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结核分枝杆菌Rv2005的原核表达以及免疫原性评估 被引量：1
1
作者 夏露 王晓春 +1 位作者 漆志扬 张延鹏 《海南医学院学报》 CAS 北大核心 2024年第23期1784-1791,共8页
目的:构建结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M. tuberculosis)Rv2005载体,进行原核表达以及免疫原性评估研究,为研究新型结核病疫苗筛选优势的靶抗原。方法:设计目的基因Rv2005的特异性引物并进行PCR扩增,依据分子克隆技术构建... 目的:构建结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M. tuberculosis)Rv2005载体,进行原核表达以及免疫原性评估研究,为研究新型结核病疫苗筛选优势的靶抗原。方法:设计目的基因Rv2005的特异性引物并进行PCR扩增,依据分子克隆技术构建重组质粒pET28a-Rv2005,对其进行原核表达,并以镍柱亲和层析法对其进行蛋白纯化。用纯化后rRv2005对中国M. tuberculosis感染者和健康对照者(healthy controls, HCs)外周血进行刺激,以多重微球流式免疫荧光发光法检测其外周血T淋巴细胞产生的相应特异性IFN-γ抗体水平。构建基于TLR4/9激动剂单磷酰脂质A/含非甲基化鸟嘌呤和胞嘧啶二核酸的寡聚脱氧核苷酸序列(CPG ODN)的复合型脂质体佐剂MC,与rRv2005联合免疫C57BL/6小鼠,9周后处死,以酶联免疫吸附实验检测免疫后小鼠血清中的特异性抗原IgG,IgG1,IgG2a的滴度以及免疫后小鼠脾细胞上清液中特异性抗原Th1型细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-2的分泌水平。结果:成功构建了重组质粒pET28aRv2005,以SDS-PAGE和Western blot鉴定其表达结果相符合。经rRv2005刺激后,HCs相比于活动性结核病(ATB)与潜伏性结核病(LTBI)受试者,其外周血T淋巴细胞释放的相应细胞因子水平显著升高,且ATB受试者分泌细胞因子水平最高(P<0.01)。卡介苗(BCG)初免、rRv2005联合佐剂MC免疫的小鼠诱导产生较高的IgG及其亚类水平,IgG2a/IgG1比值>1,趋向于Th1型细胞免疫;BCG初免增强组小鼠脾细胞经PPD和rRv2005刺激后,可诱导释放高水平的抗原特异性IFN-γ、TNF-α及IL-2。结论:rRv2005可以诱导中国结核病感染者外周血T淋巴细胞释放高水平的IFN-γ;rRv2005联合佐剂MC免疫小鼠可以刺激机体产生Th1型细胞免疫;BCG初免、rRv2005/MC增强的免疫方式可能有效弥补BCG保护力下降的缺陷;基于TLR激动剂的复合型佐剂MC具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 rv2005 初免-增强策略 佐剂 免疫原性
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