目的:探讨昼夜节律因子基因——核受体亚家族1 D组成员1和2(nuclear receptor subfamily 1group D members 1 and 2,NR1D1和NR1D2;分别编码REV-ERBα和REV-ERBβ蛋白)在自然衰老小鼠血管中的表达变化及对血管重塑的影响。方法:(1)将6月...目的:探讨昼夜节律因子基因——核受体亚家族1 D组成员1和2(nuclear receptor subfamily 1group D members 1 and 2,NR1D1和NR1D2;分别编码REV-ERBα和REV-ERBβ蛋白)在自然衰老小鼠血管中的表达变化及对血管重塑的影响。方法:(1)将6月龄小鼠设为青年组,24月龄小鼠设为老年组,每组各6只。称取腓肠肌、脾和胸腺重量并计算相应指数;苏木精-伊红、Masson、油红O、衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-Gal)和二氢乙啶染色观察血管病理改变;采用RT-qPCR和Western blot方法检测血管组织中衰老标志物、昼夜节律因子和核因子κB(nuclear factor-κB.NF-κB)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLPR3)通路关键因子的表达水平。(2)体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC),用过氧化氢(hydrogen peroxide,H_(2)O_(2))诱导建立衰老细胞模型,并用REV-ERBs激动剂SR9009干预,检测衰老标志物、REV-ERBs及NF-κB/NLPR3通路关键因子的表达。结果:与青年组相比,老年组小鼠体重显著升高,骨骼肌、脾、胸腺重量及其指数显著下降(P<0.05)。老年组小鼠血管中膜厚度增加,纤维化面积、脂质沉积、SA-β-Gal阳性面积、活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量和CD68表达均显著升高(P<0.05);老年组小鼠血管组织REV-ERBs的mRNA和蛋白水平显著上调(P<0.05),磷酸化NF-κB和NLRP3蛋白水平,以及白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α的mRNA表达水平也显著升高(P<0.05)。H_(2)O_(2)可诱导HUVEC衰老,SR9009能显著降低衰老细胞SA-β-Gal阳性率和ROS含量,抑制NF-κB/NLRP3炎症通路相关因子表达(P<0.05)。结论:REV-ERBs可能通过调控NF-κB/NLRP3炎症通路激活,促进血管内皮细胞炎症,进而参与衰老小鼠血管重塑过程。展开更多
