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Novel aerosol detection platform for SARS–CoV–2:Based on specific magnetic nanoparticles adsorption sampling and digital droplet PCR detection
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作者 Hui Chen Xinye Ma +7 位作者 Xinyu Zhang Gui Hu Yan Deng Song Li Zhu Chen Nongyue He Yanqi Wu Zhihong Jiang 《Chinese Chemical Letters》 SCIE CAS CSCD 2023年第1期274-278,共5页
The SARS–CoV–2 virus is released from an infectious source(such as a sick person)and adsorbed on aerosols,which can form pathogenic microorganism aerosols,which can affect human health through airborne transmission.... The SARS–CoV–2 virus is released from an infectious source(such as a sick person)and adsorbed on aerosols,which can form pathogenic microorganism aerosols,which can affect human health through airborne transmission.Efficient sampling and accurate detection of microorganisms in aerosols are the premise and basis for studying their properties and evaluating their hazard.In this study,we built a set of sub-micron aerosol detection platform,and carried out a simulation experiment on the SARS–CoV–2 aerosol in the air by wet-wall cyclone combined with immunomagnetic nanoparticle adsorption sampling and ddPCR.The feasibility of the system in aerosol detection was verified,and the influencing factors in the detection process were experimentally tested.As a result,the sampling efficiency was 29.77%,and extraction efficiency was 98.57%.The minimum detection limit per unit volume of aerosols was 250 copies(102copies/m L,concentration factor 2.5). 展开更多
关键词 Aerosol detection Air sampling Immunomagnetic nanoparticle ddPCR sars–cov–2
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针对未接种疫苗的Omicron感染者的SARS-CoV-2抗体检测试剂性能的纵向评估
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作者 刘倩 沙娜·哈勒木别克 +6 位作者 阿卜杜力穆太力普·努尔麦麦提 刘新茹 常乐 姬慧敏 孙慧珍 闫颖 王露楠 《临床输血与检验》 2026年第1期75-84,共10页
目的本研究旨在评估基于新冠病毒原始毒株与奥密克戎(Omicron)变异株开发的SARS-CoV-2抗体检测试剂,在未接种疫苗的艾滋病病毒感染者(people living with HIV,PLWH)感染Omicron变异株后的检测性能。方法本研究招募了45名未接种新冠疫苗... 目的本研究旨在评估基于新冠病毒原始毒株与奥密克戎(Omicron)变异株开发的SARS-CoV-2抗体检测试剂,在未接种疫苗的艾滋病病毒感染者(people living with HIV,PLWH)感染Omicron变异株后的检测性能。方法本研究招募了45名未接种新冠疫苗、首次感染Omicron BA.5毒株的PLWH,并在4个月后进行随访。使用八种针对原始毒株和两种针对Omicron毒株的抗体试剂检测抗体水平,并以针对原始毒株(wild-type,WT)、BA.4/5和XBB.1.5的假病毒中和实验为金标准,使用McNemar与Kappa检验定性结果的一致性,使用斯皮尔曼(Spearman)相关性分析定量结果的相关性。结果原始毒株抗体试剂与WT中和抗体(neutralizing antibody,nAb)的一致性最高(κ值最高为0.483),与Omicron-nAb的一致性明显较低。在定量分析中,原始毒株抗体试剂与WT-nAb呈强相关(r_(s)=0.69~0.85),而与BA.4/5(r_(s)=0.40~0.57)和XBB.1.5(r_(s)=0.43~0.63)-nAb的相关性较弱。二次感染后,原始毒株抗体试剂与Omicron-nAb之间的相关性有所提升。Omicron特异性抗体试剂与Omicron-nAb的95%一致性界限更窄。结论在未接种疫苗的PLWH中,原始毒株抗体试剂对Omicron感染后的免疫应答检测存在局限性,研究结果支持开发和应用变异株特异性抗体试剂,以实现更准确的免疫监测和评估。 展开更多
关键词 严重急性呼吸综合征冠状病毒2 抗体检测试剂 奥密克戎毒株 未接种疫苗的艾滋病病毒感染者 假病毒中和实验
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基于网络药理学探讨甘露消毒汤干预转基因小鼠SARS-CoV-2假病毒感染后嗅觉障碍的机制
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作者 杨馥语 吴振起 +4 位作者 张天宇 张文涵 武美彤 李美琪 梁翔宇 《中国中医药信息杂志》 2026年第1期48-56,共9页
目的基于网络药理学与分子对接探讨甘露消毒汤对hACE2转基因小鼠感染严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)假病毒后嗅觉障碍的作用机制。方法通过TCMSP数据库收集甘露消毒汤组方药物活性成分及其靶点,通过GeneCards数据库获取嗅觉... 目的基于网络药理学与分子对接探讨甘露消毒汤对hACE2转基因小鼠感染严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)假病毒后嗅觉障碍的作用机制。方法通过TCMSP数据库收集甘露消毒汤组方药物活性成分及其靶点,通过GeneCards数据库获取嗅觉障碍靶点,将药物靶点与疾病靶点取交集;应用Cytoscape3.8.0软件构建药物-活性成分-靶点-疾病网络,利用STRING数据库构建蛋白相互作用网络,对关键靶点进行GO及KEGG通路富集分析;运用AutoDock Vina和PyMOL软件对药物主要活性成分与核心靶点进行分子对接。将hACE2转基因小鼠随机分为正常组、模型组及甘露消毒汤低、中、高剂量组,除正常组外均予1×10~9/mL SARS-CoV-2假病毒毒液滴鼻(0.05 mL/只),连续干预7 d后采用埋藏食物小球实验(BFPT)评估嗅觉功能,HE染色观察嗅黏膜组织形态,ELISA检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-10、γ干扰素(IFN-γ)、CC趋化因子配体5(CCL5)含量,免疫组化染色检测嗅黏膜TNF-α、IL-6及嗅球嗅觉标记蛋白(OMP)表达。结果获得甘露消毒汤活性成分63个,作用靶点235个,其中干预嗅觉障碍的潜在作用靶点20个,主要为AKT1、TNF、IL-6等,关键通路为人巨细胞病毒感染信号通路、神经退行性病变-多发性信号通路、甲型流感疾病信号通路等;分子对接显示,主要活性成分汉黄芩素、山柰酚、槲皮素、芦荟大黄素、木犀草素与核心靶点AKT1、TNF、IL-6对接亲合度较高;动物实验BFPT显示,模型小鼠嗅觉功能受损;甘露消毒汤中、高剂量组小鼠嗅黏膜炎性细胞数目明显减少,肿胀减轻,黏膜厚度恢复正常,嗅觉感觉神经元细胞形态结构趋于规则完整,血清TNF-α、IL-6、IFN-γ、CCL5含量下降且IL-10含量上升(P<0.05,P<0.01),嗅黏膜TNF-α、IL-6表达下降(P<0.01,P<0.001),嗅球OMP表达有上调趋势(P>0.05)。结论甘露消毒汤通过汉黄芩素、山柰酚、槲皮素、芦荟大黄素、木犀草素等成分作用于AKT1、TNF、IL-6等靶点,下调多种细胞因子表达,减轻嗅黏膜炎性损伤,提高嗅球OMP表达,从而治疗病毒感染后嗅觉障碍。 展开更多
关键词 甘露消毒汤 病毒感染后嗅觉障碍 严重急性呼吸综合征冠状病毒2 湿毒 化湿解毒 开窍
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T细胞在SARS-CoV-2感染和免疫逃逸中作用的研究进展
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作者 张楠 魏少鹏 +1 位作者 雷连成 黄晶 《病毒学报》 北大核心 2025年第4期1306-1318,共13页
由严重急性呼吸综合征冠状病毒2(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染导致的新型冠状病毒感染从2019年底起发展至今仍在全球肆虐。COVID-19患者临床上常伴随淋巴细胞减少的症状,其中T细胞表现出数量上显... 由严重急性呼吸综合征冠状病毒2(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染导致的新型冠状病毒感染从2019年底起发展至今仍在全球肆虐。COVID-19患者临床上常伴随淋巴细胞减少的症状,其中T细胞表现出数量上显著减少、生物学功能显著降低。而T细胞作为机体抵抗外来抗原入侵的主要免疫细胞,在抗病毒感染中发挥着重要作用。本文综述了T细胞在SARS-CoV-2感染和免疫逃逸中作用的国内外研究进展,总结了SARS-CoV-2的生物学特征、感染后的特异性细胞免疫应答,并对SARS-CoV-2诱导淋巴细胞减少症后抑制T细胞激活、介导T细胞死亡及T细胞表位突变导致抗原漂移等方面实施免疫逃逸的机制进行归纳,说明了针对T细胞表位的疫苗研发具有广泛的应用价值,以便充分了解T细胞与SARS-CoV-2感染和免疫逃逸的关系。 展开更多
关键词 T细胞 淋巴细胞减少症 sars-cov-2 免疫逃逸
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SARS-CoV-2灭活疫苗免疫小鼠后对Delta株病毒的体液及细胞免疫效果评价
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作者 徐康维 许丽 +5 位作者 鲁旭 李晶 戈小琴 王开芹 李长贵 权娅茹 《中国生物制品学杂志》 2025年第5期521-525,共5页
目的评价原型株SARS-CoV-2灭活疫苗免疫BALB/c小鼠后对Delta株病毒的体液及细胞免疫效果,为现有疫苗对变异株的保护效果评价以及研发更加安全有效的疫苗提供参考。方法将SARS-CoV-2灭活疫苗经腹腔免疫雌性BALB/c小鼠2次,间隔14 d,以免疫... 目的评价原型株SARS-CoV-2灭活疫苗免疫BALB/c小鼠后对Delta株病毒的体液及细胞免疫效果,为现有疫苗对变异株的保护效果评价以及研发更加安全有效的疫苗提供参考。方法将SARS-CoV-2灭活疫苗经腹腔免疫雌性BALB/c小鼠2次,间隔14 d,以免疫PBS作为对照,每组10只。初次免疫后第7、14、21、28、35和42天采集血清,间接ELISA法检测血清中针对Delta株病毒S和N蛋白的结合抗体效价,微量中和试验检测针对Delta株病毒的中和抗体效价。初次免疫后第42天,取小鼠脾脏,进行Elispot检测,评价细胞免疫水平。结果初次免疫后第7天即可检测到S蛋白结合抗体,加强免疫后抗体效价进一步升高,至第21天抗体几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)为89144;而初次免疫后N蛋白结合抗体水平较低,加强免疫后迅速升高,与S蛋白抗体水平相当。初次免疫后第7、14天小鼠中和抗体阳转数为4/10和8/10,加强免疫后全部小鼠抗体阳转,中和抗体GMT达391。初次免疫后第42天,疫苗组IFNγ和IL-2平均斑点数均显著高于对照组(t分别为8.094和13.08,P均<0.0001)。结论SARS-CoV-2灭活疫苗2次免疫能够有效刺激小鼠产生针对Delta株病毒的体液免疫和细胞免疫。 展开更多
关键词 灭活疫苗 sars-cov-2 体液免疫 细胞免疫
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SARS-CoV-2 N-Ferritin原核表达质粒的构建及鉴定
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作者 曾佑琴 王强 +2 位作者 杨凯雯 宋玉洁 黄炼杰 《哈尔滨医药》 2025年第4期1-5,共5页
目的借助新型铁蛋白系统构建pET32a-N-Ferritin-Flag-6His原核表达质粒,优化重组蛋白N-Ferritin诱导表达条件,鉴定其形态结构及稳定性。方法将SARS-CoV-2 N蛋白全长序列连接至Ferritin氮端,碳端连接Flag和6×His标签,基于pET32a载体... 目的借助新型铁蛋白系统构建pET32a-N-Ferritin-Flag-6His原核表达质粒,优化重组蛋白N-Ferritin诱导表达条件,鉴定其形态结构及稳定性。方法将SARS-CoV-2 N蛋白全长序列连接至Ferritin氮端,碳端连接Flag和6×His标签,基于pET32a载体,构建重组质粒pET32a-N-Ferritin-Flag-6His。通过质粒转化,IPTG诱导、时间及温度优化,采用Western Blot、TEM、DLS对重组蛋白进行鉴定。SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色分析重组蛋白在不同冻融次数与不同储存温度下的稳定性。结果成功制备重组N-Ferritin蛋白,其在85 kDa处有目的条带。N-Ferritin重组蛋白呈现均一球形颗粒。重组蛋白粒径为18.23nm。N-Ferritin重组蛋白在反复冻融3~5次及在不同温度条件下(-80℃、-20℃、4℃)储存4周后仍有较好的稳定性。结论成功表达N-Ferritin蛋白并观察到纳米颗粒的形成,且该纳米颗粒蛋白具有良好的稳定性。 展开更多
关键词 sars-cov-2 铁蛋白 纳米颗粒 疫苗 蛋白纯化
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北京市朝阳区2023⁃2024年SARS⁃CoV⁃2基因特征分析 被引量:1
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作者 韩桃利 卢盼 +21 位作者 赵嘉欣 刘宽宽 刘玉洁 樊茹 路冉 李欢欢 任兴梅 陈紫曼 徐则超 郑姗 孔怡铭 王梦楠 王海滨 赵剑虹 张士尧 田甜 焦洋 高艳 齐啸 许志远 郝瑞祺 孙灵利 《病毒学报》 北大核心 2025年第2期417-427,共11页
为了解北京市朝阳区新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)本土变异株基因型构成及关键基因特征,本文通过纳米孔测序获取2023年6月至2024年3月期间北京市朝阳区新冠病毒感染病例的全基因组序列,采... 为了解北京市朝阳区新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)本土变异株基因型构成及关键基因特征,本文通过纳米孔测序获取2023年6月至2024年3月期间北京市朝阳区新冠病毒感染病例的全基因组序列,采用Pangolin v4.3在线分型平台和Nextclade v3.3.1在线分析工具,获取基因分型、氨基酸变异等信息,并通过TBtools-Ⅱ v2.070绘制氨基酸变异热图。同时,利用VarEPS在线系统(https://nmdc.cn/ncovn/lineage)评估氨基酸变异对本地区新冠病毒S蛋白编码基因的血管紧张素转化酶2(Angiotensin converting enzyme 2,ACE2)受体结合能力及稳定性、抗体亲和力和蛋白质功能的影响等进行分析。结果显示185例(质量评估≥mediocre)SARS-CoV-2序列均为奥密克戎变异株,按照Pangolin分型法可分为8个分支,JN.1(BA.2.86.1.1/B.1.1.529.2.86.1.1)及其亚分支占比最高(42.16%,78/185),与系统进化树显示结果一致。从2023年6月至8月以EG.5.1及其亚分支为主(40.00%~68.00%),再以HK.3及其亚分支为优势毒株(9月至11月,76.09%),继而转换为JN.1及其亚分支为绝对优势分支。EG.5.1和HK.3及其亚分支分别在20岁~39岁年龄组(52.94%)和20岁~49岁人群占比最高(62.50%),而JN.1及其亚分支在60岁~89岁年龄组占比较高(56.41%)。氨基酸变异分析显示,本研究SARS-CoV-2序列平均发生113个(95个~128个)核苷酸变异,其中由于非同义突变引起平均80个(65个~91个)氨基酸突变,其中S蛋白编码基因变异最为频繁(1.02%~1.36%)。进一步分析发现,相较EG.5.1和HK.3及其亚分支,JN.1及其亚分支在NTD等多个区域均发生氨基酸变异位点数量新增/减少。同时,JN.1及其分支增加的P1143L、L452R和N450D等氨基酸变异位点可能会降低S蛋白与中和抗体的结合稳定性和/或降低S蛋白与ACE2受体之间的结合稳定性。并且,本研究所有序列在NSP1、蛋白酶木瓜样蛋白酶(PLpro,NSP3)、3-胰凝乳蛋白酶样蛋白酶(3CLpro,NSP5)编码基因以及其他结构蛋白等关键编码基因亦发生突变。本研究结果提示JN.1及其亚分支关键位点氨基酸变异频繁,相较EG.5.1和HK.3及其亚分支可能具有更强的传播能力和免疫逃逸能力,应持续并继续加强新冠病毒病原学监测。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 NANOPORE S蛋白 TBtools-Ⅱ VarEPS
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BCR免疫组库分析SARS-CoV-2疫苗同源及异源免疫B细胞应答差异 被引量:2
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作者 宋彦丽 孙誉芳 +3 位作者 鲍春婷 王浇磊 权娅茹 李长贵 《病毒学报》 北大核心 2025年第1期23-32,共10页
比较新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)灭活疫苗(Inactivated vaccine,In)和腺病毒载体疫苗(Adenoviral vector vaccine,Ad)同源和异源免疫引起的B细胞抗原受体(B-cell receptor,BCR)差异,探究... 比较新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)灭活疫苗(Inactivated vaccine,In)和腺病毒载体疫苗(Adenoviral vector vaccine,Ad)同源和异源免疫引起的B细胞抗原受体(B-cell receptor,BCR)差异,探究SARS-CoV-2疫苗异源加强引起的抗体应答增强的原因。分别给小鼠同源免疫灭活疫苗In~4In、异源免疫3InAd,并于每次免疫10 d后采外周血检测各组血清针对SARS-CoV-2原型株和XBB.1.16变异株的中和抗体水平;提取同源和异源免疫后小鼠脾脏RNA,逆转录为cDNA后,对BCR重链的CDR3区序列进行BCR免疫组库测序,分析同源和异源免疫策略中CDR3的氨基酸长度多样性、V基因使用频率、V-J基因配对频率、BCR克隆多样性和克隆扩增水平。结果显示,异源3InAd组引起的针对原型株和XBB.1.16毒株的中和抗体水平显著高于同源免疫组;3InAd组CDR3氨基酸长度分布与同源免疫In~4In组不同;3InAd组V基因IGHV11-1、IGHV4-2使用频率显著高于同源4In组,IGHV5-6基因的使用频率低于4In组,IGHV9-3基因的使用频率在同源和异源免疫组无差异;同源免疫In~4In后,BCR克隆种类逐渐丰富,但BCR top 50的频率逐渐降低;3InAd组BCR种类丰富性与4In组相比没有明显增加,BCR top 50的频率逐渐增加,表明异源免疫增加了主要BCR克隆的扩增。本研究发现SARS-CoV-2异源免疫改变了B细胞CDR3长度、V基因频率、V-J基因配对频率、BCR种类多样性和BCR克隆扩增水平。 展开更多
关键词 BCR免疫组库 同源免疫 异源免疫 sars-cov-2 灭活疫苗 腺病毒载体疫苗
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SARS-CoV-2的免疫逃逸机制研究进展 被引量:1
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作者 曹玉蝶 刘佳 +7 位作者 高永宇 李海洋 杨思宇 桑辰君 唐越 崔咏馨 李子彬 高凤山 《病毒学报》 北大核心 2025年第4期1319-1330,共12页
本文综述了严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2型(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARSCoV-2)的免疫逃逸机制,这是其在全球范围内成功传播并引发COVID-19大流行的关键因素。SARS-CoV-2通过多种策略干扰宿主免疫应答,包... 本文综述了严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2型(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARSCoV-2)的免疫逃逸机制,这是其在全球范围内成功传播并引发COVID-19大流行的关键因素。SARS-CoV-2通过多种策略干扰宿主免疫应答,包括模拟宿主分子逃避先天免疫识别、干扰核运输与翻译机制、阻断干扰素信号通路,以及通过变异实现抗原逃逸。特别是Omicron等变异株的出现,其在刺突蛋白上的突变显著降低了现有疫苗和既往感染产生的抗体的中和能力,显示了病毒适应性进化的复杂性。研究还发现,病毒的非结构蛋白和结构蛋白上的突变可能影响T细胞的识别和反应,导致T细胞逃逸。这些发现不仅有助于我们对SARS-CoV-2免疫逃逸机制的理解,也为疫苗和治疗策略的优化提供了科学依据,并强调了对病毒变异持续监测的重要性。 展开更多
关键词 sars-cov-2 免疫逃逸 关切变异株 T细胞逃逸
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SARS-CoV-2的多种Nsp对其聚合酶活性的影响
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作者 程明新 朱鹏飞 +6 位作者 闫芳 宋芳 王雪峰 王铁成 夏咸柱 高玉伟 闫芳 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第8期1665-1671,共7页
通过建立一种基于双顺反子报告质粒及多种非结构蛋白(non-structural proteins,Nsp)质粒的检测系统,以此研究SARS-CoV-2 Nsp对其复制表达的影响。通过分子克隆的方法构建了一种双顺反子报告基因质粒及12种Nsp质粒(包括Nsp3C-Flag、Nsp4... 通过建立一种基于双顺反子报告质粒及多种非结构蛋白(non-structural proteins,Nsp)质粒的检测系统,以此研究SARS-CoV-2 Nsp对其复制表达的影响。通过分子克隆的方法构建了一种双顺反子报告基因质粒及12种Nsp质粒(包括Nsp3C-Flag、Nsp4、Nsp6~Nsp10、Nsp12~Nsp16),并通过Western blot验证了Nsp的表达。首先,通过将报告质粒只与Nsp12共转染、另添加其辅助因子Nsp7和Nsp8并调整3种Nsp质粒的共转染比例、培养温度及测定时间,以内参基因FLuc荧光素值归一化的NLuc荧光素值判定RNA依赖性RNA聚合酶的活性;并在此基础上调整Nsp9~16共转染的剂量,随后再加入不同剂量的Nsp3C、Nsp4及Nsp6,检测RNA依赖性RNA聚合酶的活性。结果显示,不同比例的Nsp7、Nsp8与Nsp12以1∶8∶24进行共转染时,聚合酶活性显著高于对照组(P<0.001);在此基础上,在Nsp3、Nsp4、Nsp6不参与的条件下,当不添加Nsp9时,添加Nsp10~16可以显著提升RdRp活性(P<0.001);在Nsp3和Nsp4参与的条件下,添加Nsp9时,RdRp活性进一步提升(P<0.05)。结果表明,Nsp9在Nsp3和Nsp4存在的情况下,才可以提高SARS-CoV-2的RdRp活性,Nsp9对病毒复制的促进作用可能是建立在双膜囊泡形成的基础上。 展开更多
关键词 sars-cov-2 聚合酶活性报告系统 加帽 DMV
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SARS-CoV-2病毒感染对精子质量的影响
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作者 武龙梅 周瑜琦 +5 位作者 李关健 朱璐 段宗流 汤冬冬 宋兵 朱颍 《中山大学学报(医学科学版)》 北大核心 2025年第4期693-699,共7页
【目的】旨在探究已接种新冠疫苗的COVID-19感染后精液中SARS-CoV-2 RNA的检测情况,并分析感染恢复期不同阶段对精子质量的影响。【方法】于2023年1月至3月就诊安徽医科大学第一附属医院生殖医学中心既往已接种新冠疫苗且近期咽拭子(包... 【目的】旨在探究已接种新冠疫苗的COVID-19感染后精液中SARS-CoV-2 RNA的检测情况,并分析感染恢复期不同阶段对精子质量的影响。【方法】于2023年1月至3月就诊安徽医科大学第一附属医院生殖医学中心既往已接种新冠疫苗且近期咽拭子(包括感染状态)SARS-CoV-2呈阳性的男性患者,留取精液样本,通过RTqPCR方法检测精液SARS-CoV-2病毒RNA存在情况。回顾性分析COVID-19感染恢复期不同阶段对精子质量影响;通过横向比较COVID-19感染恢复<30 d与≥30 d患者精液体积、精子浓度、精子总数、前向运动百分率、畸形率、精子DFI等指标;并进一步纵向自身对照比较未感染COVID-19与感染COVID-19恢复阶段(<30 d与≥30 d)精液质量指标。【结果】在所有纳入研究的205名患者精液样本中均未检测到SARS CoV-2 RNA。此外,无论是横向比较COVID-19感染恢复期不同阶段还是纵向自身对照比较未感染COVID-19与感染COVID-19恢复阶段的精液体积、精子总数、精子畸形率、精子DFI及HDS,两组差异均无统计学意义(P>0.05),而精子前向运动百分率下降,两组差异具有统计学意义(P<0.05)。【结论】对于既往接种新冠疫苗COVID-19感染的患者,SARS-CoV-2病毒不会通过精子性传播,并且COVID-19感染恢复期30 d内弱精子症发生率可能增加,然而这种影响短期内是可逆的。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 精子质量 男性生殖道 sars-cov-2 RNA 不育
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人源性抗SARS-CoV-2单链抗体文库的构建及广谱中和抗体的筛选与鉴定
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作者 尹慧敏 吕海 +3 位作者 迟莹 刘静娴 焦永军 卫平民 《细胞与分子免疫学杂志》 北大核心 2025年第2期154-160,共7页
目的构建人源性抗严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)单链可变片段(scFv)抗体文库,并筛选具有广谱中和活性的抗体,为诊断和治疗制剂的开发提供候选分子。方法从新型冠状病毒感染康复者外周血中分离单个核淋巴细胞(PBMC),提取总RNA... 目的构建人源性抗严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)单链可变片段(scFv)抗体文库,并筛选具有广谱中和活性的抗体,为诊断和治疗制剂的开发提供候选分子。方法从新型冠状病毒感染康复者外周血中分离单个核淋巴细胞(PBMC),提取总RNA,逆转录成cDNA,以此为模板构建人源性抗SARS-CoV-2 scFv抗体文库;利用噬菌体展示技术筛选对SARS-CoV-2 S蛋白具有特异性的scFv抗体。通过序列分析和人源IgG抗体表达,合成IgG全抗体,并评估其对SARS-CoV-2的结合能力及中和活性。结果成功构建了库容量为1.56×10^(7)CFU的SARS-CoV-2人源性scFv抗体文库,筛选出两种特异性scFv抗体;并将scFv抗体表达成IgG形式的全抗体(IgG-A10和IgG-G6),其中IgG-A10对SARS-CoV-2原始株(WT)和奥密克戎亚型变异毒株XBB(XBB)毒株均具有较好中和活性,对奥密克戎BA.2.86变异株的第二代亚分支JN.1(JN.1)毒株中和效果一般。结论本研究从康复者外周血中成功构建了人源性抗SARS-CoV-2 scFv抗体文库,并筛选表达出具有中和活性的抗SARS-CoV-2 IgG抗体,为SARS-CoV-2感染的预防、诊断和治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 sars-cov-2 单链可变片段(scFv) 噬菌体展示技术 中和抗体
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SARS-CoV-2感染导致神经病理性疼痛的线粒体机制
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作者 史舒琦 彭莉萍 +4 位作者 王佳慧 蒋婷婷 熊东林 孙武平 周亚莉 《中国疼痛医学杂志》 北大核心 2025年第9期703-708,共6页
新型冠状病毒引发的全球大流行,不仅严重影响了人类的呼吸系统健康,同时也对神经系统有着潜在影响。研究表明,严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染可能损伤外周神经系统,... 新型冠状病毒引发的全球大流行,不仅严重影响了人类的呼吸系统健康,同时也对神经系统有着潜在影响。研究表明,严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染可能损伤外周神经系统,导致神经病理性疼痛产生,其中线粒体功能障碍被认为是一个重要的机制。因此,本文重点综述SARS-CoV-2感染引发的神经病理性疼痛中涉及的线粒体机制,旨在为探索SARS-CoV-2感染的治疗策略提供新的理论基础。这一研究领域的深入探讨有助于加深对病毒影响神经系统的理解,并为未来疾病治疗和康复提供新的启示。 展开更多
关键词 sars-cov-2 疼痛 神经损伤 线粒体 氧化应激
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蟾酥注射液抗SARS-CoV-2病毒感染的体外活性研究
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作者 常静杰 史鸣飞 +1 位作者 杨杰 陈姣 《南京中医药大学学报》 北大核心 2025年第11期1604-1612,共9页
目的探究蟾酥注射液抗SARS-CoV-2病毒感染的体外活性,研究蟾毒灵是否为其发挥活性的关键成分。方法采用CellTiter-Glo细胞活力检测法测定蟾酥注射液及蟾毒灵抗SARS-CoV-2病毒感染的半数有效浓度(EC_(50));通过qPCR检测蟾酥注射液和蟾毒... 目的探究蟾酥注射液抗SARS-CoV-2病毒感染的体外活性,研究蟾毒灵是否为其发挥活性的关键成分。方法采用CellTiter-Glo细胞活力检测法测定蟾酥注射液及蟾毒灵抗SARS-CoV-2病毒感染的半数有效浓度(EC_(50));通过qPCR检测蟾酥注射液和蟾毒灵对SARS-CoV-2病毒感染的细胞中病毒NP蛋白、干扰素、炎症因子等的mRNA水平的影响;构建细胞-细胞膜融合模型,采用荧光素酶报告基因方法检测蟾酥注射液和蟾毒灵对HEK-293T/HEK-293T-ACE2细胞膜融合的影响。结果蟾酥注射液具有抗SARS-CoV-2病毒感染活性,EC_(50)为85.56 ng·mL^(-1)。蟾酥注射液显著降低SARS-CoV-2感染的Calu-3细胞中病毒NP蛋白的mRNA水平(P<0.05),下调干扰素IFN-λ2/3(P<0.05)以及ISG-15、RIG-I(P<0.0001)的mRNA水平,并能显著降低炎症因子IL-6和TNF-α的mRNA水平(P<0.0001)。蟾毒灵抑制SARS-CoV-2病毒感染细胞的EC_(50)为13.3 nmol·L^(-1),可能为蟾酥注射液抗SARS-CoV-2病毒感染的主要活性成分。蟾酥注射液能显著抑制SARS-CoV-2病毒S蛋白介导的细胞膜融合,从而阻断病毒入侵。结论蟾酥注射液具有体外抗SARS-CoV-2病毒感染的活性,能抑制NP蛋白表达、降低炎症因子水平并阻断膜融合入侵宿主细胞,蟾毒灵可能是其发挥抗SARS-CoV-2作用的关键活性物质。 展开更多
关键词 蟾酥注射液 sars-cov-2 蟾毒灵 抗炎 膜融合
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SARS-CoV-2刺突蛋白受体结合结构域编码基因的体外转录及其在293T细胞中的表达
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作者 周雪 高磊 +3 位作者 张瑾宬 袁思凌 操蓉 刘丽娜 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第3期123-129,共7页
为获得能表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)刺突蛋白受体结合结构域(RBD)的体外转录mRNA,将设计、优化并合成的RBD基因片段插入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建重组表达质粒pcDNA3.1(+)-RBD;重组质粒转染哺乳动物细胞293T后,We... 为获得能表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)刺突蛋白受体结合结构域(RBD)的体外转录mRNA,将设计、优化并合成的RBD基因片段插入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建重组表达质粒pcDNA3.1(+)-RBD;重组质粒转染哺乳动物细胞293T后,Western blot检测重组蛋白RBD的表达;以表达RBD的重组质粒为模板,PCR扩增包含T7启动子的RBD基因片段作为体外转录模板,之后利用T7转录试剂盒体外转录获得修饰的RBD mRNA,添加多聚腺苷酸尾后使用RNA纯化试剂盒进行纯化,纯化后的RBD mRNA转染至293T细胞中,利用Western blot进行目的蛋白表达鉴定。结果显示,编码RBD的重组质粒构建成功并能在293T细胞中表达外源蛋白,体外转录获得修饰的RBD mRNA能在哺乳动物细胞中翻译,表达的RBD蛋白能与抗RBD的单克隆抗体反应,具有免疫反应原性,为SARS-CoV-2 RBD mRNA疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 严重急性呼吸综合征冠状病毒2 刺突蛋白 受体结合结构域 体外转录 真核表达
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SARS-CoV-2重组蛋白疫苗(CHO细胞)体外相对效力双抗体夹心ELISA检测方法建立与验证
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作者 曹莎莎 何鹏 +6 位作者 刘晓雅 刘莹 刘宇 马志桃 韦芬 王佳霁 胡忠玉 《药物分析杂志》 北大核心 2025年第3期452-459,共8页
目的:建立严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2)重组蛋白疫苗(CHO细胞)体外相对效力的双抗体夹心ELISA检测方法,并进行验证。方法:采用基因重组技术制备抗SARS-Co V-2刺突蛋白受体结合区(receptor binding domain,RBD)的人源... 目的:建立严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2)重组蛋白疫苗(CHO细胞)体外相对效力的双抗体夹心ELISA检测方法,并进行验证。方法:采用基因重组技术制备抗SARS-Co V-2刺突蛋白受体结合区(receptor binding domain,RBD)的人源单克隆抗体GH4及CB6。以GH4为包被抗体,HRP标记的CB6(CB6-HRP)为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA法,考察GH4和CB6-HRP的适宜工作浓度。开展方法学验证,验证项目为线性与范围、专属性、精密度(重复性、中间精密度)、准确度和耐用性。采用建立的方法检测3批工艺验证批及22批持续工艺确认批SARS-Co V-2重组蛋白疫苗(CHO细胞)的体外相对效力。结果:GH4及CB6-HRP的适宜工作浓度分别为1000 ng·m L^(-1)和31.25 ng·m L^(-1)。疫苗参考品质量浓度在0.3125~5ng·m L^(-1)范围内与A450呈良好的对数线性关系,回归方程斜率均在0.80~1.25范围内,R2均>0.99;建立的方法可特异性检测SARS-Co V-2重组蛋白疫苗(CHO细胞),与MERS重组蛋白疫苗、流感病毒疫苗、狂犬病毒疫苗及CHO宿主细胞蛋白等均无交叉反应;精密度验证时,重复性的几何变异系数(geometric coefficient of variation,GCV)分布在1.6%~2.4%范围内,中间精密度的GCV在1.2%~2.6%范围内;准确度验证时,回归方程R2为0.9945,斜率为0.9995在0.80~1.25范围内,相对偏倚(relative bias,RB)分布在-4.04%~7.36%范围内;耐用性验证中,不同考察条件下体外相对效力测定值在0.96~1.08范围内。3批工艺验证批SARS-Co V-2重组蛋白疫苗(CHO细胞)体外相对效力均值为1.02,GCV为4.8%;22批持续工艺确认批SARS-Co V-2重组蛋白疫苗(CHO细胞)体外相对效力在0.81~1.23范围内,几何均值为1.04,GCV为4.4%。结论:建立的双抗体夹心ELISA检测方法具有良好的特异性、精密度、准确度及耐受性,可用于SARS-CoV-2重组蛋白疫苗(CHO细胞)体外相对效力检测及质量控制。 展开更多
关键词 严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2 重组蛋白疫苗 酶联免疫吸附法 双抗体夹心法 体外相对效力
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机器学习预测IAV和SARS-CoV-2感染引起心脏并发症中的共同靶点基因及H1N1感染模型验证
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作者 廖元盛 李恒 +5 位作者 廖芸 胡云光 殷安国 孔美君 刘龙丁 张莹 《昆明医科大学学报》 2025年第5期75-88,共14页
目的 预测并初步验证甲型流感病毒(influenza A virus,IAV)和严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染引发心脏并发症的共同潜在关键基因。方法 基于GEO(gene expression omnib... 目的 预测并初步验证甲型流感病毒(influenza A virus,IAV)和严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染引发心脏并发症的共同潜在关键基因。方法 基于GEO(gene expression omnibus)数据库获取心脏并发症差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),采用分层交集策略,首先分别将心脏并发症相关DEGs与两个独立来源的病毒相关基因集(包括GeneCards中与IAV感染相关的3 454个人类基因,以及Human Protein Atlas中与SARS-CoV-2相互作用的333个人类蛋白质编码基因)进行交集分析,随后再将这两个交集的结果进行第二轮交集,进一步确定枢纽基因。采用Lasso回归(lasso regression)、随机森林算法(random forest,RF)和支持向量机算法(support vector machine,SVM)3种机器学习算法对枢纽基因进行筛选。本研究主要采用H1N1病毒感染人心肌细胞系(AC16)和IFITM3-/-基因敲除小鼠模型,对预测基因的表达变化进行体外和体内验证。结果 对3个数据库进行生物信息学分析,筛选出22个枢纽基因。使用3种机器学习算法对枢纽基因进行评估,最终筛选出5个共同的关键基因。随后,通过H1N1感染体外培养的人心肌细胞系(AC16),观察到5种基因的转录水平均呈现出动态变化趋势(P <0.05)。而利用H1N1感染IFITM3-/-基因敲除小鼠的体内实验结果与体外实验结果一致,亦证实这5种基因转录水平均发生动态变化(P <0.05)。结论 通过结合生物信息学分析与机器学习算法,本研究筛选出5个与IAV和SARS-CoV-2感染引起心脏并发症相关的共同关键基因,分别为ACE2、TBK1、NUP210、PUSL1和MEPCE。进一步通过H1N1感染模型的体内和体外实验验证,确认了这些基因均与IAV感染引起的心脏并发症相关。 展开更多
关键词 甲型流感病毒 严重急性呼吸综合征冠状病毒2 心脏病 机器学习
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基于靶点TRPV4的抗SARS-CoV-2中药单体化合物筛选及其作用机制研究
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作者 张诗筠 骆荣波 +9 位作者 孙妍 李赫 樊凌君 钱丙硕 张钧魁 吴佳婧 申蓓蕾 王铁成 夏咸柱 高玉伟 《中国中药杂志》 北大核心 2025年第17期4913-4925,共13页
该研究旨在探讨靶向瞬时受体电位香草酸亚型4(TRPV4)的抗新型冠状病毒(SARS-CoV-2)中药单体化合物筛选及其作用机制。基于预训练蛋白质语言模型ConPLex的机器学习方法预测药物-靶标结合特性,快速筛选靶向TRPV4的中药单体化合物,并按算... 该研究旨在探讨靶向瞬时受体电位香草酸亚型4(TRPV4)的抗新型冠状病毒(SARS-CoV-2)中药单体化合物筛选及其作用机制。基于预训练蛋白质语言模型ConPLex的机器学习方法预测药物-靶标结合特性,快速筛选靶向TRPV4的中药单体化合物,并按算法评分由高至低进行排序。通过细胞计数试剂盒(CCK-8)评估候选中药单体化合物的细胞毒性,并利用间接免疫荧光法(IFA)和蛋白免疫印迹法(Western blot),分析甘草香豆素(GCM)对SARS-CoV-2在非洲绿猴肾细胞(Vero-E6)内复制的影响。应用SARS-CoV-2/C57MA14鼠适应株的BALB/c小鼠感染模型,从存活率、肺组织病毒载量及病理损伤程度等方面评估GCM的体内抗病毒效果。为阐明其分子机制,采用Western blot检测关键信号通路蛋白表达,并通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)定量分析血清中细胞因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C-X-C基序趋化因子10(CXCL10)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的浓度变化。结合分子对接与分子动力学模拟技术,解析GCM与TRPV4蛋白的结合模式。体外实验显示,在15种候选中药单体化合物中,GCM对SARS-CoV-2的抑制呈显著剂量依赖性;动物模型中,该化合物可延长感染小鼠的生存时间,并显著减轻病毒引起的肺部病理损伤。机制研究表明,GCM抑制TRPV4表达,阻断SARS-CoV-2感染触发的核因子κB(NF-κB)核转位过程,进而下调IL-6、TNF-α等促炎因子的转录水平;同时,经其干预后,血清中IL-6、TNF-α、CXCL10、MCP-1等细胞因子的表达均显著降低。分子对接及动力学模拟结果证实,GCM与TRPV4蛋白形成的复合物在结合构象与动态相互作用层面均表现出优异稳定性。研究证实,GCM在体内外模型中均表现出良好的抗SARS-CoV-2活性,不仅能有效抑制病毒复制,同时遏制感染引发的细胞因子风暴。结果表明,GCM是一种具有潜力的抗SARS-CoV-2中药单体化合物,值得进一步深入研究和开发。 展开更多
关键词 瞬时受体电位香草酸亚型4(TRPV4) 新型冠状病毒(sars-cov-2) 机器学习 甘草香豆素 分子动力学模拟
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SARS-CoV-2感染相关性脑炎的临床表现和治疗及病理生理机制研究进展
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作者 陈佳园 刘利民 +1 位作者 刘宏明 熊静 《中华医院感染学杂志》 北大核心 2025年第12期1904-1909,共6页
新型冠状病毒感染(COVID-19)是由严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)引起的传染性疾病。SARS-CoV-2显示出嗜神经和神经侵袭特性。SARS-CoV-2感染相关性脑炎是在SARS-CoV-2急性感染后6周内出现的脑炎。在无明确病原学证据的情况下... 新型冠状病毒感染(COVID-19)是由严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)引起的传染性疾病。SARS-CoV-2显示出嗜神经和神经侵袭特性。SARS-CoV-2感染相关性脑炎是在SARS-CoV-2急性感染后6周内出现的脑炎。在无明确病原学证据的情况下,识别SARS-CoV-2感染相关性脑炎在临床仍然具有挑战性,而SARS-CoV-2感染相关性脑炎也具有独特的病理生理学机制。本文综述了SARS-CoV-2感染相关性脑炎患者的临床症状、脑脊液特点、脑电图、影像学表现、治疗及预后,以及SARS-CoV-2引起脑炎的病理生理机制进展,以提高对SARS-CoV-2感染相关性脑炎的识别和进行及时有效的治疗。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 脑炎 中枢神经系统 治疗 机制 影像学表现
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基于DNA适配体-硫黄素T的传感器用于SARS-CoV-2RBD检测
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作者 刘豪 温晓青 刘海波 《广西大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第2期446-456,共11页
自新型冠状病毒(SARS-CoV-2)暴发以来,快速、准确、安全高效的SARS-CoV-2检测方法在疫情防控中越来越体现出其重要性。RT-PCR、ELISA等传统检测方法难以满足SARS-CoV-2大规模传播的检测需求。荧光生物传感技术具有低成本、生物安全性高... 自新型冠状病毒(SARS-CoV-2)暴发以来,快速、准确、安全高效的SARS-CoV-2检测方法在疫情防控中越来越体现出其重要性。RT-PCR、ELISA等传统检测方法难以满足SARS-CoV-2大规模传播的检测需求。荧光生物传感技术具有低成本、生物安全性高、灵敏度高、选择性优异等优点,是SARS-CoV-2临床诊断的一个潜在方法。运用生物层干涉技术获得SARS-CoV-2 RBD的DNA适配体,并构建基于硫黄素T(ThT)与DNA适配体的生物荧光传感器,用于快速、准确定量检测RBD蛋白,所设计的传感器在0.01 ng/mL~10.00μg/mL范围内呈线性相关,最低检测限达到了0.0057 ng/mL。利用圆二色性光谱和分子对接技术探究了R1和ThT、R1和RBD蛋白分子间相互作用,验证了传感器的设计原理的可行性。 展开更多
关键词 适配体 荧光传感器 分子对接 硫黄素T sars-cov-2 RBD蛋白
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