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优化SARS-CoV-2 S-EABR在293T细胞中的分泌性表达
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作者 姜苏芮 毛彤瑶 +1 位作者 张鹏 段招军 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2024年第5期489-496,共8页
目的通过优化启动子、终止子、信号肽及胞内序列末端氨基酸来增加SARS-CoV-2 S-EABR蛋白在293T细胞系中的分泌性表达。方法首先构建四种含有不同元件(启动子和终止子)组合的PCDNA3.1(-)真核载体质粒(Mb、MS、Ab、AS),插入按照人密码子... 目的通过优化启动子、终止子、信号肽及胞内序列末端氨基酸来增加SARS-CoV-2 S-EABR蛋白在293T细胞系中的分泌性表达。方法首先构建四种含有不同元件(启动子和终止子)组合的PCDNA3.1(-)真核载体质粒(Mb、MS、Ab、AS),插入按照人密码子优化的S-EABR-1目的序列,瞬时转染293T细胞,48 h后收取细胞培养上清液和细胞裂解液,通过Western Blot和ELISA检测上清S蛋白的表达水平。然后选择表达最好的元件组合载体,插入S-EABR-1和S-EABR-2(于S-EABR-1尾部添加4个氨基酸——HSLP)目的序列,比较上清S蛋白的表达水平。最后基于上述表达效果最好的元件组合载体及插入目的序列,构建替换SARS-CoV-2 S蛋白原始信号肽的5种载体质粒(tPA,AZ,IFNα2,HSA,GLUC),比较上清S蛋白表达水平。同时利用计算机模拟SRP54亚基与信号肽核酸序列的分子对接,将对接分值(Docking Score)作为对接评价标准,预测两者的结合情况。结果在293T细胞中,Ab组合的载体分泌表达S-EABR水平最高,产量相较于Mb增加了125%。基于Ab组合载体,S-EABR-2序列表达分泌S-EABR的水平较S-EABR-1增加了约50%,进一步替换成HSA信号肽后的S-EABR表达分泌水平较S蛋白原始信号肽增加了约83%。此外,计算机模拟结果显示HSA与SRP54亚基的对接分值最高,为1505.861。结论通过真核表达元件(启动子、终止子和信号肽)及胞内序列的优化可进一步提高经密码子优化后的S-EABR在293T细胞中的分泌性表达。信号肽与SRP54亚基亲和力的计算模拟对接分值与S-EABR分泌表达水平基本吻合的结果也为后续提高目的基因分泌性表达的信号肽筛选提供了一种设计思路和筛选策略。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 s-eabr 启动子 终止子 信号肽 信号识别颗粒
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