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SDF-1对肝癌细胞增殖、侵袭和裸鼠成瘤的影响
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作者 李莹 杨妮 +4 位作者 张耀君 张晓霞 郭瑞 马淑红 王晓莉 《转化医学杂志》 2025年第1期204-209,共6页
目的 探究基质细胞衍生因子1(SDF-1)表达对肝癌细胞过度增殖、恶性侵袭和体内移植瘤的影响。方法 shRNA SDF-1转染至HepG2细胞,并随机分为Control组、shRNA-NC组和SDF-1-shRNA1组。采用克隆形成实验检测HepG2细胞的增殖;采用Transwell... 目的 探究基质细胞衍生因子1(SDF-1)表达对肝癌细胞过度增殖、恶性侵袭和体内移植瘤的影响。方法 shRNA SDF-1转染至HepG2细胞,并随机分为Control组、shRNA-NC组和SDF-1-shRNA1组。采用克隆形成实验检测HepG2细胞的增殖;采用Transwell实验检测细胞侵袭;采用蛋白免疫印迹实验检测Ki67、Survivin、Vimentin、E-cadherin、N-cadherin的蛋白表达水平;在体内建立裸鼠体内移植瘤模型,比较Control组和SDF-1-shRNA1组瘤体增殖能力的差异,并采用免疫组化方法检测2组Ki67和血管内皮生长因子(VEGF)阳性细胞数。结果 SDF-1-shRNA1组克隆形成能力低于Control组(P <0.05),Ki67和Survivin蛋白水平低于Control组(P <0.05),侵袭细胞数少于Control组(P <0.05),Vimentin和N-cadherin蛋白表达水平低于Control组(P <0.05),E-cadherin蛋白水平高于Control组(P <0.05);在体内,与Control组相比,SDF-1-shRNA1组肿瘤体积缩小(P <0.05),肿瘤质量减轻(P <0.05),Ki67和VEGF阳性细胞数明显减少(P <0.05)。结论 SDF-1基因干扰抑制HepG2细胞的增殖和侵袭。 展开更多
关键词 肝癌 sdf-1 增殖 侵袭
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基于SDF-1α/CXCR4信号通路探究圣草次苷对颅内动脉瘤模型大鼠的干预作用
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作者 罗可 黄伟 +1 位作者 李维民 唐爽 《浙江中医药大学学报》 2025年第9期1085-1093,共9页
[目的]基于基质细胞衍生因子-1α(stromal cell derived factor-1α,SDF-1α)/C-X-C基序趋化因子受体4(C-X-C motif chemokine receptor 4,CXCR4)信号通路,探究圣草次苷对颅内动脉瘤(intracranial aneurysm,IA)模型大鼠的干预作用。[方... [目的]基于基质细胞衍生因子-1α(stromal cell derived factor-1α,SDF-1α)/C-X-C基序趋化因子受体4(C-X-C motif chemokine receptor 4,CXCR4)信号通路,探究圣草次苷对颅内动脉瘤(intracranial aneurysm,IA)模型大鼠的干预作用。[方法]通过分离、结扎左颈总动脉、肾动脉,同时摘除双侧卵巢建立IA大鼠模型,并随机分为IA组(0.9%氯化钠溶液灌胃及腹腔注射),圣草次苷低剂量组(圣草次苷8 mg·kg^(-1)灌胃)、中低剂量组(圣草次苷16 mg·kg^(-1)灌胃)、高剂量组(圣草次苷32 mg·kg^(-1)灌胃)组,圣草次苷高剂量(圣草次苷32 mg·kg^(-1)灌胃)+SDF-1α/CXCR4通路激活剂CTCE-0214(10 mg·kg^(-1)CTCE-0214腹腔注射)组,其余10只大鼠仅暴露左颈总动脉、肾动脉及卵巢,作为假手术组(0.9%氯化钠溶液灌胃及腹腔注射),每组干预1次/d,连续8周。末次干预24 h后,以酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、一氧化氮(nitric oxide,NO)水平;Elastica van Gieson染色评估动脉瘤长度、动脉瘤管腔面积、内部弹性层破裂长度;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色检测动脉瘤组织病理学变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real time-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测组织中基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、MMP-2的mRNA表达;免疫印迹检测组织中SDF-1α/CXCR4相关蛋白表达。[结果]与假手术组比较,IA组TNF-α、IL-6水平,动脉瘤长度,动脉瘤管腔面积,内部弹性层破裂长度,MMP-9、VEGF、MMP-2 mRNA表达,SDF-1α、CXCR4蛋白表达显著增高,但NO水平显著降低(P<0.05)。与IA组比较,圣草次苷低、中、高剂量组TNF-α、IL-6水平,动脉瘤长度,动脉瘤管腔面积,内部弹性层破裂长度,MMP-9、VEGF、MMP-2 mRNA表达,SDF-1α、CXCR4蛋白表达显著降低,NO水平显著增高(P<0.05)。与圣草次苷高剂量比较,圣草次苷高剂量+CTCE-0214组TNF-α、IL-6水平,动脉瘤长度,动脉瘤腔面积,内部弹性层破裂长度,MMP-9、VEGF、MMP-2 mRNA表达,以及SDF-1α、CXCR4蛋白表达显著增高,但NO水平显著降低(P<0.05)。[结论]圣草次苷通过调节SDF-1α/CXCR4信号通路,减轻IA大鼠炎症反应,改善血管内皮细胞功能,减少动脉瘤破裂风险。 展开更多
关键词 生长因子圣草次苷 颅内动脉瘤 sdf-1α/CXCR4信号通路 肿瘤坏死因子-α 白细胞介素-6 一氧化氮 基质金属蛋白酶 血管内皮生长因子
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血清DKK-1、SDF-1α联合骨髓涂片对多发性骨髓瘤的诊断价值
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作者 杨海 康明哲 +1 位作者 冉鹏 王战 《实用癌症杂志》 2025年第10期1728-1732,共5页
目的 探讨血清DKK-1、SDF-1α联合骨髓涂片对多发性骨髓瘤的诊断价值。方法 筛选多发性骨髓瘤患者66例作为病例组,同期选取因为缺铁性贫血、再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合征等原因接受骨髓穿刺的患者30例作为对照组。采用ELISA法检... 目的 探讨血清DKK-1、SDF-1α联合骨髓涂片对多发性骨髓瘤的诊断价值。方法 筛选多发性骨髓瘤患者66例作为病例组,同期选取因为缺铁性贫血、再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合征等原因接受骨髓穿刺的患者30例作为对照组。采用ELISA法检测血清DKK-1、SDF-1α水平,并均进行骨髓涂片,对比2组血清DKK-1、SDF-1α、骨髓浆细胞占比以及病例组不同分期血清DKK-1、SDF-1α、骨髓浆细胞占比,ROC曲线分析血清DKK-1、SDF-1α、骨髓浆细胞占比对多发性骨髓瘤及其临床分期的诊断价值。结果 病例组血清DKK-1、SDF-1α、骨髓浆细胞占比均高于对照组(P<0.05);病例组Ⅲ期血清DKK-1、SDF-1α、骨髓浆细胞占比均高于Ⅱ期、Ⅰ期(P<0.05),Ⅱ期血清DKK-1、SDF-1α、骨髓浆细胞占比又高于Ⅰ期(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清DKK-1、SDF-1α、骨髓浆细胞占比联合诊断多发性骨髓瘤效能较单一指标更高,ACU为0.953(95%CI:0.913~0.993),灵敏度为0.879,特异度为0.933;血清DKK-1、SDF-1α、骨髓浆细胞占比联合诊断多发性骨髓瘤临床分期效能较单一指标更高,ACU为0.896(95%CI:0.822~0.970),灵敏度为0.862,特异度为0.767,P<0.001。结论 血清DKK-1和SDF-1α的联合检测以及骨髓涂片分析能够显著提高对多发性骨髓瘤的诊断准确性,特别是在不同临床分期的鉴别上具有重要价值,为多发性骨髓瘤的早期诊断和分期评估提供了新的生物标志物支持。 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 DKK-1 sdf-1Α 骨髓涂片
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布托啡诺调控SDF-1α/CXCR4通路对脂多糖诱导的软骨细胞损伤的影响
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作者 方军 刘希明 +2 位作者 李振 杨猛 董庆永 《中国比较医学杂志》 北大核心 2025年第8期94-101,共8页
目的探究布托啡诺调控基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)/C-X-C型趋化因子受体4(CXCR4)通路对脂多糖诱导的软骨细胞损伤的影响。方法体外培养人软骨细胞C28/I2,并分对照组(正常培养)、模型组(100μmol/L脂多糖)、模型+低剂量布托啡诺组(100... 目的探究布托啡诺调控基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)/C-X-C型趋化因子受体4(CXCR4)通路对脂多糖诱导的软骨细胞损伤的影响。方法体外培养人软骨细胞C28/I2,并分对照组(正常培养)、模型组(100μmol/L脂多糖)、模型+低剂量布托啡诺组(100μmol/L脂多糖+1μmol/L布托啡诺)、模型+中剂量布托啡诺组(100μmol/L脂多糖+2μmol/L布托啡诺)、模型+高剂量布托啡诺组(100μmol/L脂多糖+4μmol/L布托啡诺)、模型+高剂量布托啡诺+NUCC-390组(100μmol/L脂多糖+4μmol/L布托啡诺+500 nmol/L CXCR4激动剂NUCC-390)。MTT法、ELISA法、流式细胞术、Western blot分别检测细胞活性、IL-6及TNF-α水平、细胞凋亡、凋亡及SDF-1α/CXCR4通路相关蛋白表达。结果相比较于对照组,模型组软骨细胞存活率、Bcl-2降低,TNF-α、IL-6、细胞凋亡率、Bax、Cleaved caspase-3、SDF-1α、CXCR4升高(P<0.05);模型+低、中、高剂量布托啡诺组较模型组以上指标得到改善,而模型+高剂量布托啡诺+NUCC-390组与模型+高剂量布托啡诺组相比结果相反。结论布托啡诺对脂多糖诱导的软骨细胞损伤的改善,可能与抑制SDF-1α/CXCR4信号通路有关。 展开更多
关键词 布托啡诺 sdf-1α/CXCR4通路 脂多糖 软骨细胞 损伤
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糖尿病性黄斑水肿患者血清中ANGPTL4和SDF-1表达水平与病情严重程度的相关性 被引量:2
5
作者 李萍 武静 +1 位作者 李婕 王凯 《国际眼科杂志》 2025年第3期461-464,共4页
目的:探讨糖尿病性黄斑水肿(DME)患者血清中基质细胞衍生因子-1(SDF-1)和血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)表达水平与病情严重程度的相关性。方法:前瞻性研究。选取本院2020-04/2023-08期间收治的糖尿病视网膜病变患者193例,根据患者是否发... 目的:探讨糖尿病性黄斑水肿(DME)患者血清中基质细胞衍生因子-1(SDF-1)和血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)表达水平与病情严重程度的相关性。方法:前瞻性研究。选取本院2020-04/2023-08期间收治的糖尿病视网膜病变患者193例,根据患者是否发生黄斑水肿及病情严重程度分为DME组128例(其中轻度组56例,中度组44例,重度组28例)和无DME组65例。采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中ANGPTL4和SDF-1水平。采用多因素Logistic回归分析影响DME病情严重程度的因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析DME患者血清中ANGPTL4和SDF-1水平对DME病情严重程度的诊断价值。结果:DME组患者血清中ANGPTL4和SDF-1水平均显著高于无DME组(P<0.01);轻度组、中度组和重度组患者血清中ANGPTL4和SDF-1表达水平依次显著增加(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,血清中ANGPTL4和SDF-1水平是影响DME病情严重程度的危险因素(P<0.01)。血清中SDF-1诊断DME病情严重程度的曲线下面积(AUC)为0.772(95%CI:0.690-0.842),ANGPTL4诊断DME病情严重程度的AUC为0.801(95%CI:0.722-0.867),ANGPTL4和SDF-1联合诊断DME的AUC为0.884(95%CI:0.816-0.934),敏感度为87.50%,特异度为85.71%,显著高于单独ANGPTL4、SDF-1诊断(Z=2.658、2.469,均P<0.05)。结论:DME患者血清中ANGPTL4、SDF-1水平均显著升高,其水平随病情严重程度增加而升高,可作为诊断DME病情严重程度的辅助指标,且联合诊断的效果更佳。 展开更多
关键词 基质细胞衍生因子-1(sdf-1) 血管生成素样蛋白4(ANGPTL4) 糖尿病性黄斑水肿 病情
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从肿瘤微环境CAF调控肿瘤干细胞Wnt/β-catenin和SDF-1/CXCR4双通路探讨固本清源方延缓前列腺癌恩扎卢胺耐药机制
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作者 陈浩然 朱旭东 +3 位作者 王家政 陈亚飞 王艺林 刘浩 《中华中医药杂志》 北大核心 2025年第5期2527-2532,共6页
目的:探讨固本清源方延缓前列腺癌恩扎卢胺耐药作用及其机制。方法:建立恩扎卢胺耐药荷瘤小鼠模型,观察固本清源方联合恩扎卢胺对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响。免疫荧光检测荷瘤小鼠肿瘤组织中癌相关成纤维细胞(CAF)及干细胞标志物CD133、C... 目的:探讨固本清源方延缓前列腺癌恩扎卢胺耐药作用及其机制。方法:建立恩扎卢胺耐药荷瘤小鼠模型,观察固本清源方联合恩扎卢胺对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响。免疫荧光检测荷瘤小鼠肿瘤组织中癌相关成纤维细胞(CAF)及干细胞标志物CD133、CD44的表达。免疫荧光及ELISA检测固本清源方对CAF活化及其分泌无翅/集成基因(Wnt)、基质细胞衍生因子-1(SDF-1)能力的影响。建立CAF与前列腺癌干细胞共培养体系,观察固本清源方联合恩扎卢胺干预对接种CAF与前列腺癌干细胞荷瘤小鼠肿瘤生长的影响,采用Real-time PCR、Western Blot检测肿瘤组织中Wnt3a、SDF-1、β-连环蛋白(β-catenin)、趋化因子受体4(CXCR4)mRNA、蛋白表达。结果:与C4-2B细胞组比较,耐药小鼠肿瘤组织中FAP、α-SMA及CD133、CD44高表达,固本清源方能抑制上述标志物表达。体外实验显示,固本清源方不仅能抑制CAF活化,还能抑制其分泌Wnt3a、SDF-1。接种CAF-前列腺癌干细胞荷瘤小鼠肿瘤重较前列腺癌干细胞荷瘤小鼠显著增加(P<0.01),而高、中、低固本清源方联合恩扎卢胺组的抑瘤率分别为45.83%、38.54%、21.03%,中、高剂量组瘤重显著低于恩扎卢胺组(P<0.01),中、高固本清源方联合恩扎卢胺组较恩扎卢胺组显著下调肿瘤组织中Wnt3a、SDF-1、β-catenin、CXCR4 mRNA和蛋白表达(P<0.01,P<0.05)。结论:固本清源方联合恩扎卢胺延缓恩扎卢胺耐药,可能通过抑制CAF调控的前列腺癌干细胞Wnt/β-catenin和SDF-1/CXCR4通路发挥作用。 展开更多
关键词 去势抵抗性前列腺癌 固本清源方 恩扎卢胺 癌相关成纤维细胞 前列腺癌干细胞 WNT/Β-CATENIN通路 sdf-1/CXCR4通路 耐药
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腺病毒介导SDF-1/NELL-1双基因转染ADSCs复合Nano-n HA支架对犬下颌骨缺损修复的实验研究 被引量:1
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作者 郭延伟 张广德 杨世茂 《口腔颌面修复学杂志》 2025年第1期33-41,共9页
目的:构建腺病毒介导的基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)和尼尔样-1型分子(Nell-like molecule-l,Nell-1)双基因转染犬ADSCs复合Nano-n HA支架,观察其对犬下颌骨缺损的修复作用。方法:构建携SDF-1及NELL-1目的... 目的:构建腺病毒介导的基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)和尼尔样-1型分子(Nell-like molecule-l,Nell-1)双基因转染犬ADSCs复合Nano-n HA支架,观察其对犬下颌骨缺损的修复作用。方法:构建携SDF-1及NELL-1目的基因片段的腺病毒表达载体,分组转染犬ADSCs后行体外成骨分化诱导,ELISA法检测目的基因转染ADSCs后结合支架体内外生长各期目的蛋白表达。20只比格犬随机分为5组,A组为空白组(无支架置入),B组为单纯支架组,C组为SDF-1/Nano-n HA组,D组为Nell-1/Nano-n HA组,E组为SDF-1/Nell-1/Nano-n HA组。CM-Dil细胞标记后构建ADSCs-Nano-n HA支架骨组织工程复合体,制备犬双侧下颌骨缺损模型,将不同细胞支架复合体分组植入下颌骨缺损区。术后第4、8、12周取材行大体观察、CT、扫描电镜、细胞示踪实验及组织学检测,比较各组缺损区新骨形成情况,行统计学分析。结果:ADSCs传代培养及成骨诱导分化状态良好,荧光显微镜下观察SDF-1、Nell-1及SDF-1/Nell-1重组腺病毒均能稳定转染ADSCs,各组目的蛋白表达体内外实验表达有显著性差异。通过大体观察及X线、CT扫描、ECM检测发现转染组骨缺损区新骨形成情况优于未转染组,且共转染组成骨速度及质量优于其他各组。组织学染色可见转染组新骨形成及血管生成情况均优于未转染组,且共转染组新生骨小梁面积及骨成熟度均优于其他各组。结论:SDF-1、Nell-1均可转染ADSCs并可稳定表达,目的基因转染ADSCs复合Nano-n HA支架后可显著促进下颌骨缺损的成骨修复,为组织工程修复成骨提供了新路径。 展开更多
关键词 基质细胞衍生因子-1 尼尔样-1型分子 脂肪干细胞 下颌骨缺损 成骨
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灯盏花素调控SDF-1α/CXCR4通路改善缺血性脑梗死神经血管单元的机制研究
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作者 李亚楠 王俊英 +3 位作者 王敏 叶秋娅 张丽霞 房娉平 《南昌大学学报(医学版)》 2025年第2期23-28,共6页
目的探究灯盏花素调控SDF-1α/CXCR4通路对缺血性脑梗死(ICI)模型大鼠神经血管单元(NVU)的影响。方法将30只大鼠分为假手术组、ICI组与ICI+灯盏花素组,每组10只,将缺血线栓插入ICI组和ICI+灯盏花素组颈总动脉建立ICI大鼠模型。ICI+灯盏... 目的探究灯盏花素调控SDF-1α/CXCR4通路对缺血性脑梗死(ICI)模型大鼠神经血管单元(NVU)的影响。方法将30只大鼠分为假手术组、ICI组与ICI+灯盏花素组,每组10只,将缺血线栓插入ICI组和ICI+灯盏花素组颈总动脉建立ICI大鼠模型。ICI+灯盏花素组在造模后次日开始腹腔注射灯盏花素(10 mg·kg^(-1)),连续4周,其余2组同时注射等体积生理盐水。观察大脑形态,H&E染色检测脑组织病理变化;免疫荧光染色检测脑组织CD31、GFAP及MAP-2表达水平;EdU染色检测细胞增殖水平;蛋白免疫印迹检测脑组织SDF-1α、CXCR4蛋白表达水平;RT-qPCR检测脑组织SDF-1α、CXCR4 mRNA表达水平。结果与假手术组比较,ICI组大鼠缺血侧大脑萎缩变小,脑组织结构破坏、大片坏死,呈高度疏松筛网状结构;与ICI组比较,灯盏花素+ICI组大鼠缺血侧大脑萎缩程度减少,脑组织坏死区域减少,疏松筛网状结构改善。假手术组大鼠脑组织中NVU边界清晰可见,CD31^(+)、MAP-2^(+)、GFAP+细胞排列有序;与假手术组比较,ICI组大鼠NVU明显紊乱,CD31、GFAP及MAP-2表达减少,且彼此之间相对位置紊乱、松散,大鼠脑组织中神经新生标志蛋白DCX、NeuroD1表达减少,EdU阳性细胞数量减少,脑组织SDF-1α、CXCR4蛋白及mRNA表达水平降低(P<0.05);与ICI组比较,灯盏花素+ICI组大鼠NVU紊乱程度改善,CD31、GFAP及MAP-2表达增加,且彼此之间相对位置紊乱、松散程度降低,DCX、NeuroD1以及CD31表达增加,EdU阳性细胞数量增加,脑组织SDF-1α、CXCR4蛋白及mRNA表达水平上升(P<0.05)。结论灯盏花素可改善ICI大鼠NVU损伤,该作用可能与SDF-1/CXCR4通路激活相关。 展开更多
关键词 缺血性脑梗死 灯盏花素 sdf-1α/CXCR4通路 神经血管单元 动物 实验 大鼠
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从Wnt/β-catenin通路及SDF-1/CXCR4通路探讨癌相关成纤维细胞调控前列腺癌干细胞机制
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作者 陈浩然 朱旭东 +3 位作者 王家政 陈亚飞 王艺林 刘浩 《中华男科学杂志》 2025年第10期867-873,共7页
目的探讨肿瘤微环境中癌相关成纤维细胞(CAF)调控前列腺癌干细胞关键通路作用机制。方法建立CAF与前列腺癌干细胞体外共培养体系,观察CAF对前列腺癌干细胞增殖以及体外成球的影响。采用Wnt抑制剂DKK-1及SDF-1中和抗体(MAB310)处理后的CA... 目的探讨肿瘤微环境中癌相关成纤维细胞(CAF)调控前列腺癌干细胞关键通路作用机制。方法建立CAF与前列腺癌干细胞体外共培养体系,观察CAF对前列腺癌干细胞增殖以及体外成球的影响。采用Wnt抑制剂DKK-1及SDF-1中和抗体(MAB310)处理后的CAF条件培养基干预前列腺癌干细胞;采用Western印迹检测前列腺癌干细胞中β-catenin、CXCR4、CD133、CD44的表达;PCR检测前列腺癌干细胞中β-catenin、CXCR4、TCF、LEF的mRNA表达;TOPflash/FOPflash双荧光素酶报告基因检测SDF-1对前列腺癌干细胞Wnt/β-catenin信号通路活性的影响。结果ELISA法检测CAF上清液中Wnt3a、SDF-1分泌量显著高于WPMY-1细胞(P<0.05)。前列腺癌干细胞与CAF按1∶6比例融合培养的吸光度值显著高于单纯前列腺癌干细胞组(P<0.01),且CAF能促进前列腺癌干细胞体外成球(P<0.05)。Western印迹结果显示,CAF-CM能显著提高前列腺癌干细胞中β-catenin、CXCR4、CD133、CD44(P<0.01)的相对表达量。与CAF-CM相比,CAFanti-Wnt-CM能显著降低前列腺癌干细胞中β-catenin、CD133、CD44的相对表达量(P<0.01),而CAFanti-SDF-1-CM能同时显著抑制CXCR4、β-catenin、CD133、CD44的相对表达量(P<0.01)。PCR结果显示CAFanti-SDF-1-CM不仅能抑制β-catenin、CXCR4的相对表达量,还能抑制Wnt通路主要下游效应器TCF、LEF的mRNA相对表达量(P<0.01)。双荧光素酶报告基因分析结果显示CAFanti-SDF-1-CM组前列腺癌干细胞中荧光素酶活性相对值显著低于CAF-CM组(P<0.05)。结论CAF通过Wnt/β-catenin通路及SDF-1/CXCR4通路调控前列腺癌干细胞的干性,CXCR4可能通过激活β-catenin从而增强干性维持的作用。 展开更多
关键词 前列腺癌 癌相关成纤维细胞 前列腺癌干细胞 WNT/Β-CATENIN通路 sdf-1/CXCR4通路
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龙胆苦苷调节SDF-1/CXCR4信号通路对人骨髓间充质干细胞成骨分化的影响
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作者 王瑞芳 杨迎春 +1 位作者 乔海兵 杨莹 《细胞与分子免疫学杂志》 北大核心 2025年第9期784-789,共6页
目的探究龙胆苦苷对人骨髓间充质干细胞(BMSC)成骨分化的影响,分析其机制是否与基质细胞衍生因子1(SDF-1)/C-X-C型趋化因子受体4(CXCR4)通路有关。方法将BMSC分为正常培养的对照组、成骨诱导的模型组以及低剂量龙胆苦苷(L-龙胆苦苷,10μ... 目的探究龙胆苦苷对人骨髓间充质干细胞(BMSC)成骨分化的影响,分析其机制是否与基质细胞衍生因子1(SDF-1)/C-X-C型趋化因子受体4(CXCR4)通路有关。方法将BMSC分为正常培养的对照组、成骨诱导的模型组以及低剂量龙胆苦苷(L-龙胆苦苷,10μmol/L)组、中剂量龙胆苦苷(M-龙胆苦苷,20μmol/L)组、高剂量龙胆苦苷(H-龙胆苦苷,40μmol/L)组、H-龙胆苦苷联合SDF-1/CXCR4通路抑制剂(AMD3100)(H-龙胆苦苷联合AMD3100,40μmol/L龙胆苦苷联合10μg/mL AMD3100)组。CCK-8试剂盒、流式细胞术、ALP染色、茜素红染色以及Western blot法分别检测细胞活性、细胞凋亡、ALP活性、矿化结节以及SDF-1/CXCR4通路相关蛋白水平。结果对照组和模型组均未见矿化结节,但模型组颜色加深;模型组较对照组吸光度(A)值、ALP活性、Runt相关转录因子2(RUNX2)、骨桥蛋白(OPN)、SDF-1、CXCR4蛋白表达增加,凋亡率降低;与模型组相比,L-龙胆苦苷组、M-龙胆苦苷组、H-龙胆苦苷组A值、ALP活性、矿化结节、RUNX2、OPN、SDF-1、CXCR4蛋白表达依次增加,凋亡率依次降低;H-龙胆苦苷联合AMD3100组较H-龙胆苦苷组A值、ALP活性、矿化结节、RUNX2、OPN、SDF-1、CXCR4蛋白表达降低,凋亡率增加。结论龙胆苦苷对BMSC成骨分化的促进作用可能是通过激活SDF-1/CXCR4信号通路实现。 展开更多
关键词 人骨髓间充质干细胞 龙胆苦苷 sdf-1/CXCR4通路 成骨分化
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血清SDF-1、sRAGE水平对老年2型糖尿病合并肺炎患者预后的预测价值
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作者 郭娟娟 韩捷 张丽玲 《分子诊断与治疗杂志》 2025年第10期1903-1906,共4页
目的探讨分析血清基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、可溶性晚期糖基化终产物受体(sRAGE)水平对老年2型糖尿病(T2DM)合并肺炎患者预后的预测价值。方法回顾选取2024年1月至2024年12月长治医学院附属和平医院收治的211例老年T2DM肺炎患者为研... 目的探讨分析血清基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、可溶性晚期糖基化终产物受体(sRAGE)水平对老年2型糖尿病(T2DM)合并肺炎患者预后的预测价值。方法回顾选取2024年1月至2024年12月长治医学院附属和平医院收治的211例老年T2DM肺炎患者为研究对象,按照纳排标准剔除病例11例,最终纳入病例200例,根据其28天病死情况分为预后不良组44例及预后良好组156例。比较两组临床特征及血清SDF-1、sRAGE水平,多因素Logistics回归分析影响老年T2DM合并肺炎患者预后不良的相关因素,采用ROC曲线分析血清SDF-1、sRAGE对老年T2DM合并肺炎患者预后不良的预测价值。结果预后不良组检出多重耐药菌、院前使用抗菌药物比率以及年龄、白蛋白、入院时炎症浸润肺叶数均高于预后良好组(P<0.05);预后不良组血清SDF-1、sRAGE水平均高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05);Logistics回归分析显示检出多重耐药菌、入院时炎症浸润肺叶数及血清SDF-1、sRAGE水平偏高均是影响T2DM肺炎患者预后不良的独立危险因素,白蛋白偏高为其独立保护因素(P<0.05);ROC曲线显示SDF-1、sRAGE联合预测老年T2DM合并肺炎患者预后不良的的曲线下面积为0.909,敏感度为79.5%,特异度为94.9%,均高于单一检测(P<0.05)。结论老年T2DM合并肺炎患者预后不良与年龄、白蛋白、检出多重耐药菌、入院时炎症浸润肺叶数及血清SDF-1、sRAGE水平偏高相关,SDF-1和sRAGE的联合检测可提高对老年T2DM肺炎患者预后不良的预测价值。 展开更多
关键词 基质细胞衍生因子-1 可溶性晚期糖基化终产物受体 老年2型糖尿病 肺炎 预后
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SDF-1/CXCR4信号轴诱导内源性干细胞归巢和迁移促进椎间盘原位修复的研究进展
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作者 应金威 徐国庭 +4 位作者 丁朝晖 梁琦顺 袁宗杰 文天用 阮狄克 《中国脊柱脊髓杂志》 北大核心 2025年第7期774-778,共5页
腰痛(low back pain,LBP)与椎间盘退变(intervertebral disc degeneration,IDD)密切相关,严重影响患者生活质量并带来经济负担[1]。椎间盘的代谢稳态在年龄增长和外界损伤下逐渐破坏,导致椎间盘结构和生物力学性质变化[2]。目前,传统治... 腰痛(low back pain,LBP)与椎间盘退变(intervertebral disc degeneration,IDD)密切相关,严重影响患者生活质量并带来经济负担[1]。椎间盘的代谢稳态在年龄增长和外界损伤下逐渐破坏,导致椎间盘结构和生物力学性质变化[2]。目前,传统治疗难以根治IDD,间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在椎间盘再生中的应用前景广阔,但仍面临细胞获取困难、处理技术复杂、成本高昂及移植效果不确定等问题[3、4]。 展开更多
关键词 椎间盘原位修复 sdf-1CXCR4信号轴 归巢 内源性干细胞
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肺腺癌中SDF-1、CXCR4及CXCR7的表达及其与肿瘤分期的关系
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作者 尹义平 曾宪聪 《湖北医药学院学报》 2025年第4期394-399,F0003,共7页
目的:探讨基质细胞衍生因子(stromal cell-derived factor 1,SDF-1)及其受体CXCR4、CXCR7在肺腺癌组织中的表达及其与肿瘤分期的关系。方法:收集46例肺腺癌组织及癌旁组织,Western Blot法检测SDF-1、CX-CR4、CXCR7蛋白的表达;体外培养A... 目的:探讨基质细胞衍生因子(stromal cell-derived factor 1,SDF-1)及其受体CXCR4、CXCR7在肺腺癌组织中的表达及其与肿瘤分期的关系。方法:收集46例肺腺癌组织及癌旁组织,Western Blot法检测SDF-1、CX-CR4、CXCR7蛋白的表达;体外培养A549细胞,分别加入SDF-1及其受体拮抗剂Plerixafor(CXCR4)、CCX733(CX-CR7),采用CCK-8法和RTCA检测细胞增殖能力。结果:SDF-1、CXCR4、CXCR7在晚期肺腺癌组织中的表达显著高于癌旁组织(P<0.05);SDF-1可促进A549细胞增殖,而Plerixafor和CCX733可抑制该效应(P<0.05)。结论:SDF-1/CXCR4/CXCR7轴可能通过促进肿瘤增殖参与肺腺癌进展,其表达水平与临床分期相关,或可作为潜在治疗靶点。 展开更多
关键词 sdf-1 CXCR4 CXCR7 肺腺癌组织 A549细胞
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6-姜烯酚介导SDF-1α/CXCR7通路增强人结肠癌耐药细胞株SW620/5-Fu化疗敏感性
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作者 赵晓华 国华 《河北医药》 2025年第6期908-913,共6页
目的探究6-姜烯酚对结肠癌耐药细胞株SW620/5-Fu对5-Fu化疗敏感性的影响及其机制。方法构建SW620/5-Fu耐药细胞株,梯度浓度(0、5、10、20、40、80μmol/L)6-姜烯酚处理SW620/5-Fu耐药细胞,CCK-8实验用于检测细胞存活率,验证5-Fu的IC50... 目的探究6-姜烯酚对结肠癌耐药细胞株SW620/5-Fu对5-Fu化疗敏感性的影响及其机制。方法构建SW620/5-Fu耐药细胞株,梯度浓度(0、5、10、20、40、80μmol/L)6-姜烯酚处理SW620/5-Fu耐药细胞,CCK-8实验用于检测细胞存活率,验证5-Fu的IC50值。通过流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡水平。蛋白质免疫印迹法检测衰老相关因子(p21和p53)的表达;qRT-PCR检测衰老相关分泌表型标志物(IL-6、IL-8)的表达。建立裸鼠异种移植模型,验证6-姜烯酚在体内的抗肿瘤作用效果,免疫组织化学分析衰老相关因子(p21和p53)、Ki67和cleaved-Caspase 3的表达。结果与对照组比较,6-姜烯酚处理可以提高SW620/5-Fu细胞对5-Fu的敏感性。6-姜烯酚处理可以提高在G0/G1期细胞的比例(P<0.05),并诱导细胞凋亡。6-姜烯酚处理可以降低细胞衰老水平,并减少衰老相关因子(p21和p53)的表达以及衰老相关分泌表型标志物(IL-6和IL-8)的表达水平(P<0.05)。此外,6-姜烯酚可以抑制SW620/5-Fu细胞中SDF-1α和CXCR7的表达(P<0.05)。体内实验结果显示,6-姜烯酚治疗可以抑制裸鼠体内肿瘤的生长。结论6-姜烯酚通过负调控SDF-1α/CXCR7信号转导抑制SW620/5-Fu细胞衰老介导的5-Fu化疗耐药性。本研究为提高结肠癌5-Fu治疗疗效提供了有希望的治疗策略。 展开更多
关键词 6-姜烯酚 sdf-1α/CXCR7通路 结肠癌 5-FU 化疗敏感性
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房水Sema3A、Klotho、SDF-1与增生型糖尿病视网膜病变患者术后新生血管性青光眼的关系研究 被引量:6
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作者 曾春梅 邓斌 +2 位作者 白莹 李颖媛 梁光丽 《现代生物医学进展》 CAS 2024年第12期2356-2360,共5页
目的:探讨房水信号素3A(Sema3A)、克洛索(Klotho)、基质细胞衍生因子-1(SDF-1)与增生型糖尿病视网膜病变(PDR)患者术后新生血管性青光眼(NVG)的关系。方法:选取2021年1月~2022年1月成都市第六人民医院收治的145例接受玻璃体切割术PDR患... 目的:探讨房水信号素3A(Sema3A)、克洛索(Klotho)、基质细胞衍生因子-1(SDF-1)与增生型糖尿病视网膜病变(PDR)患者术后新生血管性青光眼(NVG)的关系。方法:选取2021年1月~2022年1月成都市第六人民医院收治的145例接受玻璃体切割术PDR患者,根据术后1年是否发生NVG分为NVG组和非NVG组。酶联免疫吸附法检测房水Sema3A、Klotho、SDF-1水平。采用多因素Logistic回归分析影响PDR患者术后NVG的因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析房水Sema3A、Klotho、SDF-1对PDR患者术后NVG的预测价值。结果:PDR患者随访1年,术后NVG发生率为17.24%。与非NVG组比较,NVG组房水Sema3A、SDF-1水平升高,Klotho水平降低(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,术前虹膜新生血管和Sema3A、SDF-1升高为影响PDR患者术后NVG的独立危险因素,Klotho升高为独立保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,房水Sema3A、Klotho、SDF-1联合预测PDR患者术后NVG的曲线下面积(AUC)为0.913,大于房水Sema3A、Klotho、SDF-1单独预测的0.796、0.794、0.800。结论:房水Sema3A、SDF-1升高和Klotho降低与PDR患者术后NVG发生密切相关,房水Sema3A、Klotho、SDF-1联合检测对PDR患者术后NVG具有较高的预测价值。 展开更多
关键词 增生型糖尿病视网膜病变 SEMA3A KLOTHO sdf-1 新生血管性青光眼
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糖尿病视网膜病变患者SDF-1、HO-1及MDA水平变化及与IL-6、TNF-α、CRP的相关性 被引量:6
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作者 赵玉杰 王敏 +3 位作者 刘钰凤 刘学晶 钟胜楠 李莹 《分子诊断与治疗杂志》 2024年第3期539-542,552,共5页
目的 分析糖尿病视网膜病变(DR)患者基质细胞衍生因子(SDF-1)、血红素加氧酶-1(HO-1)及丙二醛(MDA)水平变化及与白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)的相关性。方法 选取2020年5月至2023年1月解放军总医院收治的131... 目的 分析糖尿病视网膜病变(DR)患者基质细胞衍生因子(SDF-1)、血红素加氧酶-1(HO-1)及丙二醛(MDA)水平变化及与白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)的相关性。方法 选取2020年5月至2023年1月解放军总医院收治的131例DR患者为DR组,另选取同期在本院住院的2型糖尿病患者100例为非DR组。比较两组SDF-1、HO-1、MDA水平;比较两组IL-6、TNF-α、CRP水平;比较不同分期DR患者SDF-1、HO-1、MDA水平;采用Logistic回归分析影响DR发生的相关因素,分析DR组患者SDF-1、HO-1、MDA水平与IL-6、TNF-α、CRP的相关性。结果 DR组SDF-1、HO-1水平比非DR组低,MDA水平比非DR组高,差异有统计学意义(P<0.05);DR组IL-6、TNF-α、CRP水平均比非DR组高,差异有统计学意义(P<0.05);SDF-1、HO-1水平:Ⅰ~Ⅱ期>Ⅲ~Ⅳ期>Ⅴ~Ⅵ期,MDA水平:Ⅰ~Ⅱ期<Ⅲ~Ⅳ期<Ⅴ~Ⅵ期,差异有统计学意义(P<0.05);经Logistic多因素分析显示,性别为女、BMI≥24 km/m2、合并患有高血压、高血脂、IL-6>1.17 mg/mL、TNF-α>30 ng/L、CRP>10 ng/mL、SDF-1>2 ng/mL、HO-1<125 ng/mL、MDA>4.06μmol/mL均是影响DR发生的独立危险因素(P<0.05);血清炎性因子IL-6、TNF-α、CRP与SDF-1、HO-1呈负相关,与MDA呈正相关,且均为中度相关(P<0.05)。结论 SDF-1、HO-1、MDA、IL-6、CRP、TNF-α水平与DR的发生、发展有一定关系,通过检测上述指标水平可为进一步探讨DR的发病机制和治疗方法提供新的思路。 展开更多
关键词 糖尿病视网膜病变 sdf-1 HO-1 MDA IL-6 CRP TNF-α
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加味百合地黄汤通过调控SDF-1/CXCR4轴对围绝经期抑郁症大鼠下丘脑炎性损伤的改善作用 被引量:7
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作者 刘洋 李翎熙 +3 位作者 周密 吴敏学 王宇红 赵洪庆 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期250-255,共6页
目的探究加味百合地黄汤对围绝经期抑郁症(PDD)大鼠下丘脑神经炎性损伤的作用。方法大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组(氟哌噻吨美利曲辛片,1.89 mg/kg)和加味百合地黄汤高、中、低剂量组(16.2、8.1、4.05 g/kg),每组10只,除正常组... 目的探究加味百合地黄汤对围绝经期抑郁症(PDD)大鼠下丘脑神经炎性损伤的作用。方法大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组(氟哌噻吨美利曲辛片,1.89 mg/kg)和加味百合地黄汤高、中、低剂量组(16.2、8.1、4.05 g/kg),每组10只,除正常组外,其余各组均通过卵巢摘除(OVX)联合慢性不可预见性应激(CUS)建立PDD模型,给予相应剂量药物干预21 d。采用糖水偏好实验和旷场实验评价抑郁样行为,酶联免疫吸附法检测脑脊液炎症因子水平,HE染色观察下丘脑组织结构变化,免疫荧光染色、RT-qPCR、Western blot检测小胶质细胞Iba-1及SDF-1/CXCR4轴相关因子的表达。结果与模型组比较,加味百合地黄汤高剂量组抑郁样行为改善(P<0.01);下丘脑胞体肿胀、间隙增加、炎性浸润等病理损伤缓解;脑脊液中促炎因子IL-1β、IL-6水平降低(P<0.05),抗炎因子IL-4、IL-10、IGF-1水平升高(P<0.01),Iba-1、SDF-1、CXCR4表达降低(P<0.05),PSD-95、BDNF、NGF表达升高(P<0.05)。结论加味百合地黄汤抗PDD的作用可能与其抑制SDF-1/CXCR4轴进而改善下丘脑神经炎性损伤有关。 展开更多
关键词 加味百合地黄汤 围绝经期抑郁症(PDD) sdf-1/CXCR4轴 小胶质细胞 下丘脑 脑脊液
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基于SDF-1/CXCR4信号通路探讨醒脑静注射液联合尼莫地平促进高血压脑出血患者神经功能恢复的作用研究 被引量:2
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作者 褚秀丽 张琳 +2 位作者 丁军 曹合利 徐晨 《现代生物医学进展》 CAS 2024年第22期4224-4226,4239,共4页
目的:基于基质细胞衍生因子-1(SDF-1)/CXC趋化因子受体4(CXCR4)信号通路,探讨醒脑静注射液联合尼莫地平促进高血压脑出血(HICH)患者神经功能恢复的作用。方法:采用随机数字表法将132例HICH患者分为对照组(接受尼莫地平治疗,66例)和研究... 目的:基于基质细胞衍生因子-1(SDF-1)/CXC趋化因子受体4(CXCR4)信号通路,探讨醒脑静注射液联合尼莫地平促进高血压脑出血(HICH)患者神经功能恢复的作用。方法:采用随机数字表法将132例HICH患者分为对照组(接受尼莫地平治疗,66例)和研究组(对照组基础上接受醒脑静注射液治疗,66例)。对比两组血清神经细胞因子指标、血清SDF-1、CXCR4水平、脑卒中患者生活质量疾病专用量表(SIS)评分、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、改良Rankin量表(mRS)评分的变化情况。结果:治疗14 d后,两组血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)、髓鞘碱性蛋白(MBP)、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、SDF-1、CXCR4水平均下降,且研究组下降更为明显(P<0.05)。治疗3个月后,两组NIHSS、mRS评分均下降,且研究组改善幅度更大(P<0.05);两组SIS各维度评分均升高,且研究组改善幅度更大(P<0.05)。结论:醒脑静注射液联合尼莫地平可显著改善HICH患者预后,促进神经功能恢复,其作用机制可能与调控SDF-1/CXCR4信号通路有关。 展开更多
关键词 高血压脑出血 sdf-1/CXCR4信号通路 醒脑静注射液 尼莫地平 神经功能
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血清8-OHdG、SDF-1在新生儿呼吸窘迫综合征患儿中的表达及临床意义
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作者 杨利君 孙绪娥 陈婷婷 《中国临床新医学》 2025年第7期793-797,共5页
目的探讨血清8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)、基质细胞衍生因子-1(SDF-1)在新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)患儿中的表达及临床意义。方法招募2021年7月至2024年5月商洛市中心医院收治的NRDS患儿108例(NRDS组)和同期正常新生儿52名(对照组)。NRDS... 目的探讨血清8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)、基质细胞衍生因子-1(SDF-1)在新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)患儿中的表达及临床意义。方法招募2021年7月至2024年5月商洛市中心医院收治的NRDS患儿108例(NRDS组)和同期正常新生儿52名(对照组)。NRDS患儿根据病情分为轻度NRDS组(22例)、中度NRDS组(50例)和重度NRDS组(36例)。采用酶联免疫吸附试验法检测血清8-OHdG、SDF-1水平。采用Cox回归分析NRDS患儿预后的影响因素。通过受试者工作特征(ROC)曲线分析8-OHdG、SDF-1水平对NRDS患儿死亡的预测效能。结果NRDS组8-OHdG水平高于对照组[(13.81±3.90)ng/mL vs(3.70±1.47)ng/mL],SDF-1水平高于对照组[(12.46±1.62)ng/mL vs(8.23±1.32)ng/mL],差异有统计学意义(P<0.05)。轻度NRDS组、中度NRDS组、重度NRDS组8-OHdG、SDF-1水平依次升高(P<0.05)。108例NRDS患儿入院后28 d内死亡率为25.00%(27/108)。多因素Cox回归分析结果显示,重度NRDS以及较高的8-OHdG、SDF-1水平是NRDS患儿发生死亡的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,8-OHdG、SDF-1水平均有助于预测NRDS患儿死亡(P<0.05),两者联合的预测效能[AUC(95%CI)=0.925(0.859~0.967)]较单一指标更高(P<0.05),灵敏度为92.59%,特异度为77.78%。结论血清8-OHdG、SDF-1水平升高与NRDS患儿病情分度及死亡风险增加密切相关,两者联合预测NRDS患儿预后的效能较单一指标高。 展开更多
关键词 新生儿呼吸窘迫综合征 8-羟基脱氧鸟苷 基质细胞衍生因子-1 病情分度 预后
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“脾肾相关”治法SDF-1/CXCR4通路对BMSCs成肌、MDSCs成骨分化的影响 被引量:1
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作者 付夜平 杨芳 +3 位作者 孙鑫 刘洋 邸贵鑫 安勇 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1255-1260,1274,共7页
目的探究SDF-1/CXCR4通路在补肾健脾法干预下对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成肌、肌源性干细胞(MDSCs)成骨分化的影响。方法正常、诱导(正常血清加相应成骨、成肌诱导液)、补肾阴、补肾阳、健脾、补肾健脾血清干预BMSCs成肌、MDSCs成骨分... 目的探究SDF-1/CXCR4通路在补肾健脾法干预下对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成肌、肌源性干细胞(MDSCs)成骨分化的影响。方法正常、诱导(正常血清加相应成骨、成肌诱导液)、补肾阴、补肾阳、健脾、补肾健脾血清干预BMSCs成肌、MDSCs成骨分化培养15 d后取材。免疫荧光鉴定Desmin表达,Image J分析细胞平均荧光强度;茜素红染色观察成骨分化矿化结节;酶联免疫吸附法(ELISA)检测Myosin、BMP2、以及SDF-1、CXCR4蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time qPCR)检测细胞SDF-1、CXCR4 mRNA表达。结果与正常组相比,BMSCs成肌分化中,Myosin蛋白水平降低(P<0.05)、诱导组Desmin表达升高(P<0.01)、SDF-1、CXCR4蛋白及mRNA表达升高;MDSCs成骨分化中,诱导组出现较小面积的矿化结节,BMP2蛋白表达升高(P<0.05)、SDF-1、CXCR4蛋白及mRNA表达升高。与诱导组相比,BMSCs成肌分化中,用药组Desmin表达升高(P<0.01),Myosin蛋白水平升高(P<0.05)、SDF-1和CXCR4蛋白及mRNA表达水平显著升高;MDSCs成骨分化中,用药组矿化结节数量增多、面积增大,BMP2蛋白水平升高(P<0.05)、SDF-1和CXCR4蛋白及mRNA表达升高。结论补肾健脾中医不同治法可提高SDF-1/CXCR4通路蛋白及mRAN表达从而促进BMSCs成肌、MDSCs成骨分化,补肾健脾法促进作用最为明显。 展开更多
关键词 干细胞 脾肾相关 肌少-骨质疏松症 sdf-1/CXCR4
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