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rhBMP-7缓释微球的制备及其对人牙周膜干细胞增殖分化的影响
1
作者 李帅 吴红 +2 位作者 吴家媛 侯立鹏 倪龙兴 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 北大核心 2010年第5期245-249,共5页
目的:制备一种具有良好缓释功能和降解性的rhBMP-7载体材料,并观察其对牙周膜干细胞增殖分化的影响。方法:采用复乳-溶剂蒸发技术制备缓释rhBMP-7的3-羟基丁酸酯与3-羟基戊酸酯的共聚物(PHBV)的载体微球,测定微球的粒径和形态,载药率,... 目的:制备一种具有良好缓释功能和降解性的rhBMP-7载体材料,并观察其对牙周膜干细胞增殖分化的影响。方法:采用复乳-溶剂蒸发技术制备缓释rhBMP-7的3-羟基丁酸酯与3-羟基戊酸酯的共聚物(PHBV)的载体微球,测定微球的粒径和形态,载药率,体外释放率,将其释放液与人牙周膜干细胞共培养,观察其对细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响。结果:微球形态均匀圆整,平均粒径为(50±12)μm,载药率为(0.67±0.27)%,体外释放1d为(17.22±0.94)%,累计释放量不断增加,56d时达到(52.75±4.67)%。与空白对照组相比,微球释放液可促进细胞增殖和碱性磷酸酶活性(P<0.05),且7d后的释放液对细胞的影响随时间增加逐渐加强(P<0.05)。结论:载有rhBMP-7的微球具有较好的缓释作用和生物活性,是一种较为理想的生长因子载体材料和缓释系统。 展开更多
关键词 rhbmp-7 3-羟基丁酸酯与3-羟基戊酸酯共聚物 微球 牙周膜干细胞 碱性磷酸酶
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rhBMP-7促进大鼠颅骨缝牵张成骨的实验研究 被引量：3
2
作者 张慧 沈庆冉 +2 位作者 肖迪 陈建伟 邹淑娟 《现代口腔医学杂志》 CAS CSCD 2013年第5期280-282,共3页
目的观察人重组骨形成蛋白-7(rhBMP-7)对大鼠颅骨矢状缝牵张成骨的影响。方法建立大鼠颅骨矢状缝扩张培养模型,运用组织学及免疫组织化学技术,观察加入rhBMP-7后,受力骨缝中的新骨形成及细胞增殖核抗原(PCNA)的表达,同时检测培养液中AL... 目的观察人重组骨形成蛋白-7(rhBMP-7)对大鼠颅骨矢状缝牵张成骨的影响。方法建立大鼠颅骨矢状缝扩张培养模型,运用组织学及免疫组织化学技术,观察加入rhBMP-7后,受力骨缝中的新骨形成及细胞增殖核抗原(PCNA)的表达,同时检测培养液中ALP的活性变化。结果在加入rhBMP-7的作用下,受力骨缝内成骨反应活跃,PCNA阳性表达细胞明显增多(P<0.05),ALP活性也显著增强(P<0.05)。结论外源性BMP-7有诱导骨缝成骨细胞增殖与分化、从而促进骨缝牵张时新骨的形成。 展开更多
关键词 骨缝牵张成骨 人重组骨形成蛋白-7 碱性磷酸酶
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重组人骨形态发生蛋合7、转化生长因子β_1对兔脂肪基质细胞体外成骨潜能的初步实验研究 被引量：4
3
作者 郭洪刚 刘静 +1 位作者 Yong Soon Chiong 刘海峰 《中国骨与关节损伤杂志》 2007年第11期922-924,共3页
目的分离兔脂肪基质细胞并诱导培养其成骨表型,为扩增种子细胞提供实验依据。方法获取兔脂肪组织,胶原酶消化得到脂肪基质细胞,进行原代培养,消化传代后诱导培养,设置含重组人骨形态发生蛋白7(rhBMP-7)、转化生长因子β1(TGF-β1)的改... 目的分离兔脂肪基质细胞并诱导培养其成骨表型,为扩增种子细胞提供实验依据。方法获取兔脂肪组织,胶原酶消化得到脂肪基质细胞,进行原代培养,消化传代后诱导培养,设置含重组人骨形态发生蛋白7(rhBMP-7)、转化生长因子β1(TGF-β1)的改良成骨诱导化培养组、常规成骨诱导培养组及对照非成骨诱导培养组,绘制生长曲线并对其成骨表型进行鉴定。结果与常规成骨诱导化方式相比,rhBMP-7、TGF-β1能明显促进的脂肪基质细胞增殖,并促使其向成骨细胞演变,碱性磷酸酶及VonKossa染色强阳性,群体倍增时间为32h;对照组未显示成骨细胞方向分化。结论采用多因子的成骨诱导培养利于脂肪基质细胞的增殖及诱导分化,是扩增组织工程种子细胞的有效方法。 展开更多
关键词 rhbmp-7 TGF—β1 脂肪基质细胞 诱导成骨
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人重组骨形成蛋白-7对高糖诱导的肾系膜细胞转化生长因子-β_1及结缔组织生长因子表达的影响 被引量：1
4
作者 杜月光 万海同 李芳芳 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第22期3308-3310,共3页
目的探讨人重组骨形成蛋白-7(rhBMP-7)对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CT-GF)基因表达及细胞外基质(ECM)成分Ⅳ型胶原(ColⅣ)和纤维黏连蛋白(FN)分泌的影响。方法体外培养大鼠肾小球系膜细... 目的探讨人重组骨形成蛋白-7(rhBMP-7)对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CT-GF)基因表达及细胞外基质(ECM)成分Ⅳ型胶原(ColⅣ)和纤维黏连蛋白(FN)分泌的影响。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分为四组:正常对照组(DMEM培养基含1 000 mg/L葡萄糖)、高糖组(DMEM培养基含4 500 mg/L葡萄糖)、rhBMP-7低剂量组(DMEM培养基含4 500 mg/L葡萄糖+50 nmol/L rhBMP-7)、rhBMP-7高剂量组(DMEM培养基含4 500 mg/L葡萄糖+100 nmol/L rhBMP-7)。RT-PCR技术检测TGF-β1和CTGF基因表达水平,ELISA技术检测上清液中TGFβ1、ColⅣ、FN含量。结果 高糖组系膜细胞TGF-β1和CTGF mRNA水平明显高于正常对照组(P<0.01),TGF-β1、ColⅣ和FN分泌增多,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);与高糖组比较,rhBMP-7不同剂量(50、100 ng/m l)TGF-β1和CTGFmRNA表达明显降低,培养上清中TGF-β1、ColⅣ及FN分泌量亦明显减少,且差异显著(P<0.05)。结论 RhBMP-7通过抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1、CTGF基因表达和ECM的分泌可能起到抗纤维化作用。 展开更多
关键词 rhbmp-7 转化生长因子-β1 结缔组织生长因子 细胞外基质
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重组人骨形态发生蛋白-7与脱钙骨基质复合物双重骨诱导作用的生物学评价 被引量：7
5
作者 王敏 韩金祥 《生物技术通讯》 CAS 2004年第2期146-148,共3页
将不同剂量的重组人骨形态发生蛋白-7(rhBMP-7)与脱钙骨基质(DBM)分别复合后,植入小鼠股部内侧肌间隙,三周后取材,通过组织学检查、碱性磷酸酶(ALP)及钙含量的测定比较各组的骨诱导活性。结果显示,三组复合物均有骨组织生成,中、高剂量... 将不同剂量的重组人骨形态发生蛋白-7(rhBMP-7)与脱钙骨基质(DBM)分别复合后,植入小鼠股部内侧肌间隙,三周后取材,通过组织学检查、碱性磷酸酶(ALP)及钙含量的测定比较各组的骨诱导活性。结果显示,三组复合物均有骨组织生成,中、高剂量组可见骨小梁、板层骨和原始骨髓腔,血管和骨髓丰富;低剂量组的成骨量明显少于中、高剂量组,且新骨的成熟度低于其他两组,DBM少部分吸收;单独植入rhBMP-7组有编织骨形成;而DBM组可见成骨细胞的聚集。rhBMP-7/DBM复合组在ALP和Ca含量水平上与同等剂量的两对照组相比均有显著性差异(P<0.01),而rhBMP-7三种剂量之间均有显著性差异(P<0.01)。这充分说明DBM作为rhBMP-7的合适载体,具有缓释作用,且二者复合可起到双重骨诱导活性;而且rhBMP-7的骨诱导活性具有一定的剂量依赖性。 展开更多
关键词 重组人骨形态发生蛋白-7 rhbmp-7 脱钙骨基质 DBM 骨诱导 剂量依赖性 载体
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离子交换色谱法对大肠杆菌表达的人重组骨形态发生蛋白-7的纯化
6
作者 王雪 宋长征 《生物技术通讯》 CAS 2004年第2期131-134,共4页
重组大肠杆菌高量表达重组人骨形态发生蛋白-7(rhBMP-7),每升培养液约得到湿菌体3g,其中目的蛋白约占菌体总蛋白量的40%。裂解离心,用低浓度变性剂洗涤初步纯化包涵体,上清中无目的蛋白损失;将包涵体溶解于高浓度变性剂溶液中,目的蛋白... 重组大肠杆菌高量表达重组人骨形态发生蛋白-7(rhBMP-7),每升培养液约得到湿菌体3g,其中目的蛋白约占菌体总蛋白量的40%。裂解离心,用低浓度变性剂洗涤初步纯化包涵体,上清中无目的蛋白损失;将包涵体溶解于高浓度变性剂溶液中,目的蛋白纯度提高到60%;然后在不同条件下用离子交换色谱法对变性状态下的蛋白质进行纯化,绝大部分杂蛋白被除去,目的蛋白纯度达95%以上;改变条件,可以减少rhBMP-7损失;用Westernblot对目的蛋白进行特异性鉴定。 展开更多
关键词 离子交换色谱法 大肠杆菌 表达 人 洗脱 包涵体 重组 人骨形态发生蛋白-7 rhbmp-7
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重组人骨形态发生蛋白-2/7融合基因的构建及其在大肠杆菌中的表达和初步活性测定 被引量：6
7
作者 刘礼初 梁国栋 +5 位作者 杜靖远 付士红 陈飞 郑启新 肖宝筠 侯云德 《同济医科大学学报》 CSCD 1999年第4期292-295,共4页
构建重组人骨形态发生蛋白－２／７融合体， 研究其在大肠杆菌中的表达及生物学活性。利用ＤＮＡ 重组技术，将编码人骨形态发生蛋白－２ （ＢＭＰ－２） 成熟肽的０．３６ ｋｂ 基因片段与编码人骨形态发生蛋白－７ （ＢＭＰ－７） 成... 构建重组人骨形态发生蛋白－２／７融合体， 研究其在大肠杆菌中的表达及生物学活性。利用ＤＮＡ 重组技术，将编码人骨形态发生蛋白－２ （ＢＭＰ－２） 成熟肽的０．３６ ｋｂ 基因片段与编码人骨形态发生蛋白－７ （ＢＭＰ－７） 成熟肽的０．４４ｋｂ 基因片段连接，得到重组人骨形态发生蛋白－２／７ 融合基因； 经测序鉴定后，将其克隆到表达载体ｐＢＶ２２２中，转化大肠杆菌ＤＨ５α， 温度诱导表达。表达蛋白经初步纯化后测定其对培养小鼠成骨样细胞增殖、分化及碱性磷酸酶活性的影响。克隆质粒转化的工程菌，经４２℃诱导４～６ ｈ 后，高效表达重组人骨形态发生蛋白－２／７， 在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上出现一新的蛋白带， 分子量约２９ ｋｕ，约占菌体总蛋白的２０％ ，表达蛋白以包涵体的形式存在，经初步纯化、裂解、复性后的ＢＭＰ－２／７ 蛋白具有促进成骨样细胞分化、增殖及增加碱性磷酸酶活性的作用。ＢＭＰ－２／７ 融合基因的构建和表达。 展开更多
关键词 骨形态发生蛋白 融合基因 构建 表达 大肠杆菌
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重组人骨形态发生蛋白-7体内外生物学活性研究 被引量：1
8
作者 王敏 韩金祥 《药物生物技术》 CAS CSCD 2004年第3期141-145,共5页
采用体外、体内两种方法同时测定原核表达重组人BMP 7(rhBMP 7)的生物学活性 ,建立rhBMP 7活性测定的标准并为推广其临床应用提供依据。在体外 ,PNPP底物比色法和MTT比色法结果表明 ,10倍、10 0倍稀释上清组与细胞共同培养 72h后碱性磷... 采用体外、体内两种方法同时测定原核表达重组人BMP 7(rhBMP 7)的生物学活性 ,建立rhBMP 7活性测定的标准并为推广其临床应用提供依据。在体外 ,PNPP底物比色法和MTT比色法结果表明 ,10倍、10 0倍稀释上清组与细胞共同培养 72h后碱性磷酸酶 (ALP)水平和活细胞增殖数明显高于阴性对照组 (P <0 .0 5 ) ,而与标准品无显著性差异 (P >0 .0 5 )。在体内 ,将rhBMP 7植入小鼠肌间隙后 3周 ,见软骨岛和编织骨生成 ;而将rhBMP 7与胶原载体复合后植入 ,可见大量骨小梁、骨髓腔和板层骨 ,血管和骨髓丰富 ;成骨率均为8/ 8。ALP水平和钙含量 ,rhBMP 7组与标准品组相比 ,无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;复合组则明显高于单独植入rhBMP 7和胶原两组 (P <0 .0 5 )。 展开更多
关键词 重组人骨形态发生蛋白-7 生物学活性 碱性磷酸酶 活细胞增殖 钙含量
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人骨形态发生蛋白-7在人骨肉瘤细胞U2-OS中的表达
9
作者 薛俊英 付加芳 +1 位作者 韩金祥 王世立 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第4期381-385,共5页
目的探讨人骨肉瘤细胞U2-OS表达重组人骨形态发生蛋白-7(recombinant human bone morphogenetic protein-7,rhBMP-7)的可行性。方法将hBMP-7成熟肽基因片段克隆至载体pcDNA3.1上,构建真核表达质粒pcDNA3.1-rhBMP-7。利用Lipofectamine 2... 目的探讨人骨肉瘤细胞U2-OS表达重组人骨形态发生蛋白-7(recombinant human bone morphogenetic protein-7,rhBMP-7)的可行性。方法将hBMP-7成熟肽基因片段克隆至载体pcDNA3.1上,构建真核表达质粒pcDNA3.1-rhBMP-7。利用Lipofectamine 2000将重组质粒转染至U2-OS细胞中,采用实时荧光定量PCR及Western blot法检测细胞中hBMP-7基因mRNA和rhBMP-7的表达。结果真核组表达质粒pcDNA3.1-rhBMP-7经NdeⅠ和EcoRⅤ双酶切及测序鉴定证明构建正确。pcDNA3.1-rhBMP-7质粒转染的U2-OS细胞中hBMP-7基因mRNA和rhBMP-7的表达水平均明显高于pcDNA3.1载体转染的细胞(P<0.05)。结论成功构建了hBMP-7基因的重组表达质粒,并在U2-OS细胞中成功表达,为进一步研究hBMP-7的制备方法和建立新的表达系统奠定了基础。 展开更多
关键词 人骨形态发生蛋白-7 U2-OS细胞 基因重组 基因表达
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