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Preparation and Properties of Aqueous SCNTs Dispersion based on A UV-curable Polymeric Dispersant 被引量:1
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作者 袁妍 WU Haiqiang +3 位作者 LIU Jingcheng LUO Jing LIU Ren LIU Xiaoya 《Journal of Wuhan University of Technology(Materials Science)》 SCIE EI CAS 2018年第2期485-491,共7页
A novel photosensitive copolymer P(SS-co-AA-g-GMA)(PSAG) was synthesized and utilized to noncovalently functionalize pristine single-walled carbon nanotubes(SCNTs). PSAG was highly effective for the solubilizati... A novel photosensitive copolymer P(SS-co-AA-g-GMA)(PSAG) was synthesized and utilized to noncovalently functionalize pristine single-walled carbon nanotubes(SCNTs). PSAG was highly effective for the solubilization of SCNTs in water and validated by UV-vis absorption spectra experiments, resulting in homogeneous and stable PSAG-SCNT aqueous dispersion. The microstructure of SCNTs was observed through Raman spectroscopy and transmission electron microscopy. In addition, compared with the two common polymeric dispersants of Triton X-100 and PSS, PSAG demonstrated more effective performances for dispersing SCNTs under identical conditions. Furthermore, the photosensitive PSAG-SCNTs can be crosslinked after UV irradiation, leading to significant improvement in the water resistance of SCNT films. UV-cured films can be transferred to plastic wrap to form a flexible film with high electrical conductivity. 展开更多
关键词 single-walled carbon nanotubes(scnts) polymeric dispersant UV-curable conductive water resistance
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Setd2 overexpression rescues bivalent gene expression during SCNT-mediated ZGA 被引量:1
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作者 Xiaolei Zhang Ruimin Xu +6 位作者 Yuyan Zhao Yijia Yang Qi Shi Hong Wang Xiaoyu Liu Shaorong Gao Chong Li 《Protein & Cell》 2025年第6期458-477,共20页
Successful cloning through somatic cell nuclear transfer(SCNT)faces significant challenges due to epigenetic obstacles.Recent studies have highlighted the roles of H3K4me3 and H3K27me3 as potential contributors to the... Successful cloning through somatic cell nuclear transfer(SCNT)faces significant challenges due to epigenetic obstacles.Recent studies have highlighted the roles of H3K4me3 and H3K27me3 as potential contributors to these obstacles.However,the underlying mechanisms remain largely unclear.In this study,we generated genome-wide maps of H3K4me3 and H3K27me3 in mouse pre-implantation NT embryos.Our analysis revealed that aberrantly over-represented broad H3K4me3 domain and H3K27me3 signal lead to increased bivalent marks at gene promoters in NT embryos compared with naturally fertilized(NF)embryos at the 2-cell stage,which may link to relatively low levels of H3K36me3 in NT 2-cell embryos.Notably,the overexpression of Setd2,a H3K36me3 methyltransferase,successfully restored multiple epigenetic marks,including H3K36me3,H3K4me3,and H3K27me3.In addition,it reinstated the expression levels of ZGA-related genes by reestablishing H3K36me3 at gene body regions,which excluded H3K27me3 from bivalent promoters,ultimately improving cloning efficiency.These findings highlight the excessive bivalent state at gene promoters as a potent barrier and emphasize the removal of these barriers as a promising approach for achieving higher cloning efficiency. 展开更多
关键词 histone modifications scnt embryo development
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体细胞克隆胚胎发育效率影响因素及其改进措施
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作者 叶鸥颉 董亚铮 +1 位作者 洪林君 李紫聪 《中国畜禽种业》 2025年第10期16-26,共11页
动物体细胞克隆(体细胞核移植)技术克隆技术在复制扩繁优良种畜、保护濒危动物、制备基因修饰动物、治疗人类疾病等方面有着广泛的应用前景,但目前仍存在效率低、技术难度大等问题。该文简要回顾了动物体细胞克隆技术的主要发展历史,对... 动物体细胞克隆(体细胞核移植)技术克隆技术在复制扩繁优良种畜、保护濒危动物、制备基因修饰动物、治疗人类疾病等方面有着广泛的应用前景,但目前仍存在效率低、技术难度大等问题。该文简要回顾了动物体细胞克隆技术的主要发展历史,对动物体细胞克隆的总体操作流程做了简要介绍。随后通过总结现有科研成果,将影响动物体细胞克隆胚胎发育效率的主要因素分为“克隆操作技术复杂精细”、“卵母细胞质量有待提高”及“克隆胚胎表观遗传修饰和基因表达错误”三大层面,并归纳已研发出的解决方案,以使更多人了解该技术,并推动其创新发展与落地应用。 展开更多
关键词 动物 体细胞克隆 胚胎 发育效率
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体细胞核移植技术及应用
4
作者 王维佳 李道全 +8 位作者 刘建雷 尹诗 杨汉文 倪鹏程 张勇峰 杨卫兵 赵善江 李广栋 王志坤 《黑龙江动物繁殖》 2024年第5期25-31,40,共8页
体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)是一种能使已分化的体细胞获得全能性(totipotency)的技术,在发育生物学、生物医学研究和农业应用方面具有重要价值。该技术主要包括卵细胞去核和核供体细胞植入两个环节。文章综述了S... 体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)是一种能使已分化的体细胞获得全能性(totipotency)的技术,在发育生物学、生物医学研究和农业应用方面具有重要价值。该技术主要包括卵细胞去核和核供体细胞植入两个环节。文章综述了SCNT技术的原理、流程、应用等,以期为SCNT技术的研究与应用提供参考依据。 展开更多
关键词 体细胞核移植(scnt) 全能性 克隆 重编程 应用
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猪成纤维细胞细胞周期同期化对核移植胚胎发育的影响 被引量:2
5
作者 吴正三 杨素芳 +3 位作者 陈凌声 陈施蓓 汪彩珠 石德顺 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期1-7,共7页
供体细胞所处的细胞周期及细胞周期同期化的方法对于体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)的成功非常重要,本研究对血清饥饿培养处理与培养至完全汇合后的猪成纤维细胞周期同期化水平进行了检测。利用不同方法对猪成... 供体细胞所处的细胞周期及细胞周期同期化的方法对于体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)的成功非常重要,本研究对血清饥饿培养处理与培养至完全汇合后的猪成纤维细胞周期同期化水平进行了检测。利用不同方法对猪成纤维细胞同期化处理后,通过流式细胞仪对细胞的细胞周期分布比率进行了检测。将细胞进行血清饥饿24~72h,显著地增加了Go/G。期的细胞百分率(92.2%-93.7%VS.77.8%,P〈0.05)。将细胞培养至完全汇合后再培养24-48h,GgG。期的细胞比例类似于血清饥饿法(94.4%,89.6%)。血清饥饿24h后,置换为10%FBS能逆转至生长期。用这两种不同方法处理后的体细胞作为核移植的供体构建重构胚,分裂率与囊胚率差异不显著(P〉0.05)。结果表明,猪成纤维细胞通过血清饥饿法或者培养至汇合完全均能有效地将细胞周期同期化至G0/G1期,且均可作为体细胞核移植的供体细胞。 展开更多
关键词 成纤维细胞 细胞周期同期化 体细胞核移植(scnt) 胚胎发育
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1例死亡克隆牛主要脏器组织学观察及胎盘印记基因甲基化水平分析 被引量:2
6
作者 马馨 张胜 +4 位作者 朱屹然 马盼盼 杨树宝 栾维民 李子义 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第11期16-18,22,I0001,共5页
虽然体细胞克隆技术已经在多种动物获得成功,但是仍然存在效率低、克隆胚胎发育异常等问题,严重限制了该技术的应用。为提高克隆效率,探讨克隆动物发育异常的原因,本研究对1例死亡克隆牛主要内脏器官进行了组织学观察,并对其胎盘印记基... 虽然体细胞克隆技术已经在多种动物获得成功,但是仍然存在效率低、克隆胚胎发育异常等问题,严重限制了该技术的应用。为提高克隆效率,探讨克隆动物发育异常的原因,本研究对1例死亡克隆牛主要内脏器官进行了组织学观察,并对其胎盘印记基因甲基化状态进行分析。结果表明,此例死亡克隆牛主要内脏器官除肾脏外,均不同程度出现充血、增生及淋巴细胞浸润等病理变化。胎盘增生明显并伴有充血,胎盘中印记基因H19及Peg-10的甲基化水平分别为84.6%和88.6%,显著高于50%,出现超甲基化状态。推测体细胞核移植过程影响了供核细胞的表观重编程,导致了印记基因H19及Peg-10的迷乱的DNA甲基化状态,并影响胎盘及内脏器官的正常发育。 展开更多
关键词 scnt 主要内脏器官 印记基因 胎盘
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外源激素组合控制青春期前奶山羊卵泡超数同步发育及其卵母细胞发育潜能的评价(英文) 被引量:1
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作者 沙红英 孙建华 +6 位作者 陈娟 陈建泉 徐旭俊 吴友宾 黄志军 胡大为 成国祥 《分子细胞生物学报》 CSCD 北大核心 2007年第4期245-252,共8页
本研究的目的是探索自青春期前奶山羊获取大量可用于体细胞核移植的卵母细胞的可能性。为此,本研究比较了几种不同组合的激素处理方法(对照、FSH、E2-P4和E2-P4-FSH)对出生39-60日龄的奶山羊卵巢大小、卵泡数量和卵泡大小的影响:同时将... 本研究的目的是探索自青春期前奶山羊获取大量可用于体细胞核移植的卵母细胞的可能性。为此,本研究比较了几种不同组合的激素处理方法(对照、FSH、E2-P4和E2-P4-FSH)对出生39-60日龄的奶山羊卵巢大小、卵泡数量和卵泡大小的影响:同时将出生39-120日龄奶山羊按年龄分成三组来研究年龄对激素处理时招募起始生长卵泡数量的影响:然后,比较了来自E2-P4- FSH和FSH处理的早青春期前奶山羊卵巢上直径大于3mm卵泡中卵母细胞减数分裂能力;最后,通过SCNT方法验证E2-P4-FSH处理的早青春期前奶山羊卵巢上直径大于3mm卵泡中卵母细胞的发育能力。在四组激素处理的早青春期前奶山羊中,E2-P4-FSH处理组的卵巢最大、卵泡(直径大于3 mm)数量最多。在不同的年龄组中,39-60天组奶山羊卵巢上直径大于3mm的卵泡数量显著多于61-90天和91-120天组的。卵母细胞减数分裂能力的分析结果表明,来自E2-P4-FSH处理组的卵母细胞减数分裂能力显著高于FSH处理组的卵母细胞。与E2-P4-FSH处理后的成年奶山羊卵母细胞相比,早青春期前奶山羊卵母细胞发育能力较低:卵母细胞成熟后,作为受体用于体细胞核移植后的克隆囊胚发育率低于成年奶山羊(15.3%versus 22.1%,P<0.01)。然而,早青春期前的奶山羊经E2-P4-FSH处理后,自每头羊卵巢上直径大于3mm的卵泡数显著高于成年奶山羊(108±10.3 versus 28±5.0),因此,每头早青春期前奶山羊产生的克隆囊胚绝对数量显著高于成年奶山羊(7.1±2.7 versus 4.2±1.4)。由此,从本研究可以得出结论:E2-P4-FSH处理的早青春期前奶山羊能够为体细胞核移植研究提供相对多数量的具备一定发育能力的成熟卵。 展开更多
关键词 青春期前奶山羊 E2-P4-FSH处理 成熟卵 scnt胚胎发育能力
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提高哺乳动物克隆效率的研究进展 被引量:4
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作者 许卫华 吴珍芳 石俊松 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第9期2516-2523,共8页
体细胞核移植技术(somatic cell nuclear transfer,SCNT)又称为体细胞克隆技术,在生物医学、遗传修饰动物研究及大家畜的育种和良种扩繁等领域具有重要的理论意义和现实价值,但目前该项技术依然存在如克隆效率低下、克隆动物表型异常等... 体细胞核移植技术(somatic cell nuclear transfer,SCNT)又称为体细胞克隆技术,在生物医学、遗传修饰动物研究及大家畜的育种和良种扩繁等领域具有重要的理论意义和现实价值,但目前该项技术依然存在如克隆效率低下、克隆动物表型异常等问题。近年来,研究人员通过在培养基中添加小分子药物、选择优势供体细胞系(包括iPS细胞)、优化传统核移植参数、对发育关键基因(如XIST及H3K9me3去甲基化酶等)的靶向遗传调控等途径,探索提高克隆效率的新思路、新工艺和新方法,作者着重对上述研究进展进行简要综述。 展开更多
关键词 哺乳动物 体细胞核移植技术(scnt) 克隆效率
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体细胞核移植与iPS细胞研究的对比分析
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作者 罗虎 刘渔凯 李泽桂 《局解手术学杂志》 2010年第5期427-428,共2页
关键词 scnt技术 诱导多能干细胞 IPSC
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Scriptaid在猪体细胞核移植应用的研究进展 被引量:2
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作者 聂骏宇 朱向星 +8 位作者 谢炳坤 马青艳 农素群 许惠艳 杨小淦 陆阳清 卢克焕 廖玉英 卢晟盛 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期94-99,共6页
体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)效率低下严重制约了克隆猪的产出,而在SCNT胚胎中表现出的表观遗传重编程(epigenetic reprogramming)不完全是导致该结果的重要原因。大量的研究表明组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone d... 体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)效率低下严重制约了克隆猪的产出,而在SCNT胚胎中表现出的表观遗传重编程(epigenetic reprogramming)不完全是导致该结果的重要原因。大量的研究表明组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor,HDACi),如Scriptaid(SCR),能够修复克隆胚胎的表观遗传重编程状态,包括提高供体核组蛋白的乙酰化水平、促进重要转录因子的转录活性以及增强染色质重塑等,从而促进SCNT胚胎的发育。本综述在参阅国内外研究成果的基础上对SCR在猪克隆中的应用进行分析和论述,以期为进一步在克隆猪的生产实践中加以应用奠定基础。 展开更多
关键词 scnt 重编程 Scriptaid 组蛋白乙酰化
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胚胎干细胞与雌性生殖细胞互相转化的研究进展 被引量:3
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作者 赵婷婷 钱方波 +5 位作者 熊芳 沈晔 郭凌岑 钱莉 董动丽 李晓燕 《生殖与避孕》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期109-113,共5页
胚胎干细胞是全能性的干细胞,可以向3个胚层的细胞转化;雌性生殖细胞也被认为是一种"干细胞",因为其将遗传信息从一代传至下一代。两者具有相同和不同的特殊标志物,并且可以通过不同的方法互相转化,为"胚胎干细胞-卵母... 胚胎干细胞是全能性的干细胞,可以向3个胚层的细胞转化;雌性生殖细胞也被认为是一种"干细胞",因为其将遗传信息从一代传至下一代。两者具有相同和不同的特殊标志物,并且可以通过不同的方法互相转化,为"胚胎干细胞-卵母细胞环路"提出设想。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 雌性生殖细胞 体细胞核移植(scnt) 孤雌激活(PA)
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BoLA-Ⅰ类基因在牛体细胞克隆胚早期发育中的表达 被引量:1
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作者 王勃 贺晓丽 +3 位作者 王勇胜 王雪娇 张涌 郑月茂 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期103-108,共6页
体外培养成熟的卵母细胞,通过核移植(Nuclear transfer,NT)技术,构建体细胞克隆(Somatic cell nuclear transfer,SCNT)胚胎,以体外受精胚胎作为对照组。收集MⅡ期卵母细胞、2细胞胚胎、4细胞胚胎、8细胞胚胎、16细胞胚胎、桑椹胚和囊胚... 体外培养成熟的卵母细胞,通过核移植(Nuclear transfer,NT)技术,构建体细胞克隆(Somatic cell nuclear transfer,SCNT)胚胎,以体外受精胚胎作为对照组。收集MⅡ期卵母细胞、2细胞胚胎、4细胞胚胎、8细胞胚胎、16细胞胚胎、桑椹胚和囊胚,采用实时荧光定量PCR的方法检测经典BoLA-I基因和非经典BoLA-I基因在MⅡ期卵母细胞及各期胚胎中的相对表达量。结果显示,BoLA-I类基因在在牛MⅡ期卵母细胞中的相对表达量显著高于其在其他各时期胚胎的相对表达量(P<0.05);BoLA-I类基因在牛SCNT胚和IVF胚中相对表达量随胚胎发育的变化趋势类似,随着第1次及随后的卵裂,经典BoLA-I、NC1、NC2基因mRNA的表达下降到极微的水平;NC3、NC4在整个发育阶段均表达很低甚至难以检测到它们表达。结果表明,本试验通过在体外制备及培养SCNT胚胎,初步建立BoLA-I类基因在其的表达模式,为BoLA-I类基因参与母胎免疫机制的研究奠定基础,为进一步寻找评估胚胎质量的标志物提供依据。 展开更多
关键词 BoLA-I 胚胎 scnt QRT-PCR
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转基因克隆牛胎盘中印迹基因PEG10的DNA甲基化水平 被引量:8
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作者 苏建民 许文兵 +3 位作者 李艳艳 王丽君 王勇胜 张涌 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期533-538,共6页
低效率的体细胞核移植技术显著制约着该技术在转基因动物生产上的广泛应用。目前认为供体细胞核不能被受体卵母细胞胞质完全的表观重编程是其效率低下的最主要原因,而DNA甲基化是基因表观修饰的主要方式之一。为了探求转基因克隆牛的死... 低效率的体细胞核移植技术显著制约着该技术在转基因动物生产上的广泛应用。目前认为供体细胞核不能被受体卵母细胞胞质完全的表观重编程是其效率低下的最主要原因,而DNA甲基化是基因表观修饰的主要方式之一。为了探求转基因克隆牛的死亡是否与其胎盘中印迹基因的甲基化的重编程程度相关,文章通过亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite sequencing PCR,BSP)和亚硫酸氢盐联合限制性内切酶分析法(Combined bisulfite restriction analysis,COBRA),对印迹基因PEG10在围产期死亡且存在发育缺陷的转基因克隆牛的胎盘(死亡组)和存活的转基因克隆牛的胎盘(存活组)与正常对照牛胎盘(对照组)的DNA甲基化水平进行了详细的比较。结果发现,与对照组相比,PEG10基因在死亡组上表现出异常的超甲基化水平,而存活组与对照组相比无显著性差异。研究结果显示,胎盘中印迹基因的DNA甲基化表观重编程不彻底可能是导致转基因克隆牛发育异常进而死亡的主要原因之一。 展开更多
关键词 DNA甲基化 PEG10 体细胞核移植 转基因克隆牛
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PEG11基因在体细胞核移植牛中印迹和DNA甲基化状态分析 被引量:5
14
作者 张明月 杨文志 +6 位作者 石运娇 张萃 陈玮娜 崔亚丽 张巍巍 李宁 李世杰 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期2154-2159,共6页
为了分析PEG11基因在体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)牛中的印记以及重编程状态,本研究应用RT-PCR产物直接测序法对PEG11基因在自然繁殖牛和新生死亡SCNT牛7个组织(心、肝、脾、肺、肾、肌肉和脂肪)中的表达进行了分... 为了分析PEG11基因在体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)牛中的印记以及重编程状态,本研究应用RT-PCR产物直接测序法对PEG11基因在自然繁殖牛和新生死亡SCNT牛7个组织(心、肝、脾、肺、肾、肌肉和脂肪)中的表达进行了分析。结果发现PEG11基因在自然繁殖牛的7个组织中均为单等位基因表达,表明PEG11基因在牛中是印记的;在SCNT牛肺脏中PEG11基因为双等位基因表达,而在其余6个组织中为单等位基因表达。进而用亚硫酸氢盐测序法分析自然繁殖牛和SCNT牛肺脏PEG11基因中54CpGs位点的甲基化状态,发现PEG11基因在SCNT牛肺脏中呈现与自然繁殖牛相似的高甲基化状态(97.26%),推测PEG11基因在新生死亡SCNT牛肺脏中印记紊乱可能是导致SCNT牛肺脏发育缺陷的原因之一,PEG11基因内部CGIs的甲基化不参与调控PEG11基因的基因组印记。 展开更多
关键词 PEG11基因 印记状态 体细胞核移植牛 DNA甲基化 器官缺损
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利用改进的手工克隆技术生产转GFP基因猪克隆胚胎 被引量:5
15
作者 张鹏 杨珍珍 +6 位作者 窦红伟 李伟杭 律波 Bolund Lars 杜玉涛 谭萍萍 马润林 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期527-532,共6页
通过体细胞核移植(Somatic cell nuclear transfer,SCNT)培育转基因动物新个体是当前被广泛使用的技术之一,但其生产成本高和转基因囊胚形成率低在很大程度上制约了该技术的应用。文章报告对该技术的一些改进以提高其成功率并降低成本... 通过体细胞核移植(Somatic cell nuclear transfer,SCNT)培育转基因动物新个体是当前被广泛使用的技术之一,但其生产成本高和转基因囊胚形成率低在很大程度上制约了该技术的应用。文章报告对该技术的一些改进以提高其成功率并降低成本。首先将增强型绿色荧光基因(EGFP)导入猪胎儿成纤维细胞中,通过荧光观察EGFP的表达来筛选适合做细胞核移植的体细胞。这样避免了外源EGFP基因虽已整合至猪基因组但不表达的情况,保证供体细胞100%是表达目标蛋白(绿色荧光蛋白)的细胞;然后利用新一代体细胞核移植技术——手工克隆技术(Handmade cloning,HMC)将供体细胞与卵母细胞融合生产胚胎。共收集了4个批次378个肉用家猪的卵母细胞,经体外培养成熟后手工去核得到266个去核卵母细胞,与EGFP细胞融合后获得127个重构胚胎,将重构胚胎体外培养到144 h,得到转基因囊胚65个,平均囊胚率为52.1±8.3%。与传统SCNT相比,HMC不仅操作简便,而且能大幅提高核移植细胞的囊胚率。更为重要的是,改进的手工克隆技术摆脱了昂贵的显微操作仪,为产业化生产转基因动物提供了新的实用基础。 展开更多
关键词 手工克隆 体细胞核移植 绿色荧光蛋白 克隆胚胎
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无血清培养基IVD101和G1/G2在牛体细胞核移植中的应用研究 被引量:3
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作者 李荣 刘颖 +7 位作者 赵兴波 王莉莉 王海萍 丁方荣 李京 李松 高凤磊 戴蕴平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1487-1492,共6页
通过考察牛体细胞核移植重构胚在无血清培养基(IVD101、G1/G2)条件下培养的囊胚发育率及其质量,从而评估无血清培养基支持牛体细胞核移植重构胚体外发育的能力。采用IVD101和G1/G2对牛体细胞核移植胚胎进行体外培养,并以CR1aa+5%FBS作... 通过考察牛体细胞核移植重构胚在无血清培养基(IVD101、G1/G2)条件下培养的囊胚发育率及其质量,从而评估无血清培养基支持牛体细胞核移植重构胚体外发育的能力。采用IVD101和G1/G2对牛体细胞核移植胚胎进行体外培养,并以CR1aa+5%FBS作为对照组。无血清培养基IVD101和G1/G2的囊胚发育率与对照组无显著性差异(41.2%±9.1%、42.2%±10.8%,48.0%±9.2%,P>0.05)。通过囊胚差异染色和冷冻/解冻胚胎存活率分析胚胎质量,发现无血清培养基ICM/Total略低于对照组(31.8%±10.5%、29.5%±11.9%vs.33.0%±14.8%),但无显著性差异(P>0.05);3个组别的囊胚经程序化冷冻/解冻后无血清培养基的存活率(IVD101、G1/G2)略高于对照组,但差异不显著(84.8%、80.4%vs.77.3%,P>0.05)。结果证明无血清培养基(IVD101、G1/G2)可以支持体细胞核移植重构胚的体外发育,且其对程序化冷冻的耐受性与添加血清组(CR1aa+5%FBS)相似。 展开更多
关键词 无血清培养基 体细胞核移植 差异染色 胚胎冷冻
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亮甲酚蓝染色法筛选卵母细胞对牛体细胞克隆胚体外发育的影响 被引量:3
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作者 曹泽磊 苏建民 +3 位作者 胡广卫 王勇胜 唐爽 张涌 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第9期24-28,共5页
为探索用亮甲酚蓝染色法筛选卵母细胞是否有利于牛体细胞克隆胚的体外发育,将采集的卵母细胞分成3组:对照组,采集后的卵母细胞直接放入成熟液培养,不用亮甲酚蓝处理;控制对照组,卵母细胞于PBS中放置90 min后放入成熟液中培养;试验组,将... 为探索用亮甲酚蓝染色法筛选卵母细胞是否有利于牛体细胞克隆胚的体外发育,将采集的卵母细胞分成3组:对照组,采集后的卵母细胞直接放入成熟液培养,不用亮甲酚蓝处理;控制对照组,卵母细胞于PBS中放置90 min后放入成熟液中培养;试验组,将采集的卵母细胞在含有26μmol/L亮甲酚蓝的PBS中放置90 min。然后将处理过的卵母细胞根据着色情况分为两组,即BCB+(胞质呈蓝色,成熟卵母细胞)和BCB-(胞质未着色,生长期卵母细胞)。各组卵母细胞24 h体外成熟培养,统计各组卵母细胞成熟率。分别用成熟后的各组卵母细胞用于细胞核移植,统计体细胞核移植的卵裂数、囊胚数和囊胚细胞数。结果表明,BCB+组卵母细胞的成熟率明显高于BCB-组卵母细胞的成熟率(74.0%,53.4%),差异显著(P<0.05)。BCB+组的囊胚率(45.0%)与对照组、控制对照组和BCB-组的囊胚率(34.9%,36.4%和5.2%)相比差异显著(P<0.05)。另外BCB+组的囊胚细胞总数(114.5±7.5)较其他组差异显著(P<0.05)。表明通过亮甲酚蓝染色法筛选出成熟的高质量牛卵母细胞用于体细胞核移植,可以获得更高的克隆囊胚率。 展开更多
关键词 亮甲酚蓝 卵母细胞 体细胞核移植
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序贯培养液G1/G2对山羊核移植胚胎发育和质量的影响 被引量:2
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作者 刘军 郑聪颖 +4 位作者 李长雷 杜珊 李亮亮 马保华 张涌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期442-447,共6页
为了优化山羊核移植胚胎体外培养体系,提高核移植效率,本研究检测了山羊体细胞核移植(SCNT)胚胎在序贯培养液G1/G2中的发育率和囊胚细胞凋亡,以及核移植胚胎移植后的妊娠率,以传统mSOF-FBS培养液作为对照组,评估序贯培养液G1/G2支持山... 为了优化山羊核移植胚胎体外培养体系,提高核移植效率,本研究检测了山羊体细胞核移植(SCNT)胚胎在序贯培养液G1/G2中的发育率和囊胚细胞凋亡,以及核移植胚胎移植后的妊娠率,以传统mSOF-FBS培养液作为对照组,评估序贯培养液G1/G2支持山羊核移植胚胎的发育能力。结果显示,与对照组相比,G1/G2组的囊胚发育率差异不显著((27.7±3.1)%vs(25.3±1.0)%,P>0.05),囊胚细胞数和囊胚细胞凋亡率显著降低(分别为(93.2±4.5)vs(109.1±6.2)和(4.9±0.2)%vs(11.3±0.1)%,P<0.05),但移植后的妊娠率显著增高(21.4%vs 8.0%,P<0.05)。结果表明,与传统的培养液mSOF-FBS相比,序贯培养液G1/G2能更好地支持山羊核移植胚胎的发育。 展开更多
关键词 山羊 胚胎培养 体细胞核移植 凋亡
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全细胞胞质内注射法生产猪重构胚的研究(简报) 被引量:3
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作者 孔庆然 罗一博 +3 位作者 田江天 王振坤 张力 刘忠华 《分子细胞生物学报》 CSCD 北大核心 2008年第1期70-74,共5页
自从1997年克隆羊“Dolly”出生以来。体细胞核移植技术得到广泛应用,已经有十余种克隆哺乳动物出生,但克隆效率仍然很低。核移植方法的不够完善是其重要原因之一。传统的核移植方法——电融合法和胞质内注射法虽然都取得了成功。但还... 自从1997年克隆羊“Dolly”出生以来。体细胞核移植技术得到广泛应用,已经有十余种克隆哺乳动物出生,但克隆效率仍然很低。核移植方法的不够完善是其重要原因之一。传统的核移植方法——电融合法和胞质内注射法虽然都取得了成功。但还存在操作复杂及需要辅助设备等问题。为了能够找出一种既容易操作,又不需要特殊设备的核移植方法,本研究对胞质内注射技术进行了改进,尝试了一种新的核移植方法——非Piezo辅助的全细胞胞质内注射法,即不通过Piezo辅助。不破坏供体细胞膜直接将供体细胞注入卵母细胞内,并且比较了这种方法与电融合法对猪体细胞核移植效率的影响。探讨了非Piezo辅助的全细胞胞质内注射法在猪体细胞核移植上的可行性。 展开更多
关键词 体细胞核移植 电融合法 全细胞胞质内注射法
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胚胎移植时机对牛体细胞克隆胚胎妊娠率的影响 被引量:5
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作者 赵磊文 伏静 +3 位作者 管鹏飞 李华 黄淑帧 曾溢滔 《上海交通大学学报(农业科学版)》 2008年第2期96-100,共5页
以活体取卵OUP来源的牛卵母细胞为受体胞质,以Holstein奶牛的牛耳成纤维细胞作为供核细胞进行体细胞克隆,并将发育7 d的克隆囊胚和体内胚分别及体外胚进行移植,观察移植时机对受孕率的影响。依据代孕牛排卵后天数的不同分为3个实验组,... 以活体取卵OUP来源的牛卵母细胞为受体胞质,以Holstein奶牛的牛耳成纤维细胞作为供核细胞进行体细胞克隆,并将发育7 d的克隆囊胚和体内胚分别及体外胚进行移植,观察移植时机对受孕率的影响。依据代孕牛排卵后天数的不同分为3个实验组,组1:排卵后5~6 d(不含6 d);组2:排卵后6~7d;组3:排卵后7~8 d(不含7 d)。结果显示:对于体外胚胎而言,第2组的受孕率高于第1组(P>0.05),第3组的受孕率最低(P<0.05),且120 d的受孕率为0。与此相反,对于体内胚胎,第3组的受孕率高于其他2组。通过实验可以证明对于7 d的体外胚胎选择在代孕牛排卵后6—7 d移植可以得到较高的受孕率:而对于体内胚胎而言则应选择在受体牛排卵后7~8 d移植,可得到较高的妊娠率。 展开更多
关键词 体细胞核移植 受孕 胚胎移植
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