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SARS-CoVS蛋白全长基因克隆及其表达的初步研究 被引量:4
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作者 肖宇 倪兵 +5 位作者 李晋涛 李艳秋 黎万玲 王希良 姜曼 吴玉章 《中国临床康复》 CSCD 2003年第21期2932-2933,F003,共3页
目的:克隆表达SARS-CoVS蛋白,构建SARS全长基因疫苗。方法:从SARS病毒的总cDNA中以PCR方法扩增编码人SARS-CoVS1和S2蛋白的编码序列,再将二者分别克隆入真核表达载体pVAX1,构建重组表达载体。然后进一步将S1和S2连接到pVAX1中。酶切和... 目的:克隆表达SARS-CoVS蛋白,构建SARS全长基因疫苗。方法:从SARS病毒的总cDNA中以PCR方法扩增编码人SARS-CoVS1和S2蛋白的编码序列,再将二者分别克隆入真核表达载体pVAX1,构建重组表达载体。然后进一步将S1和S2连接到pVAX1中。酶切和测序鉴定阳性克隆。采用脂质体法转染VeroE6细胞,用Western检测S蛋白的表达。结果:PCR方法分别扩增出了1900bp和1800bp左右的基因片段,两片段插入pVAX1构建重组表达载体后,经序列测定证实该插入片段为SARS病毒S蛋白编码序列。将重组子转染VeroE6细胞,收集细胞总蛋白,Western检测获得特异蛋白带。结论:成功克隆并表达了SARS-CoVS蛋白,为其作为SARS基因疫苗研究打下基础。 展开更多
关键词 sars-covs蛋白 全长基因 克隆 SARS病毒 基因疫苗 严重急性呼吸综合症
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SARS-CoVS蛋白功能性受体ACE2在人角膜、结膜中的表达 被引量:19
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作者 柳林 孙琰 +3 位作者 潘欣 沈炜 刘志勇 刘银平 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2004年第6期561-564,共4页
目的检测人角膜、结膜中血管紧张素转化酶2(ACE 2)的表达,由此来初步推断重症急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒由眼部入侵的可能.方法取成人眼球破裂伤摘除的眼角膜和结膜组织及4~6个月中期引产胎儿的眼角膜、结膜、心、肺组织,分别采用RT... 目的检测人角膜、结膜中血管紧张素转化酶2(ACE 2)的表达,由此来初步推断重症急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒由眼部入侵的可能.方法取成人眼球破裂伤摘除的眼角膜和结膜组织及4~6个月中期引产胎儿的眼角膜、结膜、心、肺组织,分别采用RT-PCR和免疫组化方法检测组织中ACE 2的表达.取成人尸体解剖的心、肺组织作为对照.结果在上述各种组织中均检测到了ACE.2的表达.结论眼角膜、结膜是人体暴露于SARS冠状病毒的一个重要部位,研究结果从mRNA和蛋白质水平证实了眼部组织存在SARS冠状病毒S蛋白的功能性受体ACE 2,由此初步推断SARS-CoV存在由眼部入侵的可能,为临床进一步研究SARS的防护和致病机制提供了线索. 展开更多
关键词 sars-cov S蛋白 功能性受体 血管紧张素转化酶 角膜 结膜
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SARS-CoVS蛋白功能性受体ACE2在人、兔角膜、结膜中的表达 被引量:27
3
作者 孙琰 潘欣 +1 位作者 柳林 倪灿荣 《眼科新进展》 CAS 2004年第5期332-336,共5页
目的 SARS冠状病毒 (SARS CoV)的S蛋白介导了病毒与宿主细胞的结合 ,最近已鉴定出SARS CoVS蛋白的功能性受体是血管紧张素转化酶 2 (angiotensin convertingenzyme 2 ,ACE2 )。本研究检测了ACE2在人、兔眼结膜、角膜中的表达 ,由此来... 目的 SARS冠状病毒 (SARS CoV)的S蛋白介导了病毒与宿主细胞的结合 ,最近已鉴定出SARS CoVS蛋白的功能性受体是血管紧张素转化酶 2 (angiotensin convertingenzyme 2 ,ACE2 )。本研究检测了ACE2在人、兔眼结膜、角膜中的表达 ,由此来初步推断SARS CoV由眼部入侵的可能。方法 分别采取 :(1)成人眼球破裂伤摘除的眼角膜和结膜组织 ;(2 ) 4~ 6月中期引产胎儿的眼角膜、结膜、心、肺组织 ;(3)兔眼角膜、结膜、心、肺组织 ;(4 )培养的人结膜成纤维细胞和兔角膜上皮细胞。分别采用RT PCR和免疫组化方法检测各组织、细胞中ACE2的表达。取尸体解剖的成人心、肺组织作为对照。结果 RT PCR法在上述各种组织和细胞中均检测到ACE2的扩增条带 ,其中胎儿、成人和兔的角膜、结膜扩增条带较心、肺稍弱 ,兔各组织的扩增条带亮度与对应的人体组织的扩增条带亮度相近。ACE2免疫组化反应产物主要位于胞浆和胞膜 ,呈棕黄色或棕褐色。角膜和结膜的上皮细胞及角膜内皮细胞呈明显的阳性表达 ,角膜和结膜的成纤维细胞呈弱阳性表达 ,培养的人结膜成纤维细胞和兔角膜上皮细胞亦可见阳性表达。兔组织中的ACE2表达强度及组织定位与人相近。结论 本研究从mRNA和蛋白质水平证实了眼组织存在SARS冠状病毒S蛋白的功能性受体ACE2 ,由? 展开更多
关键词 sars-cov S蛋白 功能性受体 血管紧张素转化酶2 角膜 结膜
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SARS-CoVS蛋白抗原表位多肽的设计合成与免疫反应 被引量:3
4
作者 张嘉杰 吴少瑜 +1 位作者 徐伟 吴曙光 《解放军药学学报》 CAS 2005年第1期40-42,共3页
目的 通过生物信息学与合成多肽方法 ,寻找SARS CoVS蛋白的抗原表位 ,为抗SARS多肽疫苗的深入研究提供试验依据。方法 利用网络共享软件对与S蛋白抗原性相关的参数进行预测分析 ,从而设计S蛋白的抗原表位多肽 ;将合成的抗原表位多肽... 目的 通过生物信息学与合成多肽方法 ,寻找SARS CoVS蛋白的抗原表位 ,为抗SARS多肽疫苗的深入研究提供试验依据。方法 利用网络共享软件对与S蛋白抗原性相关的参数进行预测分析 ,从而设计S蛋白的抗原表位多肽 ;将合成的抗原表位多肽免疫家兔 ,用ELISA法检测产生的抗体。结果 ELISA法检测发现 ,设计合成的 2个抗原表位多肽片段 (残基 348 380 ,4 34 4 70 )在家兔体内均能诱导抗体产生。结论 设计合成的 2个抗原表位多肽片段中包含SARS CoVS蛋白的抗原表位 ,免疫家兔后能产生特异性抗体。 展开更多
关键词 抗原表位 S蛋白 sars-cov 合成多肽 免疫反应 家兔 抗SA 残基 利用 试验
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SARS-CoVS基因的克隆及其shRNA表达载体的构建
5
作者 陶鹏 张君 +3 位作者 唐霓 陈道荣 卢年芳 黄爱龙 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第2期135-137,共3页
目的构建绿色荧光蛋白与SARSCoVS基因的融合表达载体pEGFPC1S及针对SARSCoVS基因的shRNA表达载体pshRNAS,以观察shRNA对SARSCoVS蛋白表达的影响。方法人工合成SARSCoVS基因片段及其shRNA引物,两端设计酶切位点,分别与载体pEGFPC1和pTZU... 目的构建绿色荧光蛋白与SARSCoVS基因的融合表达载体pEGFPC1S及针对SARSCoVS基因的shRNA表达载体pshRNAS,以观察shRNA对SARSCoVS蛋白表达的影响。方法人工合成SARSCoVS基因片段及其shRNA引物,两端设计酶切位点,分别与载体pEGFPC1和pTZU6+1连接,转化大肠杆菌DH5а和JM109,酶切及测序鉴定。结果酶切电泳显示pEGFPC1S插入片段大小为1416bp,测序结果显示pshRNAS中插入的shRNA引物序列正确。结论成功构建融合表达载体pEGFPC1S及针对SARSCoVS基因的shRNA表达载体pshRNAS。 展开更多
关键词 sars-cov 克隆 SHRNA
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SARS-CoV S1蛋白基因克隆及其在Vero E6细胞中的表达 被引量:4
6
作者 黎万玲 倪兵 +5 位作者 李晋涛 李艳秋 王希良 姜曼 肖宇 吴玉章 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期247-249,257,共4页
目的 克隆表达SARS CoVS1蛋白 ,构建SARS基因疫苗。方法 从SARS病毒的cDNA中以PCR方法扩增编码人SARS CoVS1蛋白的编码序列 ,将该序列克隆入真核表达载体pVAX1,构建重组表达载体。采用脂质体法转染VeroE6细胞 ,用Westernblot检测S1蛋... 目的 克隆表达SARS CoVS1蛋白 ,构建SARS基因疫苗。方法 从SARS病毒的cDNA中以PCR方法扩增编码人SARS CoVS1蛋白的编码序列 ,将该序列克隆入真核表达载体pVAX1,构建重组表达载体。采用脂质体法转染VeroE6细胞 ,用Westernblot检测S1蛋白的表达。结果 PCR方法扩增出 2 0 0 0bp左右的基因片段 ,插入pVAX1构建重组表达载体后 ,经序列测定证实扩增的片段为SARS CoVTor 2株S1蛋白编码序列。将重组子转染VeroE6细胞 ,收集细胞总蛋白 ,Western检测获得特异蛋白带。结论 成功克隆并表达了SARS CoVS1蛋白 。 展开更多
关键词 sars-covs1蛋白 基因克隆 VeroE6细胞 表达
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荔枝核黄酮类化合物对SARS-CoV 3CL蛋白酶抑制作用的研究 被引量:18
7
作者 龚受基 苏小建 +4 位作者 虞海平 李佳 覃永俊 徐庆 罗伟生 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期699-700,共2页
关键词 荔枝核黄酮类化合物 sars-cov 3CL蛋白酶 抑制 作用
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SARS-CoV假病毒中和试验技术的建立及评价 被引量:14
8
作者 闫克夏 谭文杰 +3 位作者 张相民 王慧娟 李岩 阮力 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期440-446,共7页
为避免传统的SARS病毒中和试验需要操作活毒而存在的生物安全隐患,建立了基于假病毒系统、操作较安全的SARS中和试验技术平台。本研究应用高效表达SARS-CoV S(密码子优化的全长S蛋白,简称S)的真核表达载体(pVRC8304),与HIV慢病毒包装质... 为避免传统的SARS病毒中和试验需要操作活毒而存在的生物安全隐患,建立了基于假病毒系统、操作较安全的SARS中和试验技术平台。本研究应用高效表达SARS-CoV S(密码子优化的全长S蛋白,简称S)的真核表达载体(pVRC8304),与HIV慢病毒包装质粒(p CMV△8.2)及转移质粒(pHR′CMV EGFP)3个质粒载体系统共同转染人胚肾细胞293T,包装了SARS假病毒;通过SARS假病毒感染的RD-A细胞中标记基因EGFP表达的分析,确定SARS假病毒能有效进入细胞,建立了可在BSL-2级实验室操作的SARS病毒中和试验技术平台。用该技术平台对不同免疫血清进行了中和抗体分析,并比较了基于假病毒和基于SARS活病毒的中和试验效果。结果显示:SARS假病毒和SARS活病毒两个中和试验系统获得中和抗体滴度变化趋势一致,表明本研究构建的SARS假病毒可替代SARS活病毒用于建立操作上安全的SARS病毒中和试验技术平台。 展开更多
关键词 sars-cov S蛋白 假病毒 中和试验
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SARS-CoV抗体实验诊断的特异性研究 被引量:6
9
作者 汪运山 申红 +6 位作者 姜莉华 孙善会 肖东杰 刘洋 黄萍 宋之炜 张源潮 《山东医药》 CAS 北大核心 2003年第14期5-7,共3页
为探讨严重急性呼吸综合征 (SARS)病毒 (SARS- Co V)抗体在 SARS病原学诊断中的特异性 ,应用酶联免疫吸附试验 (EL ISA)和荧光定量 RT- PCR技术检测了 80例非 SARS患者 SARS- Co V抗体的阳性率。结果在 2 3例健康人中 ,SARS- Co V- Ig ... 为探讨严重急性呼吸综合征 (SARS)病毒 (SARS- Co V)抗体在 SARS病原学诊断中的特异性 ,应用酶联免疫吸附试验 (EL ISA)和荧光定量 RT- PCR技术检测了 80例非 SARS患者 SARS- Co V抗体的阳性率。结果在 2 3例健康人中 ,SARS- Co V- Ig G抗体的阳性率为 8.7% (2 /2 3) ,2 0例肿瘤患者中 ,阳性率为 2 0 % (4 /2 0 ) ;18例自身免疫性疾病患者中 ,SARS- Co V- Ig M抗体和 SARS- Co V- Ig G抗体阳性率分别为 11.1% (2 /18)和 2 2 .2 % (4 /18) ;19例系统性红斑狼疮 (SL E)患者中 ,SARS- Co V- Ig M抗体和 SARS- Co V- Ig G抗体阳性率分别为 2 1.1% (4 /19)和 4 7.4 % (9/19) ,SARS- Co V- Ig G抗体和 SARS- Co V- Ig M抗体同时阳性率为 15 .8% (3/19)。证实 SARS-Co V- Ig M抗体诊断 SARS的特异性为 92 .5 % ;SARS- Co V- Ig G抗体诊断 SARS的特异性为 76 .2 5 % ;两种抗体同时阳性诊断 SARS的特异性为 96 .2 5 %。经 RT- PCR证实上述抗体单项阳性均为假阳性。认为两种抗体同时测定可提高诊断的特异性 ,出现假阳性的原因可能与包被的抗原中存在细胞膜、胞浆。 展开更多
关键词 诊断 sars-cov抗体 IGG抗体 阳性率 IGM抗体 特异性研究 患者 包被 细胞核 细胞膜
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SARS-CoV N蛋白和MAP19的相互作用 被引量:7
10
作者 刘俊丽 曹诚 马清钧 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期777-779,共3页
目的:研究SARS-CoV N蛋白与MAP19之间的相互作用。方法:利用免疫共沉淀试验验证SARS-CoV N蛋白与MAP19的相互作用,并利用Western blot检测SARS-CoV N蛋白对MAP19表达量的影响。结果:SARS-CoV N蛋白与MAP19能够在细胞内相互作用,且SARS-C... 目的:研究SARS-CoV N蛋白与MAP19之间的相互作用。方法:利用免疫共沉淀试验验证SARS-CoV N蛋白与MAP19的相互作用,并利用Western blot检测SARS-CoV N蛋白对MAP19表达量的影响。结果:SARS-CoV N蛋白与MAP19能够在细胞内相互作用,且SARS-CoV N能够显著提高MAP19的表达量。结论:SARS-CoV N蛋白与MAP19能够在细胞内形成复合物,将为进一步研究SARS-CoV N蛋白与MAP19相互作用的生物学功能提供实验基础。 展开更多
关键词 sars-cov N MAP19 相互作用
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用SARS冠状病毒全基因组芯片杂交方法分析SARS-CoV 被引量:6
11
作者 吴小兵 任鲁风 +8 位作者 马鑫 何新洲 袁振华 刘凤杰 赵革新 杨宇 张猛 董小岩 侯云德 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2003年第7期89-93,97,共6页
为从临床样品中检测和分析SARS CoV病毒打基础 ,并为分析SARS CoV病毒的复制和转录等机理提供一种有效方法。以SARS冠状病毒TOR2株序列作为标准设计和制备一种覆盖SARS冠状病毒全基因组的寡聚核苷酸芯片 ,探针长度为 70nt,每相邻的探针... 为从临床样品中检测和分析SARS CoV病毒打基础 ,并为分析SARS CoV病毒的复制和转录等机理提供一种有效方法。以SARS冠状病毒TOR2株序列作为标准设计和制备一种覆盖SARS冠状病毒全基因组的寡聚核苷酸芯片 ,探针长度为 70nt,每相邻的探针序列重复 2 5nt,共660条。用该芯片分析了细胞培养的SARS CoV病毒总RNA、7个SARS CoV病毒的基因克隆片段。对RNA样品用随机引物进行反转录PCR获得cDNA。对DNA用随机引物扩增和dUTP cy3标记。结果用这种芯片杂交检测SARS CoV病毒RNA可见阳性信号呈全基因组分布 ,并且有多处连续的阳性信号点 ;用正常人的白细胞RNA为对照 ,杂交未出现明显阳性信号。检测 7个SARS CoV病毒基因克隆片段 ,在该片段相应的探针区段出现连续阳性信号点。这种方法可有效地检测和分析样品中SARS冠状病毒全基因组的信息。 展开更多
关键词 SARS冠状病毒 全基因组 杂交方 sars-cov 基因芯片
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中和性马抗体对SARS-CoV感染的防治作用 被引量:3
12
作者 倪兵 王希良 +12 位作者 王莉 赵光宇 石辛甫 张松乐 张良艳 罗德炎 黎万玲 姜曼 毛丽伟 何仰东 肖宇 高闻达 吴玉章 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期433-437,共5页
目的探讨马抗SARSCoV中和性抗体是否对SARSCoV感染有防治作用。方法用SARSCoV(BJ01株)免疫马匹,从免疫马血清中制备IgGs及其F(ab’)2片段。通过细胞病变法(CPE)、MTT法和空斑形成实验(PFU)等方法,在体外培养的VeroE6细胞中检测F(ab’)2... 目的探讨马抗SARSCoV中和性抗体是否对SARSCoV感染有防治作用。方法用SARSCoV(BJ01株)免疫马匹,从免疫马血清中制备IgGs及其F(ab’)2片段。通过细胞病变法(CPE)、MTT法和空斑形成实验(PFU)等方法,在体外培养的VeroE6细胞中检测F(ab’)2片段对SARSCoV感染的预防性和治疗性作用。再在Balb/c小鼠体内模型中,用CPE法和定量RTPCR方法检测该抗体的保护性效应。结果CPE、MTT和PFU三种方法证实来自三匹马的血清F(ab’)2的中和滴度均达到1∶1600以上。体内实验证实,50μg的F(ab’)2片段可以完全中和1×104TCID50SARSCoV。结论马抗SARSCoV抗体在体内外均能有效地中和SARSCoV和预防其感染宿主细胞,为马抗体将来在大的灵长类动物或人体内进行实验提供实验依据。 展开更多
关键词 马抗血清 免疫 中和抗体 sars-cov
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冠状病毒的新成员——SARS-CoV的基因组特性 被引量:5
13
作者 张文广 李金泉 周欢敏 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第6期501-508,共8页
20 0 3年 3月 ,人类发现一种新的冠状病毒SARS CoV ,这种病毒是非典型性肺炎 (SARS)的病原体。SARS CoV的基因组序列已经由包括中国科学家在内的全世界的科研人员测定完成。该文对国际报道的SARS病源的基因序列进行了收录 ,阐述了SARS ... 20 0 3年 3月 ,人类发现一种新的冠状病毒SARS CoV ,这种病毒是非典型性肺炎 (SARS)的病原体。SARS CoV的基因组序列已经由包括中国科学家在内的全世界的科研人员测定完成。该文对国际报道的SARS病源的基因序列进行了收录 ,阐述了SARS CoV基因组的基本特性 :SARS CoV的基因组长约 2 8~ 30kb ,与冠状病毒科的基因组长度相符合 ,其中包括 11个编码序列 ,基因组的组织方式也与其他冠状病毒类似 ,从表面蛋白 (S蛋白 )、外膜蛋白 (M蛋白 )和核蛋白 (N蛋白 )上看 ,SARS病毒与其他冠状病毒的对应蛋白进化关系接近。同时发现 ,在某些区域 ,SARS病毒的基因序列与其他冠状病毒存在相当大的差异 ,具有自身比较保守的基因组序列结构。而且氨基酸的序列也与其他冠状病毒有很大程度的不同。基因信息的冗余分析表明 ,SARS CoV具有较低的冗余度 ,即发生变异的可能性比较大。虽然SARS CoV外表与冠状病毒类似 ,亲缘关系未超出冠状病毒科界限 ,但由于蛋白基因与氨基酸的序列与其他冠状病毒有本质不同 ,因此可能不是其他冠状病毒的变异体 ,而是一种与冠状病毒类似、但早已独立存在。 展开更多
关键词 sars-cov 基因组特性 冗余分析
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SARS-CoV对外环境中理化因子的抵抗力和稳定性 被引量:5
14
作者 张朝武 王国庆 姚玉红 《现代预防医学》 CAS 2004年第1期1-3,共3页
关键词 sars-cov 外环境 理化因子 抵抗力 稳定性 冠状病毒
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儿童支气管哮喘合并SARS-CoV-2感染的防控与诊疗方案 被引量:3
15
作者 王颖硕 周云连 +3 位作者 张园园 唐兰芳 陈志敏 洪建国 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期233-235,共3页
2019年12月份以来,新型冠状病毒(2019-nCoV)感染在我国湖北及其他地区流行.2020年2月11日,世界卫生组织(WHO)正式将 SARS-CoV-2感染引起的疾病命名为COVID-19(corona virus disease-19).同日,国际病毒分类委员会正式将此病毒命名为严重... 2019年12月份以来,新型冠状病毒(2019-nCoV)感染在我国湖北及其他地区流行.2020年2月11日,世界卫生组织(WHO)正式将 SARS-CoV-2感染引起的疾病命名为COVID-19(corona virus disease-19).同日,国际病毒分类委员会正式将此病毒命名为严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2).SARS-CoV-2对人群普遍易感,包括儿童.目前全国报道儿童感染人数已达数百例,最小者仅生后36小时[1]. 展开更多
关键词 诊疗方案 sars-cov 疾病命名 严重急性呼吸综合征冠状病毒
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SARS-CoV毒株E、M、N和S基因分子变异研究 被引量:3
16
作者 黄平 俞守义 +2 位作者 方苓 陈清 李晖 《中国预防医学杂志》 CAS 2005年第4期313-316,共4页
目的通过对SARS-CoV毒株基因序列的变异分析,揭示SARS-CoV毒株出现和流行与基因进化的关系。方法对广东地区SARS-CoV毒株进行序列分析,其余毒株序列从GenBank检索,采用DNAstar5.0软件,对检索的SARS-CoV的E、M、N、S基因核苷酸序列进行... 目的通过对SARS-CoV毒株基因序列的变异分析,揭示SARS-CoV毒株出现和流行与基因进化的关系。方法对广东地区SARS-CoV毒株进行序列分析,其余毒株序列从GenBank检索,采用DNAstar5.0软件,对检索的SARS-CoV的E、M、N、S基因核苷酸序列进行比对和分析;并结合临床资料对变异毒株进行流行病学分析。结果以果子狸冠状病毒(SZ-3)为基准,102株人类毒株中,6株毒株E基因的4个氨基酸发生置换,两株毒株发生缺失变异;果子狸毒株M基因的第5位丝氨酸置换为人类毒株甘氨酸并减少1个糖蛋白位点,此外M基因有38株毒株发生8个氨基酸置换变异;6株毒株N基因发生氨基酸置换,3株毒株发生缺失变异;人类毒株S基因中9个氨基酸全部发生变异并增加1个糖蛋白位点,与果子狸毒株不同比例占0.72%(9/1255);部分毒株中S基因的27个氨基酸在发生置换变异,7株毒株发生缺失变异。结论冠状病毒S基因中9个氨基酸置换和1个糖蛋白位点影响,可能导致人类SARS-CoV毒株出现和SARS流行;SARS流行持续和传播扩大与S基因进化变异相一致。所以认为,SARS-CoV毒株S基因变异可能在SARS出现和流行中发挥极其重要的作用。 展开更多
关键词 sars-cov毒株 E基因 M基因 N基因 S基因 分子变异 非典型性肺炎
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以减毒沙门氏菌为SARS-CoV N DNA口服疫苗载体的初步研究 被引量:2
17
作者 胡慧 陶玲 +2 位作者 崔保安 黄弋 王汉中 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期41-46,共6页
目的:以减毒沙门氏菌为载体运送SARS-CoV N DNA疫苗至小鼠体内,研究其诱导的免疫应答情况,评价减毒鼠伤寒沙门氏菌作为口服疫苗的免疫效果。方法:将含SARS-CoVN基因的pcDNA-N质粒导入减毒鼠伤寒沙门氏菌CS022中,采用口服和滴鼻相结合的... 目的:以减毒沙门氏菌为载体运送SARS-CoV N DNA疫苗至小鼠体内,研究其诱导的免疫应答情况,评价减毒鼠伤寒沙门氏菌作为口服疫苗的免疫效果。方法:将含SARS-CoVN基因的pcDNA-N质粒导入减毒鼠伤寒沙门氏菌CS022中,采用口服和滴鼻相结合的方法免疫BALB/c小鼠,以ELISA检测不同时间免疫小鼠血清中抗体及其亚型;以MTT法测定特异性淋巴细胞增殖反应;ELISPOT检测细胞因子;流式检测T细胞亚型。结果:pcDNA-N DNA疫苗口服免疫后2周就可以诱生特异性IgG抗体,且以IgG2a占优势;诱导了较高水平的淋巴细胞特异性增殖反应和IFN-γ,主要以Th1免疫为主。结论:减毒沙门氏菌可以有效运送pcDNA-N重组质粒并诱导产生特异体液和细胞免疫应答,为减毒细菌作为DNA疫苗运送载体的研究提供了参考依据,也为SARS疫苗研究开辟了新方法。 展开更多
关键词 sars-cov N基因 DNA疫苗 减毒沙门氏菌
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果子狸SARS-CoV实验性感染的病理学研究 被引量:2
18
作者 肖一红 孟庆文 +6 位作者 尹训南 关云涛 刘永刚 李昌文 王牟平 孔宪刚 吴东来 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期477-480,484,共5页
目的为了明确实验性感染SARS-CoV的果子狸各器官的病理变化,进一步确定SARS-CoV与果子狸的关系,评价其作为SARS动物模型的可行性。方法在人源SARS-CoV分离株BJ01(有29个核苷酸的缺失序列)和GD01(无29个核苷酸的缺失序列)实验性感染果子... 目的为了明确实验性感染SARS-CoV的果子狸各器官的病理变化,进一步确定SARS-CoV与果子狸的关系,评价其作为SARS动物模型的可行性。方法在人源SARS-CoV分离株BJ01(有29个核苷酸的缺失序列)和GD01(无29个核苷酸的缺失序列)实验性感染果子狸的基础上,对其经福尔马林固定的肺、脾、淋巴结、肝、小肠、肾、气管、大脑、胰腺、性腺、胃、心组织进行病理组织学观察,同时用原位杂交技术(ISH)对SARS-CoV在组织器官中的分布进行检测。结果攻毒后不同时期,肺、脾、淋巴结、肝、小肠、肾和大脑有不同程度的病理变化,主要病变是肺脏为急性间质性肺炎:肺炎性水肿、肺泡腔浆液渗出以及肺泡壁充血、出血并因淋巴细胞、巨噬细胞增生、浆液渗出而显著增厚,肺内小血管增生、扩张。淋巴结、脾脏结构破坏,淋巴滤泡消失,脾小体萎缩,淋巴细胞明显减少,结缔组织增生。肝细胞脂肪变性,并见有多个淋巴细胞浸润灶。ISH结果显示,在肺、小肠、大脑中检测到SARS-CoV基因,其它器官中未检到,与SARS患者的检测结果基本相符。结论果子狸实验性感染SARS-CoV可导致与人类相似的病理学变化和病原分布,表明果子狸可以作为评价SARS-CoV疫苗及治疗药物的动物模型。 展开更多
关键词 sars-cov 果子狸 冠状病毒感染 原位杂交
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人类冠状病毒与SARS-CoV 被引量:10
19
作者 黄平 俞守义 《中国预防医学杂志》 CAS 2005年第6期552-555,共4页
关键词 冠状病毒(sars-cov) 严重急性呼吸综合征(SARS) 人类 新型冠状病毒 病毒增殖 外观形态 流行概况 新出现 病原体 基因组
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不同试剂盒检测SARS-CoV抗体的方法学评价 被引量:4
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作者 刘红鹰 贾兴旺 +1 位作者 宋淑珍 田亚平 《军医进修学院学报》 CAS 2003年第4期252-254,共3页
目的 :通过对ELISA方法和蛋白芯片法测定SARS CoV抗体的方法学比较 ,探讨不同SARS试剂盒在辅助诊断非典型肺炎的临床应用价值。方法 :同时用两种ELISA试剂盒检测 135名SARS康复患者及 5 0 0名健康献血者的SARS CoV抗体 ,并随机选取 4 8... 目的 :通过对ELISA方法和蛋白芯片法测定SARS CoV抗体的方法学比较 ,探讨不同SARS试剂盒在辅助诊断非典型肺炎的临床应用价值。方法 :同时用两种ELISA试剂盒检测 135名SARS康复患者及 5 0 0名健康献血者的SARS CoV抗体 ,并随机选取 4 8例小汤山医院确诊SARS康复期患者血清采用蛋白芯片法进行SARS多抗原蛋白测定。结果 :重复性实验 ,两种ELISA试剂盒的批内变异系数分别为 6 .0 6 %、10 .5 % ;批间变异系数分别为 6 .5 7%、11.3%。相关性实验结果显示两试剂盒有良好的相关性 (R2 =0 .94 5 6 ) ,且无显著性差异 (P >0 .0 5 )。4 8例SARS康复患者血清用ELISA方法测定 34例为阳性 ,用蛋白芯片法 35例阳性 ,阳性率分别为 70 .83%、70 .83%、72 .9%。结论 :ELISA方法具有较好的重复性 ,两ELISA试剂盒之间有很好的相关 ;相比之下 ,蛋白芯片法灵敏度较高 。 展开更多
关键词 试剂盒 检测 sars-cov抗体 方法学评价 ELISA
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