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抑癌基因PTEN真核表达载体的构建及其在人舌鳞癌SCC-4细胞系中的表达 被引量：1
1
作者 董肖婷 张斌 +3 位作者 刘硕硕 郭婷婷 潘良朋 贾妮 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期282-285,428,共4页
目的:构建抑癌基因PTEN真核表达载体pEGFP-PTEN,并观察其在人舌鳞癌scc-4细胞系中的表达,为舌鳞癌的基因治疗提供理论依据。方法:提取人HeLa细胞总RNA,采用RT-PCR法获取PTEN全基因,克隆至pMD18-T载体,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后与真核表... 目的:构建抑癌基因PTEN真核表达载体pEGFP-PTEN,并观察其在人舌鳞癌scc-4细胞系中的表达,为舌鳞癌的基因治疗提供理论依据。方法:提取人HeLa细胞总RNA,采用RT-PCR法获取PTEN全基因,克隆至pMD18-T载体,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后与真核表达载体pEGFP-N1连接,构建pEGFP-PTEN重组质粒。双酶切及测序鉴定后,经脂质体介导转染至体外培养的人舌鳞癌SCC-4细胞系,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白在细胞内的表达;Western blotting法检测细胞内PTEN蛋白的表达。结果:pEGFP-PTEN重组质粒双酶切,克隆的目的基因片段约为1 200bp,测序结果与GenBank上PTEN序列完全一致;荧光显微镜下观察到pEGFP-PTEN在SCC-4细胞系中成功表达;Western blotting结果,转染组PTEN蛋白表达强度为1.07±0.15,与空转染组(0.62±0.11)和未转染组(0.57±0.08)比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:成功构建pEGFP-PTEN重组真核表达载体,该载体能在人舌鳞癌SCC-4细胞系中表达。 展开更多
关键词 PTEN基因 质粒 scc-4细胞系 基因转染
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沉默Icmt基因对舌鳞癌CAL-27和SCC-4细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响
2
作者 陈正岗 王奇民 +6 位作者 童磊 王云英 徐晓娜 王莹 韩红钰 盛善桂 王少如 《中国口腔颌面外科杂志》 CAS 2021年第2期97-104,共8页
目的 :探讨异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶(isoprenylcysteine carboxyl methyltransferase,Icmt)对舌鳞癌CAL-27和SCC-4细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及其相关机制。方法:针对人Icmt基因序列设计并构建3条小干扰RNA(small interfe... 目的 :探讨异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶(isoprenylcysteine carboxyl methyltransferase,Icmt)对舌鳞癌CAL-27和SCC-4细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及其相关机制。方法:针对人Icmt基因序列设计并构建3条小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),采用脂质体载体瞬时转染Icmt-siRNA抑制舌鳞癌CAL-27和SCC-4细胞Icmt表达,将实验组分为Icmt-siRNA-1组、Icmt-siRNA-2组、Icmt-siRNA-3组;同时将脂质体转染NC-siRNA作为阴性对照组,只加转染试剂作为空白对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质免疫印记法(Western blot)检测转染后各组细胞Icmt、K-Ras的mRNA和蛋白表达及K-Ras膜蛋白的表达;Western免疫印迹检测Cyclin D1、p21、Akt、p-Akt蛋白表达;细胞增殖活性检测试剂盒和流式细胞术检测细胞的增殖活性、周期变化和凋亡能力。应用GraphPad Prism 8.2.1软件对实验数据进行统计学分析。结果:qRT-PCR和Western免疫印迹检测结果显示,与对照组相比,实验组Icmt mRNA和蛋白表达显著下降(P<0.05),K-Ras mRNA和蛋白表达无显著差异(P>0.05),K-Ras膜蛋白表达显著下降(P<0.05);周期相关蛋白Cyclin D1表达显著下调,p21表达显著上调(P<0.05);Ras/PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白Akt表达无统计学差异(P>0.05),但p-Akt表达显著下降(P<0.05)。细胞增殖活性检测结果表明,与对照组相比,实验组细胞增殖能力显著下降(P<0.05);流式细胞术检测结果表明,实验组细胞凋亡水平较对照组显著增加,细胞周期被阻滞在G1/S期(P<0.05)。结论:体外沉默Icmt基因可有效抑制CAL-27和SCC-4细胞增殖且诱导凋亡,其作用可能是通过影响K-Ras膜蛋白靶向膜定位,负性调控细胞周期和下调Ras/PI3K/Akt/mTOR信号通路而实现。 展开更多
关键词 异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶 K-RAS 舌鳞状细胞癌 CAL-27 scc-4 细胞增殖 细胞周期 细胞凋亡
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二甲双胍对于人口腔鳞癌SCC-4和CAL-27细胞株的抑制作用
3
作者 邬琪 冷颖 +2 位作者 段昌华 周子亮 彭助力 《口腔颌面外科杂志》 CAS 2017年第4期246-251,共6页
目的:探讨二甲双胍对于人口腔鳞癌SCC-4和CAL-27细胞的抑制作用。方法:对口腔鳞癌SCC-4细胞株和CAL-27细胞株进行复苏、培养和传代处理,运用MTT检测法、流式细胞术检测法、Western blot检测法,观察二甲双胍对人口腔鳞癌SCC-4和CAL-27细... 目的:探讨二甲双胍对于人口腔鳞癌SCC-4和CAL-27细胞的抑制作用。方法:对口腔鳞癌SCC-4细胞株和CAL-27细胞株进行复苏、培养和传代处理,运用MTT检测法、流式细胞术检测法、Western blot检测法,观察二甲双胍对人口腔鳞癌SCC-4和CAL-27细胞的体外增殖能力、细胞活性、克隆形成以及生长周期的影响。结果:SCC-4和CAL-27在二甲双胍干预48 h后细胞活性降低,且呈现明显的浓度依赖性;SCC-4和CAL-27在5 mmol/L浓度的二甲双胍干预12、24、48 h后,G0/G1期所占比例随时间推移而逐渐增高(P<0.05),但S期和G2/M期所占的比例却减小(P<0.05);SCC-4和CAL-27经二甲双胍处理2周后,细胞的克隆数显著减少,且呈现明显的浓度依赖性(P<0.05);SCC-4和CAL-27经5 mmol/L二甲双胍干预后,AMPKa憐酸化水平(Thrl72)显著提升,mTOR及其下游直接作用分子p-m TOR(Ser2448)、p-S6Kl(Thr389)、p-4E-BPl(Thr37/46)表达量显著下降,且有时间依赖性。结论:二甲双胍主要通过激活AMPK信号通路而抑制m TOR信号通路,来抑制口腔鳞癌SCC-4和CAL-27细胞的细胞活性,细胞增殖和克隆形成,使口腔鳞癌SCC-4和CAL-27细胞生长阻滞在G0/G1期,从而达到治疗口腔鳞癌的目的。 展开更多
关键词 二甲双胍 口腔鳞癌 scc-4细胞 CAL-27细胞 分子机制
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食管癌的CT及MRI影像表现与血清CEA、Cyfra21-1、SCC-Ag、CA19-9、CA72-4表达的相关性及其诊断价值分析 被引量：31
4
作者 陈志林 徐秋贞 +2 位作者 陶禹 张明府 肖勇 《中国CT和MRI杂志》 2023年第8期88-91,共4页
目的探讨食管癌的电子计算机断层扫描仪器(CT)及磁共振成像(MRI)影像表现与血清癌胚抗原(CEA)、细胞角化素蛋白19片段(Cyfra21-1)、鳞状细胞癌相关抗原(SCC-Ag)、糖类抗原19-9(CA19-9)、糖类抗原72-4(CA72-4)表达的相关性及其诊断价值... 目的探讨食管癌的电子计算机断层扫描仪器(CT)及磁共振成像(MRI)影像表现与血清癌胚抗原(CEA)、细胞角化素蛋白19片段(Cyfra21-1)、鳞状细胞癌相关抗原(SCC-Ag)、糖类抗原19-9(CA19-9)、糖类抗原72-4(CA72-4)表达的相关性及其诊断价值分析。方法将我院2019年4月至2022年4月纳入的64例食管癌患者作为观察组,另外,同期56例在我院进行健康体检者作为对照组。观察食管癌的CT及MRI的影像表现,比较两组的血清CEA、Cyfra21-1、SCC-Ag、CA19-9、CA72-4水平,分析食管癌的CT及MRI影像表现与血清CEA、Cyfra21-1、SCC-Ag、CA19-9、CA72-4表达的关系及相关性,进一步探讨食管癌的CT及MRI影像表现与血清CEA、Cyfra21-1、SCC-Ag、CA19-9、CA72-4单项及联合检测在食管癌中的诊断结果、诊断效能。结果CT检查显示:食管壁结节样病变,向腔内突出,管腔偏心性狭窄,管腔呈点状改变。食管壁环形增厚,管腔向心性狭窄,邻近气管隆突下淋巴结转移。MRI检查显示:管壁明显增厚,管腔狭窄,邻近纵隔淋巴结肿大;病变于T1WI显示为等信号,T2WI显示为较高信号,DWI显示为明显高信号,增强扫描出现明显强化。与对照组比较,观察组的血清CEA、Cyfra21-1、SCC-Ag、CA19-9、CA72-4水平显著增高(P<0.05)。病灶>3cm、肿瘤边缘粗糙、有淋巴结转移的食管癌患者的血清CEA、Cyfra21-1、SCC-Ag、CA19-9、CA72-4水平高于病灶≤3cm、肿瘤边缘光滑、无淋巴结转移的食管癌患者(P<0.05);肿瘤位置在食管中段的食管癌患者的血清CEA、Cyfra21-1、SCC-Ag、CA19-9、CA72-4水平高于肿瘤位置在食管上段、食管下段的食管癌患者(P<0.05)。经Pearson相关分析显示,食管癌肿瘤边缘与血清CA19-9、CA72-4水平呈正相关(P<0.05);食管癌淋巴结转移与血清CEA、CA19-9、CA72-4水平呈正相关(P<0.05);食管癌肿瘤位置与血清CEA、CA72-4水平呈正相关(P<0.05)。经ROC曲线结果表明,食管癌的CT及MRI影像表现与血清CEA、Cyfra21-1、SCC-Ag、CA19-9、CA72-4联合检测诊断食管癌的灵敏度(96.80%)、特异度(94.70%)、准确度(95.80%)高于单项检测(P<0.05)。结论食管癌采用CT及MRI检查可以获取较多的诊断信息,清晰显示病变区域,并且血清CEA、Cyfra21-1、SCCAg、CA19-9、CA72-4水平变化能够用于判断食管癌患者病情的严重程度。另外,食管癌的CT及MRI影像表现与血清CEA、Cyfra21-1、SCC-Ag、CA19-9、CA72-4水平具有相关性,而且用于食管癌患者可以提高早期诊断的检出率,在临床中具有较高的诊断价值。 展开更多
关键词 食管癌 CT MRI CEA CYFRA21-1 scc-AG CA19-9 CA72-4 诊断价值
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SCC-Ag、HE4联合CT扫描对早期宫颈癌诊断价值
5
作者 王世宏 王存堂 王爱琴 《国外医学（医学地理分册）》 CAS 2018年第4期337-340,共4页
目的探讨SCC-Ag、HE4联合CT扫描对早期宫颈癌诊断价值。方法选择2015年1月至2018年1月本院收治的79例宫颈疾病患者,其中早期宫颈癌63例,宫颈良性病变者16例。均给予SCC-Ag、HE-4、CT检查,对比早期宫颈癌及宫颈良性病变者的SCC-Ag、HE-4... 目的探讨SCC-Ag、HE4联合CT扫描对早期宫颈癌诊断价值。方法选择2015年1月至2018年1月本院收治的79例宫颈疾病患者,其中早期宫颈癌63例,宫颈良性病变者16例。均给予SCC-Ag、HE-4、CT检查,对比早期宫颈癌及宫颈良性病变者的SCC-Ag、HE-4水平,对比各项指标单独或联合诊断对早期宫颈癌的灵敏度、特异度、阳性、阴性预测值及准确度。结果早期宫颈癌患者中的SCC-Ag、HE-4水平均明显高于宫颈良性病变者;SCC-Ag+HE-4+CT的诊断灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及准确度均高于其余各组,其特异度、准确度与其余组对比有统计学意义。结论 SCC-Ag、HE-4联合CT可提高早期宫颈癌的诊断灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及准确度,在早期宫颈癌诊断中有重要意义。 展开更多
关键词 scc-AG HE-4 CT扫描 早期宫颈癌 诊断
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雷帕霉素抑制口腔鳞癌细胞增殖及其分子机制研究
6
作者 焦会杰 《现代口腔医学杂志》 CAS 2023年第2期73-77,共5页
目的通过不同浓度雷帕霉素干预口腔鳞癌细胞系SCC-4的增殖情况,检测雷帕霉素干预后p-AKT、p-STAT3、p-S6K1及免疫因子在SCC-4中的表达,探讨雷帕霉素对口腔鳞癌细胞体外生长的抑制作用及其分子机制。方法采用20、40、80μmol/L雷帕霉素... 目的通过不同浓度雷帕霉素干预口腔鳞癌细胞系SCC-4的增殖情况,检测雷帕霉素干预后p-AKT、p-STAT3、p-S6K1及免疫因子在SCC-4中的表达,探讨雷帕霉素对口腔鳞癌细胞体外生长的抑制作用及其分子机制。方法采用20、40、80μmol/L雷帕霉素分别干预体外培养的SCC-4,并设含0μmol/L雷帕霉素的培养液作为对照组,作用24h后,通过MTT检测不同浓度雷帕霉素对于SCC-4增殖的影响;使用Western blotting方法检测雷帕霉素对PI3K/AKT/mTOR信号通路相关相关蛋白(AKT,STAT3,S6K1)磷酸化情况变化;通过酶联免疫吸附法检测雷帕霉素对PI3K/AKT/mTOR信号通路下游共刺激因子B7-H1表达的影响。结果MTT结果显示雷帕霉素对于SCC-4细胞的抑制效应呈明显的浓度依赖关系;酶联免疫吸附法结果表明雷帕霉素能够降低PI3K/AKT/mTOR信号通路下游相关共刺激分子(B7-H1)的浓度;蛋白免疫印迹结果则表明在雷帕霉素干预下SCC-4细胞的PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白p-AKT,p-STAT3,p-S6K1表达水平明显降低。结论雷帕霉素有效抑制人口腔鳞癌细胞SCC-4的生长增殖,这可能与调控信号通路中分子的活化转导及其下游共刺激因子有关。 展开更多
关键词 雷帕霉素 口腔鳞癌 scc-4 细胞增殖
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舌鳞状细胞癌中Cyclin D1和CDK4的表达及意义 被引量：1
7
作者 孙国洪 王岩 +1 位作者 陈卫民 汤国雄 《临床口腔医学杂志》 2005年第8期471-473,共3页
目的:分析细胞周期素D1(CyclinD1)和细胞周期素依赖激酶4(CDK4)在舌鳞状细胞癌中的表达及意义。方法:用免疫组织化学方法检测CyclinD1和CDK4在39例舌癌和15例正常舌黏膜中的蛋白表达,及其与组织学分级和颈部淋巴结状态之间的关系。应用... 目的:分析细胞周期素D1(CyclinD1)和细胞周期素依赖激酶4(CDK4)在舌鳞状细胞癌中的表达及意义。方法:用免疫组织化学方法检测CyclinD1和CDK4在39例舌癌和15例正常舌黏膜中的蛋白表达,及其与组织学分级和颈部淋巴结状态之间的关系。应用χ2检验分析舌癌中CyclinD1和CDK4与在正常舌黏膜中表达的差异,应用Spearman等级相关分析CyclinD1和CDK4的表达关系。结果:CyclinD1、CDK4在舌癌中的阳性表达率分别为69.2%、61.5%,均高于正常舌黏膜,有显著性差异(P<0.01),CyclinD1和CDK4在舌癌中的表达成正相关(P<0.05),伴有颈部淋巴节转移组的阳性表达率高于无转移组,有显著性差异(P<0.05)。结论:CyclinD1和CDK4在舌癌组织中呈过表达,并与其发生、发展密切相关。 展开更多
关键词 细胞周期素D1 细胞周期素依赖激酶4 舌鳞状细胞癌 免疫组织化学
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