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营养缺乏条件下rhlAB基因调控鼠李糖脂对铜绿假单胞菌生物被膜形成的影响
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作者 周锦桃 王琳琳 《医学检验与临床》 2025年第5期9-13,共5页
目的:为探讨营养缺乏条件下铜绿假单胞菌rhlAB基因调控鼠李糖脂参与生物被膜形成的机制。方法:制备常规营养肉汤(LB肉汤),然后制备100%、50%、25%的逐倍稀释浓度肉汤作为培养基,分别接种5μL(1%浓度)铜绿假单胞菌野生型菌株(PA01)和rhlA... 目的:为探讨营养缺乏条件下铜绿假单胞菌rhlAB基因调控鼠李糖脂参与生物被膜形成的机制。方法:制备常规营养肉汤(LB肉汤),然后制备100%、50%、25%的逐倍稀释浓度肉汤作为培养基,分别接种5μL(1%浓度)铜绿假单胞菌野生型菌株(PA01)和rhlAB突变菌株(PA01-ΔrhlAB),培养12h,qPCR分别检测rhlAB、algU、algC的mRNA转录水平,同时,检测鼠李糖脂和褐藻胶(alginate)的含量;培养7d,银染法检测生物被膜的量。结果:随着培养基营养浓度的下降,对于PA01,其褐藻胶的含量下降、rhlAB的mRNA转录水平增强以及鼠李糖脂的含量增加(P<0.01);培养7d,生物被膜量也逐渐下降(P<0.01);对于PA01-ΔrhlAB,随着培养基营养浓度的下降,鼠李糖脂的含量也减少(P<0.01);PA01-ΔrhlAB在常规肉汤培养下,分别添加不同浓度鼠李糖脂,当鼠李糖脂浓度<5μM时,褐藻胶及生物被膜均被抑制(P<0.05,P<0.01)。结论:营养缺乏可抑制铜绿假单胞菌生物被膜的形成,其机制可能是营养缺乏增强rhlABmRNA转录水平来促进鼠李糖脂的合成,从而抑制褐藻胶和生物被膜的形成。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 rhlab 鼠李糖脂 生物被膜 营养
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三种组成型启动子调控的鼠李糖脂基因在防御假单胞菌中的异源表达及活性研究 被引量：1
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作者 谢芝玲 陈汉娜 +8 位作者 钟林 徐佳莹 李演 潘登 刘峰 丁学知 夏立秋 张友明 涂强 《激光生物学报》 CAS 2019年第3期229-238,共10页
本研究利用Red/ETDNA重组技术对实验室已有的含鼠李糖基转移酶基因RhlAB的分泌表达载体pBBR1-genta-RhlAB进行修饰,将3种不同强度组成型启动子(Papra、Ptac和PrhaB)成功替换了RhlAB基因在铜绿假单胞菌中的原始启动子,成功获得了表达载体... 本研究利用Red/ETDNA重组技术对实验室已有的含鼠李糖基转移酶基因RhlAB的分泌表达载体pBBR1-genta-RhlAB进行修饰,将3种不同强度组成型启动子(Papra、Ptac和PrhaB)成功替换了RhlAB基因在铜绿假单胞菌中的原始启动子,成功获得了表达载体pBBR1-genta-Papra-RhlAB,pBBR1-kan-Ptac-RhlAB和pBBR1-kan-PrhaB-RhlAB,并将这些表达载体分别在防御假单胞菌Pf-5中异源表达,通过LB培养基发酵42h后,Pf-5/pBBR1-genta-RhlAB的鼠李糖脂产量为17.56mg/L,而Pf-5/pBBR1-genta-Papra-RhlAB,Pf-5/pBBR1-kan-Ptac-RhlAB和Pf-5/pBBR1-kan-PrhaB-RhlAB分别是11.135mg/L,441.135mg/L,557.764mg/L,启动子优化后产量分别是原始启动子的0.63,25.12和31.76倍。对发酵产物进行高效液相色谱-质谱联用技术分析,共检出相对含量变化的4类质核比不同的鼠李糖脂同系物。并通过实时荧光定量PCR检测RhlAB基因的表达量,发现启动子替换为Ptac和PrhaB后RhlAB基因表达量分别是原始启动子的2.16和2.77倍。本研究初步实现了RhlAB基因在Pf-5中的表达,发现组成型启动子Ptac和PrhaB比RhlAB的原始启动子表达效率更高,可为异源合成鼠李糖脂提供重要参考。 展开更多
关键词 rhlab P.protegensPf-5 Red/ET同源重组 鼠李糖脂
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