋白的影响,具有较高的准确性和专属性。 展开更多

关键词 冻干品 sec-hplc 外标法 含量测定 CNTF 人血白蛋白

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SEC-HPLC法测定rhTNK-tPA单链含量 被引量：3

2

作者 丁有学 韩春梅 +3 位作者 毕华 陶磊 刘兰 饶春明 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1208-1211,共4页

目的:测定重组人组织型纤溶酶原激活剂改构体(combinant human mutant-threonine mutant-asparagine mutant-lysine tissue type plasminogen activator,rhTNK-tPA)单链含量。方法:将样品用二硫苏糖醇(DTT)打开二硫键,采用分子排阻色谱(... 目的:测定重组人组织型纤溶酶原激活剂改构体(combinant human mutant-threonine mutant-asparagine mutant-lysine tissue type plasminogen activator,rhTNK-tPA)单链含量。方法:将样品用二硫苏糖醇(DTT)打开二硫键,采用分子排阻色谱(size-exclusion high performance liquid chromatograph,SEC-HPLC)法测定。色谱柱:Tsk-Gel2000SWxl;流动相:0.2 mol·L-1PB-0.1%SDS水溶液;流速:0.5 mL·min-1;检测波长:214 nm;柱温:23℃;检测时间:30 min。结果:试验精密度和重复性良好;分离度不低于1.1;3批rhTNK-tPA原液的单链含量分别为74.41%、75.39%、74.43%,3批成品的单链含量分别为73.82%、74.76%、74.91%。结论:本方法经方法学验证可用于rhTNK-tPA产品的常规检定。 展开更多

关键词 重组人组织型纤溶酶原激活剂改构体 高效液相色谱 单链含量

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SEC-HPLC法测定溶瘤腺病毒注射液的纯度 被引量：2

3

作者 李永红 韩春梅 +3 位作者 毕华 陶磊 李响 饶春明 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期48-51,共4页

目的:建立检测溶瘤腺病毒注射液纯度的分子排阻高效液相色谱法(SEC-HPLC法)。方法:采用XBridge BEH SEC分析柱和Waters 2695/2489高效液相色谱系统,以含150 mol·L^-1氯化钠的磷酸盐缓冲溶液(pH 7.0)为流动相进行等度洗脱,流速0.5 m... 目的:建立检测溶瘤腺病毒注射液纯度的分子排阻高效液相色谱法(SEC-HPLC法)。方法:采用XBridge BEH SEC分析柱和Waters 2695/2489高效液相色谱系统,以含150 mol·L^-1氯化钠的磷酸盐缓冲溶液(pH 7.0)为流动相进行等度洗脱,流速0.5 mL·min^-1,检测波长260 nm,采用峰面积归一法检测溶瘤腺病毒注射液纯度,并对方法的专属性、线性、重复性、中间精密度、检测下限和定量下限等指标进行考察。结果:空白溶剂无干扰峰出现;未经纯化和热处理的溶瘤腺病毒溶液中溶瘤腺病毒峰与其他杂质峰分离度均大于2.0;溶瘤腺病毒的进样量在2×108^2×10^10病毒颗粒(VP)范围内,浓度与吸收峰的线性关系良好(R^2=0.9985);6次进样测得的峰面积的RSD为0.78%;中间精密度试验的RSD为4.7%;检测下限为2.3×10^6 VP,定量下限为6.7×10^6 VP。3批溶瘤腺病毒注射液的纯度分析结果分别为99.84%、99.80%、99.64%。结论:SEC-HPLC法可用于检测溶瘤腺病毒注射液的纯度。 展开更多

关键词 溶瘤腺病毒 基因治疗产品 质量控制 纯度 分子排阻高效液相色谱法

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利用SEC-HPLC测定鼠神经生长因子的纯度 被引量：1

4

作者 张金龙 任军 +4 位作者 付玲 宋晓红 陈俭勤 吕鹏 侯利华 《生物技术通讯》 CAS 2013年第5期691-694,共4页

目的：建立检测鼠神经生长因子（mNGF）纯度的分子排阻高效液相色谱法（SEC-HPLC）。方法：利用TSK G3000 SWXL分析柱和Waters 2695/2487高效液相色谱系统检测mNGF标准品纯度，并对方法的专属性、线性、重复性、中间精密度、检测限及耐... 目的：建立检测鼠神经生长因子（mNGF）纯度的分子排阻高效液相色谱法（SEC-HPLC）。方法：利用TSK G3000 SWXL分析柱和Waters 2695/2487高效液相色谱系统检测mNGF标准品纯度，并对方法的专属性、线性、重复性、中间精密度、检测限及耐用性等指标进行评估。结果：空白溶剂在mNGF积分范围内无特异峰出现；样品浓度与吸收峰之间线性回归系数R2=0.9998；6次进样峰面积相对标准偏差（RSD）为1.18%；中间精密度分析RSD为0.45%；检测限为0.2μg；耐用性实验表明磷酸盐浓度在0.2~0.3 mol/L之间变动对检测结果无影响。结论：各项指标符合规定，SEC-HPLC法可用于检测mNGF的纯度。 展开更多

关键词 鼠神经生长因子 分子排阻高效液相色谱法 纯度

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mRNA疫苗原液中NTP残留检测方法的建立与应用

5

作者 王魁 郝一楠 +2 位作者 杨利昂 郭冰峰 潘若文 《中国药学杂志》 北大核心 2025年第17期1852-1857,共6页

目的 基高效液相色谱(HPLC)技术平台建立mRNA疫苗原液中核苷三磷酸(nucleoside triphosphate, NTP)残留的检测方法,比较反相高效液相色谱法(RP-HPLC)与尺寸排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)检测NTP的一致性,为mRNA疫苗原液的质量控制标准提... 目的 基高效液相色谱(HPLC)技术平台建立mRNA疫苗原液中核苷三磷酸(nucleoside triphosphate, NTP)残留的检测方法,比较反相高效液相色谱法(RP-HPLC)与尺寸排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)检测NTP的一致性,为mRNA疫苗原液的质量控制标准提供方法学支撑。方法 以mRNA疫苗原液作为研究对象,分别通过RP-HPLC和SEC-HPLC检测NTP的残留量,对这两种检测方法的专属性、准确度、精密度、线性、范围进行验证,并对这两种检测方法得出的结果进行比较。结果 这两种检测方法验证结果表明专属性强、准确度高(回收率为100%±10%),重复性好(RSD<5%),线性好(r^(2)=1.00),范围广(1~50μmol·L^(-1))满足mRNA疫苗原液中NTP残留的检测要求,且通过这两种检测方法获得的检测结果一致。结论 基于HPLC技术平台建立的RP-HPLC和SEC-HPLC具有特异性强、稳定、可靠的优点,这两种检测方法均可应用于mRNA疫苗原液中的NTP残留检测,其中RP-HPLC适用于4种单核苷酸的独立检测,SEC适用于NTP总核苷酸量检测,均能有效监测mRNA疫苗原液生产过程中NTP含量变化,为mRNA疫苗原液的NTP残留检测标准提供技术支撑。 展开更多

关键词 反相高效液相色谱 尺寸排阻高效液相色谱 mRNA疫苗 核苷三磷酸残留量

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HPLC-SEC法测定中药注射剂中残留大分子蛋白含量的研究

6

作者 齐越 鄢长余 +2 位作者 姜范成 夏春鹏 赵月然 《中国药物评价》 2025年第3期196-199,共4页

目的:建立高效液相色谱-体积排阻法(HPLC-SEC)测定中药注射剂中大分子蛋白残留量的检查方法。方法:采用TSK GEL G2000SWxl(7.8 mm×300 mm,5μm)凝胶色谱柱,以乙腈-0.08%三氟乙酸(5∶95,v/v)为流动相,流速0.8 mL·min^(-1),柱... 目的:建立高效液相色谱-体积排阻法(HPLC-SEC)测定中药注射剂中大分子蛋白残留量的检查方法。方法:采用TSK GEL G2000SWxl(7.8 mm×300 mm,5μm)凝胶色谱柱,以乙腈-0.08%三氟乙酸(5∶95,v/v)为流动相,流速0.8 mL·min^(-1),柱温35℃,检测波长214 nm。结果:选用蛋白对照品血清白蛋白(牛)、溶菌酶、人胰岛素、胸腺肽α1进行方法验证,其分子量分布为66400~3108 Da。以溶菌酶为对照品计算中药注射液中大分子蛋白的相对含量,结果显示,溶菌酶在0.3812~3.812μg浓度范围内线性关系良好(r>0.999),精密度、稳定性、重现性良好(RSD≤2.0%)。对5批中药注射剂样品进行测定,其中2批样品检出大分子蛋白残留,含量为25.7μg·mL^(-1)和32.6μg·mL^(-1)。结论:建立的HPLC-SEC方法操作简单,灵敏度高,重复性好,适用于中药注射液中大分子蛋白的限量检测,为控制中药注射液质量,提高其临床用药安全性提供了有效手段。该方法可为中药注射剂制备工艺优化和质量标准提高提供参考依据,具有较好的应用价值。 展开更多

关键词 高效液相色谱-体积排阻法 中药注射剂 离心过滤 大分子蛋白残留 溶菌酶

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冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液(无人白)体积分子排阻-高效液相色谱主峰右侧峰2蛋白鉴定 被引量：1

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作者 张秋菊 杨雪 +7 位作者 冯子祎 赵博 林洪娟 田丽媛 杨光 刘畅 李子莉 孙宏亮 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2024年第7期801-805,共5页

目的对冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液(无人白)体积分子排阻-高效液相色谱(size exclusion chromatograghy-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)主峰右侧峰2蛋白进行鉴定,以明确该峰的蛋白成分,保证疫苗质量。方法将... 目的对冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液(无人白)体积分子排阻-高效液相色谱(size exclusion chromatograghy-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)主峰右侧峰2蛋白进行鉴定,以明确该峰的蛋白成分,保证疫苗质量。方法将冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液(无人白)进行SEC-HPLC分析,收集主峰右侧峰2,经超滤浓缩后,进行二硫苏糖醇(dithiothreitol,DTT)还原、碘代乙酰胺(iodoacetamide,IAM)烷基化和胰蛋白酶(Trypsin)酶解,产物进行nanoLC-MS/MS串联质谱分析。结果冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液(无人白)SEC-HPLC主峰右侧峰2成功鉴定4个蛋白,单个蛋白匹配肽段数在59~79个之间;单个蛋白匹配特征肽段种数在6~12种之间;单个蛋白匹配特征肽段检出次数在20~36次之间;鉴定蛋白的序列覆盖率在37.40%~64.31%之间。参与统计的肽段共280个,质谱偏差均小于0.15 Da。结论冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液(无人白)SEC-HPLC主峰右侧峰2均来源于狂犬病病毒株4aGV,为疫苗颗粒解离物。 展开更多

关键词 狂犬病疫苗(Vero细胞)原液(无人白) 狂犬病病毒株4aGV 体积分子排阻-高效液相色谱 蛋白鉴定 nanoLC-MS/MS分析 疫苗病毒颗粒

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重组人C1酯酶抑制剂中聚合物含量的测定

8

作者 韩春梅 姚文荣 +4 位作者 丁有学 于雷 陶磊 秦玺 饶春明 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1917-1921,共5页

目的:建立分析重组人C1酯酶抑制剂(rh C1INH)中聚合物含量的分子排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)方法。方法:rh C1INH稀释后,采用TSK GEL3000SW色谱柱,214 nm检测波长对其聚合物进行检测,以250 mmol·L^(-1)磷酸缓冲液(p H 6.8)为流动相... 目的:建立分析重组人C1酯酶抑制剂(rh C1INH)中聚合物含量的分子排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)方法。方法:rh C1INH稀释后,采用TSK GEL3000SW色谱柱,214 nm检测波长对其聚合物进行检测,以250 mmol·L^(-1)磷酸缓冲液(p H 6.8)为流动相,流速0.5 mL·min^(-1)进行洗脱。结果:在25.0～85.0μg·m L^(-1)浓度范围内,rh C1INH标准品的峰面积与浓度的线性关系良好(R^2平均值为0.997)。rh C1INH样品中分离到3个聚合物峰,采用面积归一法计算6次进样的聚合物的平均含量分别为0.11%、0.15%和0.60%,RSD分别为10.7%、9.0%和3.9%。4批次rh C1INH样品中总聚合物的含量分别为0.82%、1.01%、0.97%和0.92%。结论:SEC-HPLC方法适用于rh C1INH中聚合物的检测,为其聚合物质量标准的建立和产品评价奠定了基础。 展开更多

关键词 重组人C1酯酶抑制剂(rhC1INH) 分子排阻高效液相色谱(sec-hplc) 聚合物含量 质量控制 生物技术药物

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高效液相色谱与电感耦合等离子体质谱联用技术用于胁迫富硒海带硒形态研究 被引量：26

9

作者 仲娜 王小如 +2 位作者 杨黄浩 曹煊 王庚 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2008年第1期77-80,共4页

通过对海带胁迫富硒培养,研究了海带对硒的富集总量及硒化学形态转变.建立了反相离子对缓冲盐等3个色谱系统的高效液相色谱与电感耦合等离子体质谱联用(RP-HPLC-ICP-MS)技术测定亚硒酸钠、硒甲基半胱氨酸(MeSeCys)、硒代蛋氨酸(SeMet)... 通过对海带胁迫富硒培养,研究了海带对硒的富集总量及硒化学形态转变.建立了反相离子对缓冲盐等3个色谱系统的高效液相色谱与电感耦合等离子体质谱联用(RP-HPLC-ICP-MS)技术测定亚硒酸钠、硒甲基半胱氨酸(MeSeCys)、硒代蛋氨酸(SeMet)三种硒形态.采用3种提取溶剂,超声提取缩短提取时间,分离检测富硒海带的主要硒形态为亚硒酸钠、硒甲基半胱氨酸和硒代蛋氨酸. 展开更多

关键词 富硒海带 RP—HPLC—ICP—MS SEC—HPLC—ICP—MS 总量 形态 亚硒酸钠 硒甲基半胱氨酸 硒代蛋氨酸

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英夫利西单抗质量控制中的趋势分析 被引量：3

10

作者 刘春雨 于传飞 +5 位作者 武刚 李萌 付志浩 俞小娟 崔永霏 王兰 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期30-38,共9页

目的:对英夫利西单抗的质量控制项目进行趋势分析。方法:利用WEHI164-13var细胞株作为靶细胞,通过细胞增殖抑制作用,使用CellTiter 96AQ_(ueous)检测试剂进行英夫利西单抗的生物学活性检测,以英夫利西单抗参比品计算供试品相对百分效价... 目的:对英夫利西单抗的质量控制项目进行趋势分析。方法:利用WEHI164-13var细胞株作为靶细胞,通过细胞增殖抑制作用,使用CellTiter 96AQ_(ueous)检测试剂进行英夫利西单抗的生物学活性检测,以英夫利西单抗参比品计算供试品相对百分效价;采用分子排阻色谱方法,按面积归一化法计算单体峰面积百分比进行抗体纯度检测;采用紫外分光光度法进行蛋白质含量检测;采用电位法进行pH检测;对中国食品药品检定研究院(NIFDC)和企业质控实验室多批次英夫利西单抗的上述检测结果,分别建立警戒限(均值±2SD)和行动限(均值±3SD),绘制趋势分析图,对结果进行连续性趋势分析;并对生物学活性的检测结果进行周期性趋势分析。结果:英夫利西单抗供试品和参比品在生物学活性中均存在量效关系,符合四参数方程式:y=(A-D)/[1+(x/C)~B]+D,在半对数坐标纸上呈S型曲线分布。对2008—2017年某企业65批英夫利西单抗的生物学活性检测结果显示,生物学活性相对百分效价均值NIFDC与企业分别为(98.000±9.384)%和(103.046±4.421)%;蛋白质含量均值分别为(96.431±3.000)mg·瓶^(-1)和(99.692±1.185)mg·瓶^(-1);分子排阻色谱单体峰面积均值分别为(99.771±0.177)%和(99.543±0.179)%;pH均值分别为7.272±0.111和7.309±0.038。对上述结果进行连续性和周期性趋势分析,总体趋势较平稳。结论:通过对英夫利西单抗的部分关键质量属性(CQA)进行趋势分析,结果反映了该制品的变化情况,对评价英夫利西单抗的批间一致性和生产工艺稳定性提供了参考,也为其他单抗质控中的趋势分析提供重要指导。 展开更多

关键词 英夫利西 单抗 质量控制 生物学活性 蛋白质含量 分子排阻色谱 PH 趋势分析

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体积排阻高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法同时测定印度芥菜(Brassica Juncea)中镉铜锌形态 被引量：5

11

作者 杨红霞 刘崴 +3 位作者 李冰 魏巍 张惠娟 陈登云 《岩矿测试》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期9-13,共5页

建立了体积排阻高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法同时测定印度芥菜中镉、铜、锌形态分析方法。为了防止巯基化合物氧化反应的发生,样品采取液氮保护并在-70℃保存,样品分析全流程采取氮吹防氧化措施。在镉、铜、锌胁迫下,诱导产生... 建立了体积排阻高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法同时测定印度芥菜中镉、铜、锌形态分析方法。为了防止巯基化合物氧化反应的发生,样品采取液氮保护并在-70℃保存,样品分析全流程采取氮吹防氧化措施。在镉、铜、锌胁迫下,诱导产生植物螯合肽(PCs)。在叶片和根部均检测到3种元素的4种形态,植物螯合肽(PC)3-Cd(Cu,Zn)、植物螯合肽(PC)2-Cd(Cu,Zn)、谷胱甘肽(GSH)-Cd(Cu,Zn)、半胱胺酸(Cys)-Cd(Cu,Zn)及其在植物体内的分布规律。结合植物不同部位Cd、Cu、Zn分布规律初步推断,Cd、Cu、Zn在与GSH及Cys的结合上存在竞争。 展开更多

关键词 形态分析 镉 铜 锌 印度芥菜 体积排阻高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法

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23F型肺炎链球菌多糖蛋白结合物游离蛋白含量检测方法的建立及验证 被引量：4

12

作者 邓海清 尹珊珊 +5 位作者 郝倩 顾行举 刘杨 张艳红 高宇皎 刘建凯 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第5期579-583,共5页

目的建立一种检测23F型肺炎链球菌多糖结合物游离蛋白含量的方法,并进行方法学验证。方法采用体积排阻高效液相色谱(size exclusion chromatography and high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)法检测23F型肺炎链球菌多糖结... 目的建立一种检测23F型肺炎链球菌多糖结合物游离蛋白含量的方法,并进行方法学验证。方法采用体积排阻高效液相色谱(size exclusion chromatography and high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)法检测23F型肺炎链球菌多糖结合物游离蛋白含量。色谱柱:TSKgel G3000(300 mm×78 mm,5μm);流动相:10 mmol/L PBS(150 mmol/L NaCl,pH 6. 8);检测波长:214 nm;流速:0. 5 m L/min;柱温:25℃;自动进样:100μL。同时对该方法进行线性、精密度、准确度、耐用性及专属性验证。结果建立的方法在纯化载体蛋白破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)含量为3～18μg/mL时,与峰面积呈良好的线性关系,线性相关系数(R2)> 0. 99;23F-2017001、23F-2017002、23F-2017003批供试品重复性相对标准偏差(RSD)分别为0. 1%、0. 3%、1. 0%,中间精密性RSD分别为3. 7%、8. 5%、4. 8%;加入6、8、10μg/mL纯化载体蛋白TT样品的3次检测结果回收率在93. 2%～102. 6%之间,回收率的RSD均为0. 6%;进样温度为20～30℃条件下的保留时间和峰面积相对偏倚在-0. 1%～0. 5%之间;流动相溶液中含甘氨酸及低浓度硼酸时对检测结果无干扰,硼酸浓度为20 mmol/L以上时对游离蛋白峰检测有一定干扰。结论本实验建立的方法具有良好的线性、精密性、准确性、耐用性及专属性,可用于23F型肺炎链球菌多糖结合物游离蛋白含量检测。 展开更多

关键词 肺炎链球菌 多糖蛋白结合物 游离蛋白 体积排阻高效液相色谱

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注射用绒促性素中纯度测定方法的研究 被引量：3

13

作者 郑璐侠 史卓维 +3 位作者 吴利红 王灿 邵泓 陈钢 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期333-336,326,共5页

目的:建立了分子排阻法测定注射用绒促性素中纯度的方法,并在2010年度国家药品质量评价性抽验工作中,按照所建方法对国产注射用绒促性素进行了测定和评价。方法:采用两根TSK G3000SWXL凝胶色谱柱(7.8 mm×300 mm,5μm)串联,预柱为TS... 目的:建立了分子排阻法测定注射用绒促性素中纯度的方法,并在2010年度国家药品质量评价性抽验工作中,按照所建方法对国产注射用绒促性素进行了测定和评价。方法:采用两根TSK G3000SWXL凝胶色谱柱(7.8 mm×300 mm,5μm)串联,预柱为TSK SWXL(6.0 mm×40 mm,5μm),以0.05 mol·L-1磷酸二氢钠缓冲液(pH 7.0)-乙腈(80∶20)为流动相,流速0.6 mL·min-1,检测波长214 nm,面积归一化法定量。结果:卵泡刺激素(FSH)和绒促性素(HCG)分离完全,各辅料均无干扰,绒促性素的效价比活和纯度呈正相关。目前法定检验标准中无此检查项,76批样品全部合格,没有发现问题;若按本法进行纯度检查,则样品的不合格率显著增加。结论:本法具有较高的选择性,结果稳定、准确可靠,通过测定绒促性素的纯度可达到监控制剂生产过程中所使用原料的效价比活的目的。在此次专项抽验中发现现行标准存在缺陷,仍有待进一步提高,可采用专属性较强的仪器分析法如分子排阻法检查该品种的纯度或进行鉴别。 展开更多

关键词 激素兴奋剂 卵泡刺激素(FSH) 绒促性素(HCG) 分子排阻高效液相色谱 纯度测定 评价性抽验 制剂生产监控

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测定重组肠道病毒71型疫苗(汉逊酵母)原液纯度的高效分子排阻色谱法的建立及方法的验证 被引量：3

14

作者 张改梅 陈磊 +8 位作者 李国顺 肖海峰 李进 郭林 刘思航 徐颖之 朱芮波 刘建凯 顾美荣 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第2期207-210,214,共5页

目的建立检测重组肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)(汉逊酵母)病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)纯度的高效分子排阻色谱法(SEC-HPLC),并进行验证。方法建立SEC-HPLC法检测EV71 VLP纯度,并对该方法的专属性、精密度、检测限、定量... 目的建立检测重组肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)(汉逊酵母)病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)纯度的高效分子排阻色谱法(SEC-HPLC),并进行验证。方法建立SEC-HPLC法检测EV71 VLP纯度,并对该方法的专属性、精密度、检测限、定量限、耐用性及拖尾因子等指标进行验证。结果空白溶剂在设定的积分范围内无特异峰出现。重复性试验中原液参比品保留时间和峰面积相对标准偏差(RSD)分别为0. 14%和0. 21%,3批分析原液保留时间RSD均<0. 3%,峰面积RSD均<0. 8%;中间精密度试验原液参比品和3批分析原液保留时间RSD均<0. 2%;峰面积RSD均<2. 0%。检测限为样品浓度2. 5μg/mL,进样体积20μL;定量限为样品浓度10μg/mL,进样体积20μL。耐用性试验中原液参比品在不同浓度流动相中连续进样3次,保留时间和峰面积RSD均<2. 0%。原液参比品和3批分析原液目的峰的拖尾因子为1. 210±0. 01,RSD为0. 90%。结论建立的SEC-HPLC方法专属性、精密度、耐用性良好,适用于EV71(汉逊酵母)VLP纯度的检测。 展开更多

关键词 高效分子排阻色谱法 重组肠道病毒71型疫苗(汉逊酵母) 病毒样颗粒 纯度

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蛇毒血凝酶纯度分析方法研究 被引量：2

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作者 程速远 王超众 +2 位作者 李晶 梁成罡 王凤山 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1398-1401,共4页

目的:建立蛇毒血凝酶纯度测定方法。方法:分别采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)和等电聚焦法(IEF),对凝胶考染并扫描;采用体积排阻高效液相色谱法(SEC-HPLC),使用TSK G3000SW(7.8 mm×300 mm)凝胶柱,流动相为55 mmol.L-1柠... 目的:建立蛇毒血凝酶纯度测定方法。方法:分别采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)和等电聚焦法(IEF),对凝胶考染并扫描;采用体积排阻高效液相色谱法(SEC-HPLC),使用TSK G3000SW(7.8 mm×300 mm)凝胶柱,流动相为55 mmol.L-1柠檬酸钠-0.01%Tween 80溶液;流速0.5 mL.min-1,检测波长280 nm;采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC),使用C8Vydac(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为0.1%三氟乙酸溶液(A)-含0.1%三氟乙酸的90%乙腈(B),梯度洗脱,流速0.8 mL.min-1,;柱温为45℃,检测波长:280 nm。结果:4种方法测得蛇毒血凝酶的纯度分别为89.3%,88.5%,95.4%,87.4%。结论:对于蛇毒血凝酶纯度测定,非还原SDS-PAGE、IEF及RP-HPLC法均可准确地反映其样品纯度。 展开更多

关键词 蛇毒血凝酶 纯度测定 非还原SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法 等点聚焦 体积排阻高效液相色谱

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高效液相色谱法测定重组人纽兰格林的纯度 被引量：1

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作者 祁超 邓灵福 +3 位作者 李文新 王煜 王莹莹 冯玉文 《华中师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2005年第4期534-536,共3页

使用分子筛和反相高效液相色谱法测定重组人纽兰格林,得到重组人纽兰格林的分子筛和反相C 8柱的纯度分别是:100%和98.93%.说明本方法灵敏、准确、简单,适用于重组人纽兰格林的纯度测定.

关键词 高效液相色谱法 分子筛 反相C8柱 纯度

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微波干燥对生物解离富肽豆粉蛋白亚基及功能性的影响 被引量：13

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作者 王欢 佟晓红 +3 位作者 钟明明 齐宝坤 李杨 江连洲 《农业机械学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第7期363-368,共6页

以生物解离大豆水解液为研究对象,运用高效液相体积排阻色谱技术研究了不同微波干燥条件对富肽豆粉中蛋白类物质亚基组分和空间构象的变化规律,并对生物解离富肽豆粉的粉体性质及功能性质进行研究。结果表明,微波干燥条件对HPLC-SEC峰... 以生物解离大豆水解液为研究对象,运用高效液相体积排阻色谱技术研究了不同微波干燥条件对富肽豆粉中蛋白类物质亚基组分和空间构象的变化规律,并对生物解离富肽豆粉的粉体性质及功能性质进行研究。结果表明,微波干燥条件对HPLC-SEC峰的强度影响明显,分子量18~44 ku的蛋白质水解物约占总蛋白质类的73.47%~89.36%,主要亚基成分为大豆球蛋白,这是由于不同微波干燥条件下的物相转换率和分子间碰撞机会不同,蛋白纤维化聚集形成的速度不同,从而对生物解离富肽豆粉分子量产生影响。此外,生物解离富肽豆粉的水溶性和分散性在不同微波干燥条件下具有相似趋势,这与粉体残余水分量、蛋白质分子运动剧烈程度、分子构象变化及分子聚集和解离相关。 展开更多

关键词 富肽豆粉 微波干燥 生物解离 高效液相体积排阻色谱

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新型定性-定量测定血红蛋白氧载体的检测系统Ⅲ.建立抗人源性氧载体类兴奋剂检测系统的初探

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作者 陈芳 严坤平 +4 位作者 王丽莉 褚巍 王凡 陈超 但宁 《西北大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期255-258,共4页

目的构建一种高通量蛋白芯片检测人血清中血红蛋白氧载体类兴奋剂的方法。方法用自制SEC微柱快速地将人血清中血红蛋白聚合体(氧载体)和血红蛋白单体(另外加入的内标)分离,逐滴收集洗脱液作为探针,点样结合在蛋白质基片上,与其相对应的... 目的构建一种高通量蛋白芯片检测人血清中血红蛋白氧载体类兴奋剂的方法。方法用自制SEC微柱快速地将人血清中血红蛋白聚合体(氧载体)和血红蛋白单体(另外加入的内标)分离,逐滴收集洗脱液作为探针,点样结合在蛋白质基片上,与其相对应的荧光标记的多克隆抗体进行杂交,扫描芯片荧光强度检测人血红蛋白氧载体。结果自制SEC微柱能够将戊二醛聚合的人血红蛋白聚合体和单体有效分离,在蛋白芯片的检测中能较好地检测出人血清中1.5%的聚合体人血红蛋白氧载体。结论以SEC技术和蛋白芯片相结合是一种高通量、灵敏、重现性好的检测人血清中的以人血红蛋白为基质氧载体类兴奋剂新方法。 展开更多

关键词 sec-hplc 血红蛋白氧载体 兴奋剂蛋白质芯片

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HPLC法测定大鼠血浆中氯桂丁胺浓度 被引量：1

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作者 李强 步秀云 +1 位作者 章国良 楼雅卿 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期279-281,共3页

目的:建立测定大鼠血浆中氯桂丁胺(7903)含量的HPLC方法。方法:选用Agilent ZorBax Extend-C18(4.6mm×150mm,5μg)反相色谱柱,以3,4-二氯苯丙烯酰环己胺(8102)为内标,乙酸乙酯作萃取剂,流动相为甲醇-水(80:20),流速为1 mL·min... 目的:建立测定大鼠血浆中氯桂丁胺(7903)含量的HPLC方法。方法:选用Agilent ZorBax Extend-C18(4.6mm×150mm,5μg)反相色谱柱,以3,4-二氯苯丙烯酰环己胺(8102)为内标,乙酸乙酯作萃取剂,流动相为甲醇-水(80:20),流速为1 mL·min-1,在紫外吸收波长276 nm处测定。结果:氯桂丁胺浓度线性范围在0.01-8μg·mL-1之间,最低检出浓度为0.01 μg·mL-1,低中高浓度相对平均回收率在95%以上,日内RSD在8.0%-9.5%之间,日间RSD在5.2%-8.9%之间。结论:本方法准确、灵敏、简便,能够满足临床前动物药代动力学研究的要求。 展开更多

关键词 HPLC法 大鼠 血浆 氯桂丁胺 高效液相色谱法

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测定皮胶原水解产物分子量的方法研究 被引量：4

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作者 林炜 穆畅道 +1 位作者 舒子斌 朱梅湘 《皮革科学与工程》 CAS 2003年第1期22-28,32,共8页

应用体积排阻色谱(SEC)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、高效液相与电喷雾质谱联用(HPLC/ESI-MS)这三种蛋白质分子量分析测试技术,来表征胶原水解产物的分子量,以寻求较好的胶原水解产物分子量的测试方法;同时为建立水解反应条件的控... 应用体积排阻色谱(SEC)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、高效液相与电喷雾质谱联用(HPLC/ESI-MS)这三种蛋白质分子量分析测试技术,来表征胶原水解产物的分子量,以寻求较好的胶原水解产物分子量的测试方法;同时为建立水解反应条件的控制与水解产物分子量之间的关系提供一定的依据。 展开更多

关键词 胶原水解物 分子量 GFC SDS-PAGE HPLC/ESI-MS

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