目的:探讨血清学结合分子生物学在鉴定RhD阴性及D变异血型中的重要意义。方法:采用盐水法对医院2021年5月—2023年12月的54380例标本进行RhD初筛;采用间接抗人球蛋白试验对初筛阴性的标本进行阴性确认和抗体筛选;采用抗C、抗E标准试剂进...目的:探讨血清学结合分子生物学在鉴定RhD阴性及D变异血型中的重要意义。方法:采用盐水法对医院2021年5月—2023年12月的54380例标本进行RhD初筛;采用间接抗人球蛋白试验对初筛阴性的标本进行阴性确认和抗体筛选;采用抗C、抗E标准试剂进行C、E抗原检测;采用吸收放散试验筛选DEL型;采用聚合酶链式反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法进行RHD基因分型,并对其10个外显子序列进行扩增;采用Sanger法对血清学与PCR-SSP结果不一致或基因扩增格局特殊的标本进行测序。结果:在54380例标本中检出251例RhD阴性标本及3例弱D(IgM抗-D<3+)标本,经阴性确认IgG抗-D阳性12例,占初筛阴性样本的4.78%;抗筛阳性4例,经鉴定均为抗-D。254例标本可划分为8种表型,以cde表型最多,占比59.84%(152/254);其次是Cde,占比27.95%(71/254);cDe最少见,仅有1例。吸收放散试验共筛选出39例DEL变异型,占初筛阴性样本的15.35%;其中38例为CDe表型,1例为cDe表型。分子生物学试验结果显示,254例标本中,仅178例完全缺失RHD基因,占比70.08%;剩余76例中共检测出9种RHD变异类型。其中最常见的为RHD*DEL1(c.1227G>A),发生频率约为0.07%(40/54380);其次为RHD-CE(2-9)-D,发生频率约为0.03%(18/54380)。DVI type3和weak D type15为该人群第三常见的基因型,发生频率约为0.01%。另外还发现2例RHD*711DELC基因型和3种罕见RHD基因类型:RHD-CE(2-7)-D、weak D type 1(c.809T>G)和RHD*970del3,976del16,均只有1例。本研究还发现了2例RHD*01/RHD*01N.01杂合型,其中1例血清学为弱D,经测序在其第8内含子上的1154-31位点发生了T>C的突变,该突变并未被国际输血学会数据库收录,其血清学意义不明。而另1例的血清学为阴性,经RHD外显子测序并未发现相应的突变,具体机制有待进一步研究。结论:本研究通过血清学与分子生物学联用的方法,检测出研究人群独特的RHD基因类型,进一步丰富了沈阳地区的RHD等位基因库,在准确鉴定血型、保障患者输血安全方面具有重要意义,有利于提高临床精准输血管理水平。展开更多
目的研究9例罕见RhD变异型的分子机制及其D抗原表位和蛋白结构。方法在深圳地区210644名无偿献血者中筛选得到RhD变异型标本9例。采用常规血清学方法对9例标本进行Rh分型,间接抗球蛋白试验(IAT)确认RhD抗原以及抗体筛查。D-screen试剂...目的研究9例罕见RhD变异型的分子机制及其D抗原表位和蛋白结构。方法在深圳地区210644名无偿献血者中筛选得到RhD变异型标本9例。采用常规血清学方法对9例标本进行Rh分型,间接抗球蛋白试验(IAT)确认RhD抗原以及抗体筛查。D-screen试剂分析标本的RhD抗原表位。分别利用序列特异性引物聚合酶联反应(PCR-SSP)法和Sanger测序方法分析RHD基因杂合性和RHD基因编码区及其侧翼区域序列。利用PROVEAN、SIFT、PolyPhen-2和MutationTaster软件分析预测突变对RhD蛋白质功能的影响。使用Robetta服务器和Swiss-PdbViewer 4.1.0进行RhD蛋白模型构建。结果9例标本的RHD基因型分别为:RHD^(*)weak D type 25、RHD^(*)weak D type 50、RHD^(*)weak D type 95、RHD*weak D type 12、RHD^(*)weak D type 128和4个新的RHD等位基因。生物信息学软件和三维结构预测结果显示突变影响了蛋白质的结构和功能。结论鉴定了5个罕见的RhD变异型和4个新的RHD等位基因。这些RhD变异型的表型和基因型结果丰富了RHD等位基因库的研究数据。通过对RhD抗原的生物信息学分析,有助于进一步研究RHD基因突变对蛋白结构和功能的影响。展开更多
文摘目的:探讨血清学结合分子生物学在鉴定RhD阴性及D变异血型中的重要意义。方法:采用盐水法对医院2021年5月—2023年12月的54380例标本进行RhD初筛;采用间接抗人球蛋白试验对初筛阴性的标本进行阴性确认和抗体筛选;采用抗C、抗E标准试剂进行C、E抗原检测;采用吸收放散试验筛选DEL型;采用聚合酶链式反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法进行RHD基因分型,并对其10个外显子序列进行扩增;采用Sanger法对血清学与PCR-SSP结果不一致或基因扩增格局特殊的标本进行测序。结果:在54380例标本中检出251例RhD阴性标本及3例弱D(IgM抗-D<3+)标本,经阴性确认IgG抗-D阳性12例,占初筛阴性样本的4.78%;抗筛阳性4例,经鉴定均为抗-D。254例标本可划分为8种表型,以cde表型最多,占比59.84%(152/254);其次是Cde,占比27.95%(71/254);cDe最少见,仅有1例。吸收放散试验共筛选出39例DEL变异型,占初筛阴性样本的15.35%;其中38例为CDe表型,1例为cDe表型。分子生物学试验结果显示,254例标本中,仅178例完全缺失RHD基因,占比70.08%;剩余76例中共检测出9种RHD变异类型。其中最常见的为RHD*DEL1(c.1227G>A),发生频率约为0.07%(40/54380);其次为RHD-CE(2-9)-D,发生频率约为0.03%(18/54380)。DVI type3和weak D type15为该人群第三常见的基因型,发生频率约为0.01%。另外还发现2例RHD*711DELC基因型和3种罕见RHD基因类型:RHD-CE(2-7)-D、weak D type 1(c.809T>G)和RHD*970del3,976del16,均只有1例。本研究还发现了2例RHD*01/RHD*01N.01杂合型,其中1例血清学为弱D,经测序在其第8内含子上的1154-31位点发生了T>C的突变,该突变并未被国际输血学会数据库收录,其血清学意义不明。而另1例的血清学为阴性,经RHD外显子测序并未发现相应的突变,具体机制有待进一步研究。结论:本研究通过血清学与分子生物学联用的方法,检测出研究人群独特的RHD基因类型,进一步丰富了沈阳地区的RHD等位基因库,在准确鉴定血型、保障患者输血安全方面具有重要意义,有利于提高临床精准输血管理水平。
文摘目的研究9例罕见RhD变异型的分子机制及其D抗原表位和蛋白结构。方法在深圳地区210644名无偿献血者中筛选得到RhD变异型标本9例。采用常规血清学方法对9例标本进行Rh分型,间接抗球蛋白试验(IAT)确认RhD抗原以及抗体筛查。D-screen试剂分析标本的RhD抗原表位。分别利用序列特异性引物聚合酶联反应(PCR-SSP)法和Sanger测序方法分析RHD基因杂合性和RHD基因编码区及其侧翼区域序列。利用PROVEAN、SIFT、PolyPhen-2和MutationTaster软件分析预测突变对RhD蛋白质功能的影响。使用Robetta服务器和Swiss-PdbViewer 4.1.0进行RhD蛋白模型构建。结果9例标本的RHD基因型分别为:RHD^(*)weak D type 25、RHD^(*)weak D type 50、RHD^(*)weak D type 95、RHD*weak D type 12、RHD^(*)weak D type 128和4个新的RHD等位基因。生物信息学软件和三维结构预测结果显示突变影响了蛋白质的结构和功能。结论鉴定了5个罕见的RhD变异型和4个新的RHD等位基因。这些RhD变异型的表型和基因型结果丰富了RHD等位基因库的研究数据。通过对RhD抗原的生物信息学分析,有助于进一步研究RHD基因突变对蛋白结构和功能的影响。
