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TLC/FID分析原油SARA组成方法研究 被引量：8
1
作者 杨佰娟 郑立 +3 位作者 张魁英 崔志松 王小如 黎先春 《石油与天然气化工》 CAS CSCD 2011年第2期201-203,222,共4页
以渤海原油为研究对象,建立原油棒状薄层色谱/氢火焰离子化检测器(TLC/FID)族组分分析方法,对原油的四个族组分(饱和烃、芳烃、胶质、沥青,SARA)进行了分析,并对其影响因素展开次数、点样量、展开剂的干燥方式进行了优化,在优化所得条件... 以渤海原油为研究对象,建立原油棒状薄层色谱/氢火焰离子化检测器(TLC/FID)族组分分析方法,对原油的四个族组分(饱和烃、芳烃、胶质、沥青,SARA)进行了分析,并对其影响因素展开次数、点样量、展开剂的干燥方式进行了优化,在优化所得条件下,方法的精密度RSD值为3.54%,方法重现性RSD值为3.23%。与文献报道方法相比,本文建立的方法,可将原油中的胶质和沥青两个组分分开,更能全面反应原油的族组成成分,具有分析速度快、有机溶剂用量少、操作简单等特点。最后将建立的方法应用到不同来源的原油中,结果令人满意。 展开更多
关键词 sara族组分 原油 TLC/FID分析
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金黄色葡萄球菌毒力调控系统TCRSs和SarA 被引量：5
2
作者 唐俊妮 史贤明 +2 位作者 曾志光 王红宁 胡瑜 《上海交通大学学报（农业科学版）》 2009年第2期171-176,共6页
金黄色葡萄球菌是人和动物重要的病原菌之一,为了适应寄主环境,金黄色葡萄球菌可及时调节毒力基因的表达以提高它的生存能力。金黄色葡萄球菌中主要有两类毒力基因表达的调控系统,它们分别是TCRSs(双组分调控系统)和SarA蛋白家族。TCRS... 金黄色葡萄球菌是人和动物重要的病原菌之一,为了适应寄主环境,金黄色葡萄球菌可及时调节毒力基因的表达以提高它的生存能力。金黄色葡萄球菌中主要有两类毒力基因表达的调控系统,它们分别是TCRSs(双组分调控系统)和SarA蛋白家族。TCRS在原核细菌中包含一个膜传感器和一个反应调控因子,目前已经识别出了16个这样的TCRSs;SarA蛋白家族可分为3个亚类:(1)单结构域类(SarA、SarR、SarT、SarV和SarX);(2)双结构域类(SarS、SarU和SarY);(3)MgrR同系物。这2类毒力调控系统可以同时激活多种毒力基因的表达。本文对这2类调控系统的结构和功能等方面进行综述,并对以后要解决的问题进行了展望。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 TCRSs sara 毒力因子 调控
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表皮葡萄球菌SarA对atlE、lipA和zinC基因表达调控的研究 被引量：3
3
作者 王海蛟 范长胜 +4 位作者 辛及娣 陶菊红 苑兴卉 高山峨 梁国新 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第2期180-186,共7页
表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermids)是一种条件致病菌,SarA(StaphylococcalaccessoryregulatorA)是该菌中一个全局性调控因子,它控制着细胞中许多与毒性相关的基因表达.报道了SarA在转录水平直接调控atlE、lipA和zinC基因的表达.RT... 表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermids)是一种条件致病菌,SarA(StaphylococcalaccessoryregulatorA)是该菌中一个全局性调控因子,它控制着细胞中许多与毒性相关的基因表达.报道了SarA在转录水平直接调控atlE、lipA和zinC基因的表达.RT-PCR和lacZ报告基因的分析结果显示,在表皮葡萄球菌ATCC35984中,SarA对atlE(自溶酶基因)表达起负调控作用,而对lipA(脂肪酶基因)和zinC(膜相关锌金属蛋白酶基因)的表达则有正调控作用.生物信息学分析表明,SarA控制atlE,lipA和zinC3种基因表达可能是通过与被调控基因上游的特定DNA序列的结合来实现的,该DNA结合区保守并富含AT碱基.根据已报道的金黄色葡萄球菌中SarA的结合位点序列,利用Omiga软件分析并推测了SarA结合atlE,lipA和zinC的可能区域.基于SarA是一种多功能的毒素相关调控因子,结果提示,SarA能调控众多因子,可以作为防治表皮葡萄球菌感染的一个药物筛选靶点. 展开更多
关键词 sara 自溶酶基因(atLE) 脂肪酶基因(lipA) 膜相关锌金属蛋白酶基因(zinC) 基因调控 表皮葡萄球菌
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减压渣油与超临界亚组分的元素组成及SARA分析 被引量：7
4
作者 周亚松 陈月珠 +1 位作者 李凌 孙玉华 《石油学报（石油加工）》 EI CAS CSCD 北大核心 1997年第3期1-8,共8页
用正戊烷为溶剂，在超临界条件下将６种国内与２种国外减压渣油分离成不同的宽馏分和窄馏分，测试了它们的残炭值、ＳＡＲＡ及元素组成。结果表明，渣油的残炭值与氢碳比密切相关；各种渣油的元素和化学组成的含量及分布是有差别的：镍... 用正戊烷为溶剂，在超临界条件下将６种国内与２种国外减压渣油分离成不同的宽馏分和窄馏分，测试了它们的残炭值、ＳＡＲＡ及元素组成。结果表明，渣油的残炭值与氢碳比密切相关；各种渣油的元素和化学组成的含量及分布是有差别的：镍倾向于分布在重组分中，孤岛和辽河渣油最为明显；大庆、华北渣油为低硫、高氮原油，氮和硫在渣油中分布平均；胜利、孤岛、沙特和阿曼是含硫原油，Ｎ／Ｓ原子比小于１，氮、硫在渣油中随馏分变重由小到大；大港、辽河渣油的氮大部分富集在重组分中；不同渣油的窄馏分ＳＡＲＡ组成变化规律基本类似。 展开更多
关键词 减压渣油 化学组成 物理性质 sara分析 渣油
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利用同源重组技术敲除金黄色葡萄球菌临床分离株sarA基因 被引量：2
5
作者 余方友 陈坚 +6 位作者 王薇薇 李美兰 黄金伟 陈增强 张雪青 朱涛 瞿涤 《中国卫生检验杂志》 CAS 2009年第1期17-20,共4页
目的:利用同源重组技术敲除金黄色葡萄球菌临床分离株sarA基因。方法:构建含有Em抗性基因(ermB)和sarA基因上、下游同源DNA片段的pBT2-ΔsarA质粒,将pBT2-ΔsarA质粒电转入金黄色葡萄球菌RN4220中,再把pBT2-ΔsarA质粒转入金黄色葡萄球... 目的:利用同源重组技术敲除金黄色葡萄球菌临床分离株sarA基因。方法:构建含有Em抗性基因(ermB)和sarA基因上、下游同源DNA片段的pBT2-ΔsarA质粒,将pBT2-ΔsarA质粒电转入金黄色葡萄球菌RN4220中,再把pBT2-ΔsarA质粒转入金黄色葡萄球菌30临床分离株中,把含重组质粒的金黄色葡萄球菌30临床分离株在42℃条件下振摇培养,筛选金黄色葡萄球菌30菌株的sarA基因缺失可疑突变株(SA30-ΔarlS);对重组到SA30染色体基因组的相应序列进行PCR扩增及DNA测序。结果:成功构建pBT2-ΔsarA质粒,pBT2-ΔsarA质粒被转入金黄色葡萄球菌30后,筛选到可疑突变株,经PCR及DNA测序证实金黄色葡萄球菌30sarA基因被ermB基因置换。结论:利用同源重组技术成功敲除金黄色葡萄球菌30临床分离株sarA基因。 展开更多
关键词 葡萄球菌 金黄色 同源重组 sara基因
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医学教育一席谈——与哈佛医学院Sara Fazio医生谈临床教学 被引量：3
6
作者 曹玮 《医学与哲学（A）》 CSSCI 北大核心 2008年第3期75-76,共2页
关键词 哈佛医学院 sara 临床教学 医学教育 医生 教育事业 陌生感
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SARA、TGF-β/Smad信号通路与腹膜纤维化的基因治疗 被引量：1
7
作者 凌光辉 刘伏友 《中国血液净化》 2008年第3期153-155,162,共4页
长期腹膜透析可导致腹膜纤维化,其主要特征是间皮细胞剥落和细胞外基质（ECM）的异常积聚所致的腹膜增厚,使腹膜透析效率降低。腹膜纤维化的产生是多种因素作用的结果,多种促纤维化细胞因子具有重要的调节作用,其中作用最为关键的是转... 长期腹膜透析可导致腹膜纤维化,其主要特征是间皮细胞剥落和细胞外基质（ECM）的异常积聚所致的腹膜增厚,使腹膜透析效率降低。腹膜纤维化的产生是多种因素作用的结果,多种促纤维化细胞因子具有重要的调节作用,其中作用最为关键的是转化生长因子-β1（TGF-β1）。最近的研究显示, 展开更多
关键词 腹膜纤维化 TGF-Β SMAD信号通路 sara 基因治疗 转化生长因子-β1 促纤维化细胞因子 长期腹膜透析
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SARA疫情对高等教育改革发展的几点启示 被引量：7
8
作者 赵凌冰 《吉林商业高等专科学校学报》 2004年第1期21-23,共3页
SARS疫情对我国各高校的发展产生了巨大的影响,本文从素质教育、网络教育、高校课程建设三方面分析丁SARS对我国高等教育改革发展的影响和启示。
关键词 sara疫情 高等教育 改革 素质教育 网络教育 课程设置 学生 身体素质 心理健康 中国
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奶牛SARA的发生原因及其防治措施 被引量：1
9
作者 杨艳玲 张福寿 《山东畜牧兽医》 2013年第4期85-87,共3页
随着奶牛养殖饲养模式的转变，奶牛亚急性瘤胃酸中毒发生率逐渐升高，导致牛群的淘汰率升高，生产性性能下降，蹄叶炎症、皱胃机能下降、甚至继发脑灰质软化症和肝脓肿等疾病频发，给奶牛业以沉重打击。本文就亚急性瘤胃酸中毒（SARA）... 随着奶牛养殖饲养模式的转变，奶牛亚急性瘤胃酸中毒发生率逐渐升高，导致牛群的淘汰率升高，生产性性能下降，蹄叶炎症、皱胃机能下降、甚至继发脑灰质软化症和肝脓肿等疾病频发，给奶牛业以沉重打击。本文就亚急性瘤胃酸中毒（SARA）的发生原因及其预防措施做一阐述，为实际生产提供科学的理论依据。 展开更多
关键词 奶牛养殖 sara 原因 急性瘤胃酸中毒 防治 脑灰质软化症 饲养模式 生产性
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SarA调控金黄色葡萄球菌生物被膜形成的研究进展 被引量：5
10
作者 郑艳阳 曹凤娇 +2 位作者 明迪 母丹 向华 《中国兽药杂志》 北大核心 2017年第12期62-67,共6页
金黄色葡萄球菌生物被膜的形成是一个多基因和多因子共同调控的过程。葡萄球菌属辅助调节子SarA是金黄色葡萄球菌主要的毒力基因表达调控系统,能直接或间接调控多种生物被膜形成相关基因的表达。本文对SarA的结构及其调控生物被膜形成... 金黄色葡萄球菌生物被膜的形成是一个多基因和多因子共同调控的过程。葡萄球菌属辅助调节子SarA是金黄色葡萄球菌主要的毒力基因表达调控系统,能直接或间接调控多种生物被膜形成相关基因的表达。本文对SarA的结构及其调控生物被膜形成的机制作一综述,以期为深入研究金黄色葡萄球菌的致病机理和开发新的抗生物膜感染策略提供参考。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 sara 生物被膜
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基于SARA组分调和沥青流变性能、粘附性自愈合性能研究 被引量：2
11
作者 何印章 熊坤 +2 位作者 张久鹏 李哲 李岩 《材料导报》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第22期57-64,共8页
现阶段,关于SARA组分对沥青性质和在沥青-集料界面破坏机制及界面粘附性自愈合性能等方面的研究不足,而大批量提取沥青组分较难完成。因此,本研究采用Corbett法对基质沥青进行组分分离并制备了组分调和沥青,借助DSR频率扫描试验分析了S... 现阶段,关于SARA组分对沥青性质和在沥青-集料界面破坏机制及界面粘附性自愈合性能等方面的研究不足,而大批量提取沥青组分较难完成。因此,本研究采用Corbett法对基质沥青进行组分分离并制备了组分调和沥青,借助DSR频率扫描试验分析了SARA组分对流变性能的影响,使用SHRP净吸附试验、拉拔试验研究了SARA组分对沥青粘附性自愈合性能的影响机制,最后借助灰色关联分析和线性相关性分析剖析了组分对其界面性能的影响机制。研究结果表明,沥青质和胶质含量的增加会增大界面的粘附强度,但对界面自愈合性能存在不利影响,其中沥青质影响作用强于胶质。芳香分和饱和分含量的增加会在一定程度上减小界面粘附强度,但其对界面自愈合有促进作用,其富含脂肪族支链小分子,可增强沥青的流动性,促进界面愈合,芳香分的影响高于饱和分。灰色关联和线性相关性分析表明,沥青界面粘附强度和单个组分的相关性低于双组分(轻质组分、重质组分),其界面粘附性自愈合性能和轻质组分、重质组分含量存在较强的线性关系。 展开更多
关键词 路面工程 沥青 粘附性能 sara组分 流变性能
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重组蛋白转导结构域-SARA融合蛋白生物学功能的初步研究 被引量：1
12
作者 加慧卫 黄晨 +3 位作者 李晶 张英起 孙世仁 杜锐 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第6期581-585,共5页
目的初步研究重组蛋白转导结构域(Protein transduction domain,PTD)-SARA融合蛋白(PTD-SARA)抗肾脏纤维化的生物学功能。方法采用免疫细胞化学法检测重组PTD-SARA融合蛋白的穿膜作用;通过显微镜观察人肾小管上皮细胞HK2形态学变化,West... 目的初步研究重组蛋白转导结构域(Protein transduction domain,PTD)-SARA融合蛋白(PTD-SARA)抗肾脏纤维化的生物学功能。方法采用免疫细胞化学法检测重组PTD-SARA融合蛋白的穿膜作用;通过显微镜观察人肾小管上皮细胞HK2形态学变化,Western blot法测定上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和磷酸化Smad3蛋白水平,以比较PTD-SARA融合蛋白和SARA蛋白抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)诱发的肾小管上皮细胞向间质细胞转分化作用。结果重组PTD-SARA融合蛋白可高效地转入细胞胞质与胞核;PTD-SARA融合蛋白与SARA蛋白相比,能更显著地上调E-cadherin蛋白的表达,下调α-SMA和磷酸化Smad3蛋白的表达,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论与SARA蛋白相比,PTD-SARA融合蛋白可以高效地进入细胞胞质及胞核,并能明显地抑制TGF-β1诱发的肾小管上皮细胞向间质细胞转分化作用,为进一步研究重组PTD-SARA融合蛋白防治肾脏纤维化奠定了基础。 展开更多
关键词 sara 蛋白转导结构域 融合蛋白质类 肾 纤维化
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含蛋白转导域的SARA/SBD融合蛋白对腹膜透析大鼠腹膜结构和功能的作用 被引量：1
13
作者 郑永 黄晨 +3 位作者 赵阿丽 王汉民 孙世仁 许国双 《现代生物医学进展》 CAS 2014年第16期3013-3017,共5页
目的:探讨含蛋白转导域的SARA融合蛋白(PTD-SAR/SBD)对腹膜透析大鼠腹膜纤维化的抑制作用。方法:每日腹腔注射4.25%葡萄糖腹膜透析液(PDF)制备腹膜透析大鼠模型。28只Sprague-Dawley大鼠随机分为正常对照组(n=8);腹膜透析模型组(n=10);P... 目的:探讨含蛋白转导域的SARA融合蛋白(PTD-SAR/SBD)对腹膜透析大鼠腹膜纤维化的抑制作用。方法:每日腹腔注射4.25%葡萄糖腹膜透析液(PDF)制备腹膜透析大鼠模型。28只Sprague-Dawley大鼠随机分为正常对照组(n=8);腹膜透析模型组(n=10);PTD-SARA/SBD蛋白干预组(n=10)。4周后行腹膜平衡试验,检测超滤量、葡萄糖吸收率;留取壁层腹膜组织行HE染色;免疫组织化学方法检测大鼠壁层腹膜间皮细胞转分化指标E-cadherin和Twist的表达;Western blotting测定E-cadherin、twist,以及CollagenⅠ、TGF-β1、P-Smad3、t-Smad3的表达。结果:①与正常对照组比较,模型组大鼠壁层腹膜增厚,糖转运率增加,超滤量降低(P<0.01);免疫组织化学与western blotting检测结果显示E-cadherin表达下调,Twist表达上调;CollagenⅠ、P-Smad3、TGF-β1表达增加。②与模型组比较,PTD-SARA/SBD蛋白干预组大鼠壁层腹膜糖转运率降低,超滤量增加(P<0.05);E-cadherin表达上调,Twist表达下调;CollagenⅠ、TGF-β1、P-Smad3表达减少,各组t-Smad3无明显变化。结论:PTD-SARA/SBD融合蛋白通过抑制TGF-β/Smads信号通路部分逆转腹膜间皮细胞转分化从而改善腹膜结构和功能,为防治腹膜透析所致腹膜纤维化奠定基础。 展开更多
关键词 sara 融合蛋白质类 腹膜 纤维化
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万古霉素对MRSA中SarA介导的生物膜形成的影响
14
作者 王馥香 《罕少疾病杂志》 2019年第2期77-78,共2页
目的研究万古霉素对MRSA的SarA基因表达水平和生物膜形成的影响。方法自本院MRSA心内膜炎患者血培养中收集获得MERS菌株957,并以此为母本菌株培养获得系列耐药菌株957-V8、957-V16和957-V32。然后采用荧光定量PCR方法对这四株MRSA菌株... 目的研究万古霉素对MRSA的SarA基因表达水平和生物膜形成的影响。方法自本院MRSA心内膜炎患者血培养中收集获得MERS菌株957,并以此为母本菌株培养获得系列耐药菌株957-V8、957-V16和957-V32。然后采用荧光定量PCR方法对这四株MRSA菌株中生物膜形成相关基因SarA mRNA水平进行检测,并进行生物膜形成试验,在570nm处测量结晶紫染色后生物膜的吸光度,试验均重复3次。结果体外诱导获得的系列耐药菌株957-V8、957-V16和957-V32的SarA基因mRNA水平显著高于原代957菌株相比,而且SarA基因mRNA量随着菌株万古霉素MIC值的升高而升高;四株菌株均可形成生物膜,且诱导菌株957-V8、9527-V16和957-V32生物膜的光密度值显著高于原代菌株957,随着MIC值的升高,菌株生物膜的光密度值逐渐升高。结论万古霉素可以诱导MRSA的生物膜增厚,并增强菌株的耐药性。 展开更多
关键词 万古霉素 MRSA sara 生物膜
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PTD-SARA融合蛋白的表达、纯化及鉴定 被引量：1
15
作者 宋扬 张珍 +1 位作者 张英起 黄晨 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第3期242-245,共4页
目的在大肠杆菌中表达PTD-SARA融合蛋白,并对其进行纯化和鉴定。方法使用大肠杆菌偏爱密码子合成PTD-SARA全长基因,将其克隆入载体pQE-30中,构建重组表达质粒pQE-30-PTD-SARA,转化感受态大肠杆菌M15,IPTG诱导表达。表达产物经Ni2+-NTA... 目的在大肠杆菌中表达PTD-SARA融合蛋白,并对其进行纯化和鉴定。方法使用大肠杆菌偏爱密码子合成PTD-SARA全长基因,将其克隆入载体pQE-30中,构建重组表达质粒pQE-30-PTD-SARA,转化感受态大肠杆菌M15,IPTG诱导表达。表达产物经Ni2+-NTA亲和层析纯化后,进行Western blot鉴定及N-端测序。结果重组表达质粒pQE-30-PTD-SARA经双酶切及测序鉴定证明构建正确。1.0mmol/LIPTG诱导4h,目的蛋白的表达量最高,约占菌体总蛋白的25%,主要以包涵体形式存在。纯化的融合蛋白纯度为94%,浓度为0.2mg/ml,且具有良好的反应原性,N-端有14个氨基酸。结论已成功表达并纯化了PTD-SARA融合蛋白,为其功能的研究奠定了基础,也为临床防治肾脏纤维化提供了一个新的策略。 展开更多
关键词 PTD-sara融合蛋白 表达 纯化 慢性肾病 纤维化
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含蛋白转导域的SARA/SBD融合蛋白的原核表达、纯化及生物学活性鉴定 被引量：1
16
作者 李曼 黄晨 +6 位作者 张伟 王增禄 李晶 杜锐 孙世仁 张鹏 张英起 《生物技术通讯》 CAS 2011年第2期158-162,共5页
目的:SARA/SBD是纤维化形成过程中的负性调节因子。原核表达、纯化含反式激活蛋白(TAT)蛋白转导域(PTD)的TAT PTD-SARA/SBD融合蛋白,并鉴定其生物学活性。方法:将TAT PTD-SARA/SBD基因克隆入带His标签的原核表达载体pET-44a(+)中,转化... 目的:SARA/SBD是纤维化形成过程中的负性调节因子。原核表达、纯化含反式激活蛋白(TAT)蛋白转导域(PTD)的TAT PTD-SARA/SBD融合蛋白,并鉴定其生物学活性。方法:将TAT PTD-SARA/SBD基因克隆入带His标签的原核表达载体pET-44a(+)中,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,表达产物经Ni2+-NTA亲和层析柱纯化后,SDS-PAGE和Western印迹鉴定目的蛋白;用人腹膜间皮细胞系(HPMC),通过免疫细胞化学方法检测其穿膜能力,及与TGF-β1信号通路中Smad2因子的共定位情况。结果:用基因工程方法表达和纯化了TAT PTD-SARA/SBD融合蛋白,目的蛋白约占菌体总蛋白的20%左右,且以可溶形式表达,经Ni2+-NTA纯化后,所获蛋白纯度高于95%(HPLC归一法);功能学实验结果显示该蛋白能穿过胞膜,主要定位于胞核,且与Smad2因子具有核内共定位。结论:表达了TAT PTD-SARA/SBD融合蛋白,该蛋白具有生物学活性。 展开更多
关键词 蛋白转导域 sara/SBD融合蛋白 原核表达 纯化 生物学活性
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金黄色葡萄球菌SarA家族蛋白及其翻译后修饰 被引量：1
17
作者 吴睿睿 朱福兴 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期40-45,共6页
在金黄色葡萄球菌全基因组中发现了一类SarA类似的蛋白家族,是金黄色葡萄球菌生理和毒力主要的调控因子。MgA、SarA和SarZ等蛋白分子中半胱氨酸的磷酸化修饰或氧化还原修饰引起了蛋白质构象的变化,从而调节了金黄色葡萄球菌毒力因子的... 在金黄色葡萄球菌全基因组中发现了一类SarA类似的蛋白家族,是金黄色葡萄球菌生理和毒力主要的调控因子。MgA、SarA和SarZ等蛋白分子中半胱氨酸的磷酸化修饰或氧化还原修饰引起了蛋白质构象的变化,从而调节了金黄色葡萄球菌毒力因子的产生以及细菌对万古霉素的抗性。SarA家族蛋白具有同源性,蛋白翻译后修饰具有相似性,同时蛋白之间又相互作用。 展开更多
关键词 sara家族蛋白 磷酸化 氧化还原修饰 MgrA SarZ
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金黄色葡萄球菌SarA蛋白原核表达及免疫原性研究 被引量：1
18
作者 程旭 杨雨晴 +3 位作者 吴赛男 侯勤龙 李咏梅 韩慧明 《北华大学学报（自然科学版）》 CAS 2021年第1期47-52,共6页
目的构建SarA的原核表达载体,对SarA蛋白免疫原性进行初步研究.方法首先应用生物信息学方法对SarA基因进行分析;以金黄色葡萄球菌基因组为模板,通过PCR扩增、酶切、连接等一系列反应进行原核重组质粒的构建;IPTG诱导原核重组质粒表达,对... 目的构建SarA的原核表达载体,对SarA蛋白免疫原性进行初步研究.方法首先应用生物信息学方法对SarA基因进行分析;以金黄色葡萄球菌基因组为模板,通过PCR扩增、酶切、连接等一系列反应进行原核重组质粒的构建;IPTG诱导原核重组质粒表达,对SarA蛋白进行纯化、浓缩,将浓缩后的蛋白与佐剂混合免疫家兔,收集血清,通过间接ELISA法检测血清抗体效价,并通过Western blot鉴定抗体特异性.结果成功构建重组表达质粒SarA-pET32a(+),通过IPTG诱导表达,获得以可溶形式高效表达的SarA蛋白,分子质量约为32 kDa.用纯化的SarA蛋白免疫家兔,获得了SarA多克隆抗体,其效价为1∶512000.结论成功构建了SarA原核表达载体,且在大肠杆菌细胞中表达;得到了高效价和良好特异性的多克隆血清抗体,为进一步研究抗细菌生物膜疫苗奠定了基础. 展开更多
关键词 sara 原核表达 免疫原性
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SARA低表达对Activin A/Smads环路活性的影响 被引量：1
19
作者 石晓花 王姣琦 +6 位作者 刘洪雨 董玥 纪秋野 崔杨 何金婷 莽靖 徐忠信 《中国实验诊断学》 2019年第7期1207-1210,共4页
目的探讨下调Smad锚捉蛋白(SARA)表达对Activin A/Smads环路活性的影响。方法利用RNA干扰技术,设计靶向大鼠SARA基因的短发卡RNA(shRNA),瞬时转染激活素A(ActA)高表达的大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞。转染48h后倒置荧光显微镜观察转染效率,... 目的探讨下调Smad锚捉蛋白(SARA)表达对Activin A/Smads环路活性的影响。方法利用RNA干扰技术,设计靶向大鼠SARA基因的短发卡RNA(shRNA),瞬时转染激活素A(ActA)高表达的大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞。转染48h后倒置荧光显微镜观察转染效率,实时定量PCR、Western blot检测SARA基因的表达情况。对阳性转染组及阴性转染组细胞换液3h后,Western blot检测Smad3总蛋白及磷酸化蛋白的表达。结果靶向SARA基因的SARA-shRNA及对照NC-shRNA质粒的转染效率均超过70%。转染48h后,SARA基因转录及蛋白水平的表达显著降低。细胞换液3h后,与NC-shRNA组比较SARA-shRNA组Smad3总蛋白及磷酸化蛋白下调44%和57%。结论 SARA基因低表达下调ActA/Smads环路活性。 展开更多
关键词 sara ActA/Smads SMAD3 shRNA
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奶牛SARA状态下LPS易位机理研究进展 被引量：1
20
作者 高景 齐智利 《中国奶牛》 2019年第1期22-25,共4页
长时间高精料饲喂奶牛导致的瘤胃快速发酵,会造成SCFA积累,pH下降,最终导致瘤胃酸中毒;同时瘤胃内革兰氏阴性菌大量裂解,释放脂多糖(LPS)到瘤胃中,导致LPS含量升高。研究表明LPS会破坏瘤胃及肠道上皮屏障,增加上皮通透性,进而LPS会移位... 长时间高精料饲喂奶牛导致的瘤胃快速发酵,会造成SCFA积累,pH下降,最终导致瘤胃酸中毒;同时瘤胃内革兰氏阴性菌大量裂解,释放脂多糖(LPS)到瘤胃中,导致LPS含量升高。研究表明LPS会破坏瘤胃及肠道上皮屏障,增加上皮通透性,进而LPS会移位到血液循环系统。亚急性瘤胃酸中毒(SARA)牛出现的后续症状包括急性期反应、肝脓肿和蹄叶炎,也与LPS从消化道移位到机体内循环有关。因此研究SARA发生时LPS从瘤胃和肠道易位到机体循环的机理,对于深入了解SARA的发病机制,从而有效缓解SARA对机体造成的危害、提高患病动物的治愈率和福利有重要意义,可为后续的SARA防治和治疗奠定理论基础。 展开更多
关键词 sara LPS 易位
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