目的通过对比分析“亚洲型”DEL孕妇与真阴性孕妇的临床抗-D同种免疫发生率,评估“亚洲型”DEL孕妇免于抗-D监测及RhD免疫球蛋白注射的可行性。方法收集2022年12月至2024年8月期间在本院就诊的165例经盐水法初筛为RhD阴性的孕妇作为研...目的通过对比分析“亚洲型”DEL孕妇与真阴性孕妇的临床抗-D同种免疫发生率,评估“亚洲型”DEL孕妇免于抗-D监测及RhD免疫球蛋白注射的可行性。方法收集2022年12月至2024年8月期间在本院就诊的165例经盐水法初筛为RhD阴性的孕妇作为研究对象。采用吸收放散试验、DEL基因分型和基因测序等技术将孕妇分为“亚洲型”DEL组和真阴性组。在获得知情同意的前提下,本研究对“亚洲型”DEL孕妇实施以下临床管理方案:免除常规抗-D检测、免于RhD免疫球蛋白注射和孕妇输注RhD阳性红细胞,待产后送检胎儿新生儿溶血病(hemolytic disease of the fetus and newborn,HDFN)检测。对真阴性孕妇实施常规管理方案。观察对比2组的同种免疫和HDFN发生情况。结果在165例初筛RhD阴性孕妇中,经血清学检测和基因分型鉴定,最终确认42例为“亚洲型”DEL、9例为D变异型和114例为真阴性。在42例“亚洲型”DEL孕妇中,3例因接受RhD免疫球蛋白注射而导致HDFN检测阳性;其余39例在充分告知风险后免除抗-D检测,未接受RhD免疫球蛋白预防,新生儿出生后HDFN检测均阴性。真阴性组中,20例检测到抗-D,其中6例HDFN检测阳性。1例“亚洲型”DEL孕妇在输注2单位RhD阳性红细胞后,未出现RhD同种免疫反应。统计结果显示,“亚洲型”DEL孕妇发生抗-D同种免疫的风险显著低于真阴性孕妇(P<0.05)。结论“亚洲型”DEL孕妇可免于常规抗-D检测,无需常规预防性RhD免疫球蛋白注射。展开更多
目的使用我们前期建立的RhD变异型个体分型策略,对广州地区50例RhD变异型标本进行分型,为RhD变异型个体的输血和孕期检测策略提供指导。方法收集2024年6月至2024年8月在广州血液中心进行RhD阴性确认的RhD变异型标本50例,采用2种抗-D试剂...目的使用我们前期建立的RhD变异型个体分型策略,对广州地区50例RhD变异型标本进行分型,为RhD变异型个体的输血和孕期检测策略提供指导。方法收集2024年6月至2024年8月在广州血液中心进行RhD阴性确认的RhD变异型标本50例,采用2种抗-D试剂对Rh血型系统D抗原进行血清学检测,并使用包含9种单克隆抗-D的D-Screen试剂盒对D抗原表位进一步检测。提取基因组DNA,应用高分辨熔解曲线法(HRM)检测“亚洲型”DEL等位基因(RHD^(*)1227A),采用多重连接探针扩增技术(MLPA)和Sanger测序法对RHD基因进行基因分型。结果在50例RhD变异型标本中,应用HRM法检出17例基因型为“亚洲型”DEL的标本,占比34.0%(17/50),其中13例RHD^(*)DEL1/01N.01、4例RHD^(*)DEL1/DEL1。余下标本使用D-screen抗原表位检测试剂盒检出DVI格局标本11例,占比22.0%(11/50);通过D-screen抗原表位初筛联合6号外显子Sanger测序检出5例RHD^(*)weak partial 15/01N.01,占比10.0%(5/50);应用MLPA联合Sanger测序检出,2例RHD^(*)DVI.3/DEL1,占比4.0%(2/50),RHD^(*)weak D type18/01N.04、RHD^(*)weak D type 72/01N.01、RHD^(*)weak D type 95/DEL1、RHD^(*)weak D type 114/DEL1、RHD^(*)weak D type 136/DEL1、RHD^(*)weak D type 147/01N.01、RHD^(*)496G/496G、RHD^(*)536C/01N.01、RHD^(*)689A/689A、RHD^(*)689A/DEL1、RHD^(*)DEL32/DEL1、RHD^(*)DV.1/01N.01、RHD^(*)DV.5/01N.01、RHD^(*)01.01/01N.01和RHD^(*)01/01N.01各1例。结论采用我们前期建立的血型血清学与分子生物学相结合的方法对50例RhD变异型个体进行分型,为RhD变异型患者临床精准输血和RhD变异型孕妇是否需要注射抗-D免疫球蛋白提供指导。展开更多
目的:探讨血清学结合分子生物学在鉴定RhD阴性及D变异血型中的重要意义。方法:采用盐水法对医院2021年5月—2023年12月的54380例标本进行RhD初筛;采用间接抗人球蛋白试验对初筛阴性的标本进行阴性确认和抗体筛选;采用抗C、抗E标准试剂进...目的:探讨血清学结合分子生物学在鉴定RhD阴性及D变异血型中的重要意义。方法:采用盐水法对医院2021年5月—2023年12月的54380例标本进行RhD初筛;采用间接抗人球蛋白试验对初筛阴性的标本进行阴性确认和抗体筛选;采用抗C、抗E标准试剂进行C、E抗原检测;采用吸收放散试验筛选DEL型;采用聚合酶链式反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法进行RHD基因分型,并对其10个外显子序列进行扩增;采用Sanger法对血清学与PCR-SSP结果不一致或基因扩增格局特殊的标本进行测序。结果:在54380例标本中检出251例RhD阴性标本及3例弱D(IgM抗-D<3+)标本,经阴性确认IgG抗-D阳性12例,占初筛阴性样本的4.78%;抗筛阳性4例,经鉴定均为抗-D。254例标本可划分为8种表型,以cde表型最多,占比59.84%(152/254);其次是Cde,占比27.95%(71/254);cDe最少见,仅有1例。吸收放散试验共筛选出39例DEL变异型,占初筛阴性样本的15.35%;其中38例为CDe表型,1例为cDe表型。分子生物学试验结果显示,254例标本中,仅178例完全缺失RHD基因,占比70.08%;剩余76例中共检测出9种RHD变异类型。其中最常见的为RHD*DEL1(c.1227G>A),发生频率约为0.07%(40/54380);其次为RHD-CE(2-9)-D,发生频率约为0.03%(18/54380)。DVI type3和weak D type15为该人群第三常见的基因型,发生频率约为0.01%。另外还发现2例RHD*711DELC基因型和3种罕见RHD基因类型:RHD-CE(2-7)-D、weak D type 1(c.809T>G)和RHD*970del3,976del16,均只有1例。本研究还发现了2例RHD*01/RHD*01N.01杂合型,其中1例血清学为弱D,经测序在其第8内含子上的1154-31位点发生了T>C的突变,该突变并未被国际输血学会数据库收录,其血清学意义不明。而另1例的血清学为阴性,经RHD外显子测序并未发现相应的突变,具体机制有待进一步研究。结论:本研究通过血清学与分子生物学联用的方法,检测出研究人群独特的RHD基因类型,进一步丰富了沈阳地区的RHD等位基因库,在准确鉴定血型、保障患者输血安全方面具有重要意义,有利于提高临床精准输血管理水平。展开更多
目的对1例血型血清学RhD为弱凝集的受试者进行分子生物学分析,明确其抗原减弱原因。方法选择2023年深圳市出关体检血型血清学检测为弱D的1例体检人员作为研究对象,采用序列特异性引物-聚合酶链式反应(SSP-PCR)对RhD,RhC,RhE基因型进行检...目的对1例血型血清学RhD为弱凝集的受试者进行分子生物学分析,明确其抗原减弱原因。方法选择2023年深圳市出关体检血型血清学检测为弱D的1例体检人员作为研究对象,采用序列特异性引物-聚合酶链式反应(SSP-PCR)对RhD,RhC,RhE基因型进行检测,使用Sanger测序法对RhD,RhC,RhE基因序列进行测序分析。结果该受试者与微柱凝集法抗-D为弱凝集,盐水试管法抗-D结果为阴性,不规则抗体筛查与直接抗人球蛋白试验结果均为阴性。Rhesus盒检测结果为上游RhD阳性,表明至少存在1段为部分D等位基因,或者下游RhD至少存在1段为部分D等位基因。基因测序结果提示该样本在第9外显子出现插入信号,根据NCBI genebank比对,该突变符合RhD*weak D type 2,GenBank:OM925755.1。结论该受试者血型血清学检测结果为弱D,主要原因可能为RhD外显子9第1碱基出现C碱基插入引发基因突变,致使外显子第一个氨基酸由甘氨酸翻译为丙氨酸,并引发后续基因错配导致氨基酸翻译错乱,从而使RhD血型抗原表达变弱。展开更多
文摘目的通过对比分析“亚洲型”DEL孕妇与真阴性孕妇的临床抗-D同种免疫发生率,评估“亚洲型”DEL孕妇免于抗-D监测及RhD免疫球蛋白注射的可行性。方法收集2022年12月至2024年8月期间在本院就诊的165例经盐水法初筛为RhD阴性的孕妇作为研究对象。采用吸收放散试验、DEL基因分型和基因测序等技术将孕妇分为“亚洲型”DEL组和真阴性组。在获得知情同意的前提下,本研究对“亚洲型”DEL孕妇实施以下临床管理方案:免除常规抗-D检测、免于RhD免疫球蛋白注射和孕妇输注RhD阳性红细胞,待产后送检胎儿新生儿溶血病(hemolytic disease of the fetus and newborn,HDFN)检测。对真阴性孕妇实施常规管理方案。观察对比2组的同种免疫和HDFN发生情况。结果在165例初筛RhD阴性孕妇中,经血清学检测和基因分型鉴定,最终确认42例为“亚洲型”DEL、9例为D变异型和114例为真阴性。在42例“亚洲型”DEL孕妇中,3例因接受RhD免疫球蛋白注射而导致HDFN检测阳性;其余39例在充分告知风险后免除抗-D检测,未接受RhD免疫球蛋白预防,新生儿出生后HDFN检测均阴性。真阴性组中,20例检测到抗-D,其中6例HDFN检测阳性。1例“亚洲型”DEL孕妇在输注2单位RhD阳性红细胞后,未出现RhD同种免疫反应。统计结果显示,“亚洲型”DEL孕妇发生抗-D同种免疫的风险显著低于真阴性孕妇(P<0.05)。结论“亚洲型”DEL孕妇可免于常规抗-D检测,无需常规预防性RhD免疫球蛋白注射。
文摘目的分析湖北省十堰市中心血站血型血清学室间质量评价(external quality assessment,EQA)结果,及时发现问题并制订相应改进措施,提高血型血清学检测及分析能力。方法整理2016—2022年13次EQA回执报告,结合《年度室间质评(EQA)总结报告》,收集各检测项目与参考答案不符合产生的原因。结果ABO正、反定型符合率为100%(78/78);RhD血型鉴定符合率87.2%(34/39);直接抗人球蛋白试验符合率为100%(39/39);抗体筛选和鉴定符合率为87.2%(68/78);交叉配血符合率为97.4%(114/117)。血型血清学EQA整体符合率为94.9%(333/351),结果满意12次,有待改进1次,其中10次Z值为0,“20N2”Z值为0.2、“21N2”Z值为0.7,“22N1”Z值为2.5,2020—2022年Z值有上升趋势。结论世界卫生组织(World Health Organization,WHO)中国地区血型血清学EQA活动检测难度系数逐年提高,检测人员只有不断加强血型血清学检测理论学习,掌握新技术、新方法并结合运用,才能对日常工作中临床疑难结果做出准确判断,为患者提供科学、合理、安全、有效的血液输注。
文摘目的使用我们前期建立的RhD变异型个体分型策略,对广州地区50例RhD变异型标本进行分型,为RhD变异型个体的输血和孕期检测策略提供指导。方法收集2024年6月至2024年8月在广州血液中心进行RhD阴性确认的RhD变异型标本50例,采用2种抗-D试剂对Rh血型系统D抗原进行血清学检测,并使用包含9种单克隆抗-D的D-Screen试剂盒对D抗原表位进一步检测。提取基因组DNA,应用高分辨熔解曲线法(HRM)检测“亚洲型”DEL等位基因(RHD^(*)1227A),采用多重连接探针扩增技术(MLPA)和Sanger测序法对RHD基因进行基因分型。结果在50例RhD变异型标本中,应用HRM法检出17例基因型为“亚洲型”DEL的标本,占比34.0%(17/50),其中13例RHD^(*)DEL1/01N.01、4例RHD^(*)DEL1/DEL1。余下标本使用D-screen抗原表位检测试剂盒检出DVI格局标本11例,占比22.0%(11/50);通过D-screen抗原表位初筛联合6号外显子Sanger测序检出5例RHD^(*)weak partial 15/01N.01,占比10.0%(5/50);应用MLPA联合Sanger测序检出,2例RHD^(*)DVI.3/DEL1,占比4.0%(2/50),RHD^(*)weak D type18/01N.04、RHD^(*)weak D type 72/01N.01、RHD^(*)weak D type 95/DEL1、RHD^(*)weak D type 114/DEL1、RHD^(*)weak D type 136/DEL1、RHD^(*)weak D type 147/01N.01、RHD^(*)496G/496G、RHD^(*)536C/01N.01、RHD^(*)689A/689A、RHD^(*)689A/DEL1、RHD^(*)DEL32/DEL1、RHD^(*)DV.1/01N.01、RHD^(*)DV.5/01N.01、RHD^(*)01.01/01N.01和RHD^(*)01/01N.01各1例。结论采用我们前期建立的血型血清学与分子生物学相结合的方法对50例RhD变异型个体进行分型,为RhD变异型患者临床精准输血和RhD变异型孕妇是否需要注射抗-D免疫球蛋白提供指导。
文摘目的:探讨血清学结合分子生物学在鉴定RhD阴性及D变异血型中的重要意义。方法:采用盐水法对医院2021年5月—2023年12月的54380例标本进行RhD初筛;采用间接抗人球蛋白试验对初筛阴性的标本进行阴性确认和抗体筛选;采用抗C、抗E标准试剂进行C、E抗原检测;采用吸收放散试验筛选DEL型;采用聚合酶链式反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法进行RHD基因分型,并对其10个外显子序列进行扩增;采用Sanger法对血清学与PCR-SSP结果不一致或基因扩增格局特殊的标本进行测序。结果:在54380例标本中检出251例RhD阴性标本及3例弱D(IgM抗-D<3+)标本,经阴性确认IgG抗-D阳性12例,占初筛阴性样本的4.78%;抗筛阳性4例,经鉴定均为抗-D。254例标本可划分为8种表型,以cde表型最多,占比59.84%(152/254);其次是Cde,占比27.95%(71/254);cDe最少见,仅有1例。吸收放散试验共筛选出39例DEL变异型,占初筛阴性样本的15.35%;其中38例为CDe表型,1例为cDe表型。分子生物学试验结果显示,254例标本中,仅178例完全缺失RHD基因,占比70.08%;剩余76例中共检测出9种RHD变异类型。其中最常见的为RHD*DEL1(c.1227G>A),发生频率约为0.07%(40/54380);其次为RHD-CE(2-9)-D,发生频率约为0.03%(18/54380)。DVI type3和weak D type15为该人群第三常见的基因型,发生频率约为0.01%。另外还发现2例RHD*711DELC基因型和3种罕见RHD基因类型:RHD-CE(2-7)-D、weak D type 1(c.809T>G)和RHD*970del3,976del16,均只有1例。本研究还发现了2例RHD*01/RHD*01N.01杂合型,其中1例血清学为弱D,经测序在其第8内含子上的1154-31位点发生了T>C的突变,该突变并未被国际输血学会数据库收录,其血清学意义不明。而另1例的血清学为阴性,经RHD外显子测序并未发现相应的突变,具体机制有待进一步研究。结论:本研究通过血清学与分子生物学联用的方法,检测出研究人群独特的RHD基因类型,进一步丰富了沈阳地区的RHD等位基因库,在准确鉴定血型、保障患者输血安全方面具有重要意义,有利于提高临床精准输血管理水平。
文摘目的对1例血型血清学RhD为弱凝集的受试者进行分子生物学分析,明确其抗原减弱原因。方法选择2023年深圳市出关体检血型血清学检测为弱D的1例体检人员作为研究对象,采用序列特异性引物-聚合酶链式反应(SSP-PCR)对RhD,RhC,RhE基因型进行检测,使用Sanger测序法对RhD,RhC,RhE基因序列进行测序分析。结果该受试者与微柱凝集法抗-D为弱凝集,盐水试管法抗-D结果为阴性,不规则抗体筛查与直接抗人球蛋白试验结果均为阴性。Rhesus盒检测结果为上游RhD阳性,表明至少存在1段为部分D等位基因,或者下游RhD至少存在1段为部分D等位基因。基因测序结果提示该样本在第9外显子出现插入信号,根据NCBI genebank比对,该突变符合RhD*weak D type 2,GenBank:OM925755.1。结论该受试者血型血清学检测结果为弱D,主要原因可能为RhD外显子9第1碱基出现C碱基插入引发基因突变,致使外显子第一个氨基酸由甘氨酸翻译为丙氨酸,并引发后续基因错配导致氨基酸翻译错乱,从而使RhD血型抗原表达变弱。
