大肠杆菌RecQ解旋酶的生物学活性分析 被引量：6

1

作者 骆衡 陈祥 +2 位作者 段丽霞 许庆贺 许厚强 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1143-1150,共8页

RecQ家族解旋酶是DNA解旋酶中高度保守的一个重要家族,在维持染色体的稳定性中起着重要的作用.人类RecQ家族解旋酶突变会导致几种与癌症有关的疾病.本研究旨在诱导大肠杆菌RecQ解旋酶体外表达,并应用生物化学和生物物理学技术研究大肠杆... RecQ家族解旋酶是DNA解旋酶中高度保守的一个重要家族,在维持染色体的稳定性中起着重要的作用.人类RecQ家族解旋酶突变会导致几种与癌症有关的疾病.本研究旨在诱导大肠杆菌RecQ解旋酶体外表达,并应用生物化学和生物物理学技术研究大肠杆菌RecQ解旋酶的生物学活性.体外诱导表达获得纯度达90%以上并具有高活性的大肠杆菌重组RecQ解旋酶,其可溶性好;经生物学活性分析显示具有DNA结合活性、ATP依赖的DNA解链活性、DNA依赖的ATP酶活性.较之双链DNA(dsDNA),大肠杆菌RecQ解旋酶更容易与单链DNA(ssDNA)结合(P<0.01),但与长度不同的dsDNA的结合特性有差异(P<0.01)而与ssDNA没有差异(P>0.05);大肠杆菌RecQ解旋酶对3种dsDNA的解链速率不同(P<0.05);大肠杆菌RecQ解旋酶的ATP酶活性与辅助因子ssDNA长度也呈正相关(P<0.01).这些研究结果将有助于阐明大肠杆菌RecQ解旋酶的分子作用机制,并为研究RecQ解旋酶家族其它成员的结构与功能提供帮助。 展开更多

关键词 大肠杆菌 recq解旋酶 纯化 生物学活性

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抗RecQ解旋酶单克隆抗体的制备、鉴定及应用 被引量：3

2

作者 张荣红 贾铁文 +2 位作者 廉芳 刘杰麟 周孟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期169-174,共6页

目的制备抗RecQ解旋酶单克隆抗体(m Ab),鉴定其生物学特性并开展其对肿瘤细胞中RecQ解旋酶的检测。方法以纯化鉴定后的重组大肠杆菌RecQ解旋酶免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗RecQ解旋酶m Ab。用秋水仙素阻断法对杂交瘤细胞进行染... 目的制备抗RecQ解旋酶单克隆抗体(m Ab),鉴定其生物学特性并开展其对肿瘤细胞中RecQ解旋酶的检测。方法以纯化鉴定后的重组大肠杆菌RecQ解旋酶免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗RecQ解旋酶m Ab。用秋水仙素阻断法对杂交瘤细胞进行染色体核型分析,用间接ELISA检测m Ab的免疫球蛋白(Ig)亚型与效价,用Western blot法和荧光偏振技术鉴定m Ab的生物学特性,使用间接免疫荧光技术检测m Ab与MDA-MB-231乳腺癌细胞中BLM、RecQ4和RecQ5的作用。使用免疫组织化学染色法分析该m Ab与K562肿瘤细胞及其干细胞中RecQ解旋酶的结合。结果获得能稳定分泌抗RecQ解旋酶m Ab的杂交瘤细胞株6H5,染色体数目在94~104,抗体亚型为Ig G1型,腹水效价为1×10-7。该m Ab能特异性结合大肠杆菌RecQ解旋酶,抑制其与DNA的结合,并能识别BLM、RecQ4和RecQ5解旋酶,还可敏锐检测K562肿瘤细胞与肿瘤干细胞中RecQ解旋酶的表达。结论成功制备获得效价高、特异性强的抗RecQ解旋酶m Ab。 展开更多

关键词 recq解旋酶 单克隆抗体 制备 鉴定 应用

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耐辐射球菌recQ双突变株的构建及逆境分析 被引量：1

3

作者 黄丽芬 张韶文 +2 位作者 华孝挺 高冠军 华跃进 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期205-209,共5页

RecQ解螺旋酶是生物有机体在进化中高度保守的SF1超级家族解螺旋酶的一个亚族,它对维持基因组的稳定性有重要的作用。耐辐射球菌野生型菌株R1有两个具有特殊结构的解螺旋酶DR1289和DR2444,运用PCR突变法克隆具有自身groEL启动子、KAT启... RecQ解螺旋酶是生物有机体在进化中高度保守的SF1超级家族解螺旋酶的一个亚族,它对维持基因组的稳定性有重要的作用。耐辐射球菌野生型菌株R1有两个具有特殊结构的解螺旋酶DR1289和DR2444,运用PCR突变法克隆具有自身groEL启动子、KAT启动子与卡那霉素抗性基因、氯霉素抗性基因融合的DNA片段反向重组到基因组中,首次构建并鉴定了卡那霉素抗性完全突变株ΔDR1289,氯霉素抗性完全突变株ΔDR2444,双突变株ΔrecQ。辐射条件下和H2O2氧化压力下突变株生存率结果表明:ΔDR2444与R1存活率趋势线基本一致,而ΔDR1289和ΔrecQ双突变株较为敏感。根据上述结果推测,DR1289是一个对R1保持极端抗性的必须基因,而DR2444则是极端抗性的非必须基因。 展开更多

关键词 耐辐射球菌 recq 突变

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解旋酶RECQ1和细胞核相关抗原Ki-67在脑胶质瘤组织中的表达及相关性 被引量：5

4

作者 郭成永 梁朝辉 +3 位作者 魏可欣 孙国柱 焦保华 赵宗茂 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期3259-3260,共2页

目的分析解旋酶RECQ1和细胞核相关抗原Ki-67在脑胶质瘤组织中的表达及其相关性。方法选取该院神经外科收治的脑胶质瘤手术治疗患者80例,根据病理学分级分为Ⅰ~Ⅱ级44例,Ⅲ~Ⅳ级36例,另外选取正常脑组织20例,利用免疫组化法检测RECQ1、Ki... 目的分析解旋酶RECQ1和细胞核相关抗原Ki-67在脑胶质瘤组织中的表达及其相关性。方法选取该院神经外科收治的脑胶质瘤手术治疗患者80例,根据病理学分级分为Ⅰ~Ⅱ级44例,Ⅲ~Ⅳ级36例,另外选取正常脑组织20例,利用免疫组化法检测RECQ1、Ki-67的表达情况,计算RECQ1、Ki-67表达的相关性。结果 1RECQ1、Ki-67在正常脑组织中表达呈阴性,在胶质瘤组织表达呈阳性;RECQ1、Ki-67在Ⅰ~Ⅱ级胶质瘤组织中多为低表达,在Ⅲ~Ⅳ级胶质瘤组织中多为高表达;2RECQ1在正常脑组织中无表达,Ⅰ~Ⅱ级胶质瘤组织RECQ1表达率与Ⅲ~Ⅳ级胶质瘤组织比较明显降低(P<0.05);3Ki-67在正常脑组织组织中无表达,Ⅰ~Ⅱ级胶质瘤组织RECQ1表达率为75%,与Ⅲ~Ⅳ级胶质瘤组织比较明显降低(P<0.05);4胶质瘤组织中RECQ1和Ki-67表达均为阳性的有57例(71.3%),均为阴性的有14例(17.5%)。RECQ1阳性但Ki-67阴性的有4例(5%),RECQ1阴性但Ki-67阳性的有5例(6.2%),RECQ1和Ki-67表达呈正相关(r=0.768,P<0.01)。结论 RECQ1和Ki-67的表达随着脑胶质瘤组织恶性程度的增高而升高,且两者正相关。 展开更多

关键词 脑胶质瘤 解旋酶recq1 KI-67 相关性

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有限稀释法制备RecQ解旋酶单克隆抗体1C1及鉴定 被引量：2

5

作者 张荣红 贾铁文 +1 位作者 何志旭 刘杰麟 《贵州医科大学学报》 CAS 2019年第2期130-135,共6页

目的:通过有限稀释法制备抗RecQ单克隆抗体(m Ab),鉴定其生物学特性。方法:以纯化鉴定后的重组大肠杆菌RecQ解旋酶免疫Balb/c小鼠,融合免疫小鼠的脾细胞及SP2/0骨髓瘤细胞,有限稀释法筛选杂交瘤细胞,制备m Ab;使用间接ELISA法鉴定单克... 目的:通过有限稀释法制备抗RecQ单克隆抗体(m Ab),鉴定其生物学特性。方法:以纯化鉴定后的重组大肠杆菌RecQ解旋酶免疫Balb/c小鼠,融合免疫小鼠的脾细胞及SP2/0骨髓瘤细胞,有限稀释法筛选杂交瘤细胞,制备m Ab;使用间接ELISA法鉴定单克隆抗体亚型、效价,Western-Blot法测定单克隆抗体特异性;将m Ab与RecQ解旋酶结合后,观察m Ab对RecQ解旋酶活性的阻断作用。结果:获得1株能稳定分泌抗RecQ解旋酶单克隆抗体的杂交瘤细胞株1C1,该杂交瘤细胞染色体数目在94～104; 1C1分泌的单克隆抗体类型为Ig G1型,1C1株所得上清液和腹水中抗体效价分别为1×10-3和1×10-5,该单克隆抗体可特异性结合RecQ,并可抑制RecQ解旋酶的结合DNA活性。结论:成功制备1株抗RecQ m Ab,效价高、特异性强。 展开更多

关键词 recq解旋酶 单克隆抗体 制备 鉴定 有限稀释法

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人类RecQ解旋酶在DNA损伤修复通路中的作用 被引量：4

6

作者 肖芸 张爱华 《癌变·畸变·突变》 CAS CSCD 2010年第2期157-160,共4页

人类RecQ解旋酶是一种多功能DNA解旋酶,在DNA损伤修复及维护基因组稳定性中起着重要作用。本文综合介绍了RecQ解旋酶的结构与生物学特性及其在多条DNA损伤修复通路中的作用,以及RecQ解旋酶在疾病治疗中的应用前景和人类RecQ解旋酶缺陷... 人类RecQ解旋酶是一种多功能DNA解旋酶,在DNA损伤修复及维护基因组稳定性中起着重要作用。本文综合介绍了RecQ解旋酶的结构与生物学特性及其在多条DNA损伤修复通路中的作用,以及RecQ解旋酶在疾病治疗中的应用前景和人类RecQ解旋酶缺陷与肿瘤、遗传性疾病、环境相关疾病的关系。 展开更多

关键词 recq解旋酶 DNA损伤修复 疾病

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RecQ酵母解旋酶:DNA修复,基因组稳定性和衰老的线索 被引量：1

7

作者 李星慧 秦娇琴 +9 位作者 贾春媛 何本进 杜建财 杨帆 原慧萍 朱小泉 唐雷 孙亮 张毓洪 杨泽 《中国老年保健医学》 2015年第5期6-9,共4页

解旋酶是一类能解开核苷酸双链的酶,它广泛存在于从病毒到人类等多种生物体中。自1976年人类在大肠杆菌（Esherichia Coli E.coli）中发现了第一个解旋酶,至今已有上百种解旋酶被发现,而且这一酶家族成员还在不断扩大。经过多年的研究,... 解旋酶是一类能解开核苷酸双链的酶,它广泛存在于从病毒到人类等多种生物体中。自1976年人类在大肠杆菌（Esherichia Coli E.coli）中发现了第一个解旋酶,至今已有上百种解旋酶被发现,而且这一酶家族成员还在不断扩大。经过多年的研究,人们发现解旋酶具有多种功能,在细胞内它们参与DNA复制、修复、转录重组以及RNA接拼、核糖体组装、蛋白质翻译、端粒稳定。最近, 展开更多

关键词 recq酵母解旋酶 DNA 基因组 衰老

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recql4基因的结构及其蛋白功能的研究进展

8

作者 郭建国 卢卫红 孙野青 《药物生物技术》 CAS CSCD 2009年第3期279-282,286,共5页

recql4(recQ protein-like 4)是RecQ螺旋酶家族的一个成员,这一家族在维持基因的稳定性中起重要作用,在人类中发现,它的突变可以引起一种常染色体隐性遗传病Rothmund-Thomson Syndrome(RTS),通过研究发现该蛋白在DNA复制和DNA断裂修复... recql4(recQ protein-like 4)是RecQ螺旋酶家族的一个成员,这一家族在维持基因的稳定性中起重要作用,在人类中发现,它的突变可以引起一种常染色体隐性遗传病Rothmund-Thomson Syndrome(RTS),通过研究发现该蛋白在DNA复制和DNA断裂修复过程中有重要作用,但精确分子机制还不是很清楚,对于这一基因的研究工作在几个课题组相继展开,现对此基因做一综述。 展开更多

关键词 recq蛋白-like4 Rothmund-Thomson综合症 DNA复制 DSB修复

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雷帕霉素对胶质瘤患者瘤体解旋酶RECQ1表达的影响研究

9

作者 郭成永 梁朝辉 +3 位作者 魏可欣 孙国柱 焦保华 赵宗茂 《中国生化药物杂志》 CAS 北大核心 2014年第7期138-140,共3页

目的探讨雷帕霉素对脑胶质瘤患者瘤体解旋酶RECQ1(Tumor helicase RECQ1)表达的影响。方法选取河北医科大学第二医院神经外科收治的脑胶质瘤患者50例,随机分为2组,其中对照组25例,予常规手术治疗;实验组25例,先予以雷帕霉素胶囊,1 mg,1... 目的探讨雷帕霉素对脑胶质瘤患者瘤体解旋酶RECQ1(Tumor helicase RECQ1)表达的影响。方法选取河北医科大学第二医院神经外科收治的脑胶质瘤患者50例,随机分为2组,其中对照组25例,予常规手术治疗;实验组25例,先予以雷帕霉素胶囊,1 mg,1次/天口服,连续服用14天,停药后1周行手术治疗。术中取胶质瘤组织样本,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术和Western blot技术检测瘤体解旋酶RECQ1 mRNA和蛋白质表达。结果对照组患者胶质瘤组织瘤体解旋酶RECQ1 mRNA表达较实验组胶质瘤组织明显升高,对照组光密度值为(1.657±0.748),而实验组光密度值为(1.059±0.894),统计分析结果显示,差异有统计学意义(P<0.05);所有组织中瘤体解旋酶RECQ1蛋白均有表达,但实验组患者的胶质瘤组织中的瘤体解旋酶RECQ1蛋白表达(0.952±0.021)明显低于对照组(1.211±0.024),差异有统计学意义(P<0.05)。结论雷帕霉素胶囊能够降低解旋酶RECQ1mRNA表达,能够抑制脑胶质肿瘤细胞DNA的复制,有效杀灭癌细胞,控制脑胶质瘤的发展,改善预后,对临床具有指导意义,值得临床推广。 展开更多

关键词 雷帕霉素 胶质瘤 recq1

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抗RecQ解旋酶单克隆抗体6H5在几种肿瘤细胞中的初步应用

10

作者 张荣红 廉芳 +3 位作者 周孟 贾铁文 何志旭 刘杰麟 《贵州医科大学学报》 CAS 2018年第10期1209-1216,共8页

目的:制备抗RecQ解旋酶单克隆抗体(6H5抗体),鉴定其生物学特性并开展其对肿瘤细胞及肿瘤干细胞中RecQ解旋酶的检测。方法:在Balb/c小鼠腹腔接种杂交瘤细胞6H5后收集腹水,ELISA法鉴定腹水中6H5抗体,间接免疫荧光技术检测6H5抗体与乳腺癌... 目的:制备抗RecQ解旋酶单克隆抗体(6H5抗体),鉴定其生物学特性并开展其对肿瘤细胞及肿瘤干细胞中RecQ解旋酶的检测。方法:在Balb/c小鼠腹腔接种杂交瘤细胞6H5后收集腹水,ELISA法鉴定腹水中6H5抗体,间接免疫荧光技术检测6H5抗体与乳腺癌细胞MDA-MB-435、人肾癌细胞GRC-1、人舌癌细胞Tca8113中BLM、RecQ4和RecQ5的结合;以6H5抗体作为一抗,免疫组织化学染色法分析Jurkat、MDA-MB-435肿瘤细胞及肿瘤干细胞中RecQ解旋酶的表达水平。结果:经鉴定,小鼠腹水中6H5抗体阳性,该抗体能识别不同肿瘤细胞株中的BLM、RecQ4和RecQ5解旋酶,还可敏锐检测Jurkat、MDA-MB-435肿瘤细胞与肿瘤干细胞中RecQ解旋酶的表达; RecQ解旋酶在Jurkat肿瘤干细胞中表达水平明显高于Jurkat肿瘤细胞,而在MDA-MB-435肿瘤干细胞表达水平则低于MDA-MB-435肿瘤细胞,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论:RecQ家族解旋酶可以作为多种肿瘤细胞及肿瘤干细胞表面标志物的备选指标。 展开更多

关键词 recq解旋酶 单克隆抗体 免疫荧光 免疫组织化学染色 肿瘤

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解旋酶RecQ5生物学功能的研究进展

11

作者 支力强 马巍 曾思翔 《癌变·畸变·突变》 CAS CSCD 2014年第5期389-391,395,共4页

人类RecQ解旋酶是一种多功能DNA解旋酶，在DNA损伤修复及维护基因组稳定性中均起着重要作用。目前，对于RecQ解旋酶家族的研究主要集中于RecQ2～4这3个成员上，对另外2个RecQ酶的研究比较少，尤其是RecQ5解旋酶。因此，本文对RecQ5解旋... 人类RecQ解旋酶是一种多功能DNA解旋酶，在DNA损伤修复及维护基因组稳定性中均起着重要作用。目前，对于RecQ解旋酶家族的研究主要集中于RecQ2～4这3个成员上，对另外2个RecQ酶的研究比较少，尤其是RecQ5解旋酶。因此，本文对RecQ5解旋酶在DNA复制、重组、修复以及在肿瘤易感性方面的生物学作用作一综述。 展开更多

关键词 recq5解旋酶 DNA复制 同源重组 DNA修复 肿瘤易感性

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丙酸睾酮对大肠杆菌RecQ解旋酶结构和功能的影响 被引量：7

12

作者 段丽霞 许厚强 +1 位作者 陈祥 骆衡 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期467-472,共6页

目的研究体外丙酸睾酮对大肠杆菌RecQ解旋酶结构和功能的影响及二者的相互作用机制。方法分别运用荧光偏振技术、ATPase试剂盒和紫外吸收光谱技术分析丙酸睾酮对大肠杆菌RecQ解旋酶活性和DNA结合活性、AT-Pase活性和构象的影响。结果丙... 目的研究体外丙酸睾酮对大肠杆菌RecQ解旋酶结构和功能的影响及二者的相互作用机制。方法分别运用荧光偏振技术、ATPase试剂盒和紫外吸收光谱技术分析丙酸睾酮对大肠杆菌RecQ解旋酶活性和DNA结合活性、AT-Pase活性和构象的影响。结果丙酸睾酮能够影响E.coliRecQ解旋酶的活性。低浓度促进解旋酶活性,高浓度抑制;抑制RecQ解旋酶与dsDNA的结合活性,其抑制常数Ki小于7×10-5 nmol.L-1;对与ssDNA结合活性的Ki为7×10-3 nmol.L-1;对ATPase活性抑制作用的时间相关性较弱;影响RecQ解旋酶的构象变化,但峰位无偏离。结论提示丙酸睾酮与RecQ解旋酶具有弱相互作用,二者具有两个结合位点。 展开更多

关键词 丙酸睾酮 大肠杆菌 recq解旋酶 解旋酶活性 DNA结合活性 ATPASE活性 构象

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E.coliRecQ解旋酶克隆表达纯化及生物学活性检测 被引量：4

13

作者 黄振蓉 吴海丽 +3 位作者 张三军 杜冰 钱旻 任华 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期21-27,共7页

RecQ解旋酶是生物分子代谢过程中重要的大分子物质,对保持遗传物质的稳定性具有重要作用。通过PCR从E.coli DH5α菌株的基因组中扩增出E.coli RecQ基因并克隆入原核表达载体pET24a(+)中,转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,目... RecQ解旋酶是生物分子代谢过程中重要的大分子物质,对保持遗传物质的稳定性具有重要作用。通过PCR从E.coli DH5α菌株的基因组中扩增出E.coli RecQ基因并克隆入原核表达载体pET24a(+)中,转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,目的蛋白主要以可溶形式存在于菌体中。优化表达条件后,经镍柱螯合亲和层析纯化获得纯度大于90%的目标蛋白质,应用生物化学和生物物理学技术研究E.coli RecQ解旋酶的生物学活性。结果表明,E.coli RecQ解旋酶具有DNA依赖性和蛋白浓度依赖性的ATP水解活性。在等蛋白质浓度下,E.coli RecQ酶结合DNA活性强弱依次为开叉dsDNA,ssDNA,平末端dsDNA。其还具有ATP依赖的dsDNA解链活性和时间依赖的DNA退火活性。实验为RecQ解旋酶家族其他重要成员的活性功能研究提供了理论依据和重要参考。 展开更多

关键词 recq解旋酶 蛋白表达 蛋白纯化 生物学活性

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甲磺酸培氟沙星抑制大肠杆菌RecQ解旋酶的体外DNA结合、解链和ATPase活性 被引量：2

14

作者 李坤 骆衡 +3 位作者 许厚强 陈祥 刘微 孟惠惠 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1133-1140,共8页

RecQ家族解旋酶是DNA解旋酶中高度保守的一个重要家族,参与DNA复制、修复、重组、转录及维持端粒稳定等细胞代谢过程,在维持染色体稳定性与完整性中起着重要作用.甲磺酸培氟沙星(pefloxacin mesylate,PFM)是一种新型氟喹诺酮类抗菌药物... RecQ家族解旋酶是DNA解旋酶中高度保守的一个重要家族,参与DNA复制、修复、重组、转录及维持端粒稳定等细胞代谢过程,在维持染色体稳定性与完整性中起着重要作用.甲磺酸培氟沙星(pefloxacin mesylate,PFM)是一种新型氟喹诺酮类抗菌药物,对一些革兰氏阴性菌具有明显的杀菌效果,临床上已广泛使用.本研究利用荧光偏振、自由磷检测技术研究PFM对大肠杆菌RecQ解旋酶的DNA结合活性、解链活性、ATPase活性的影响.结果表明,低浓度PFM可促进大肠杆菌RecQ解旋酶与ssDNA、dsDNA结合,达到一定量后PFM则抑制酶与DNA底物的结合,这种影响与DNA底物有关;PFM对RecQ解旋酶的DNA解链活性和ATP酶活性都具有抑制作用,但其抑制的效果有极显著差异(P<0.01):比较PFM对两种活性抑制的Ci值(对解链活性抑制的Ci值为(1.5±0.2)μmol/L,对ATP酶活性抑制的Ci值为(0.010±0.005)μmol/L)可知,PFM对大肠杆菌RecQ解旋酶ATPase活性的抑制强于其解链活性.这些结果可为研究以DNA解旋酶为药物靶标的分子机理奠定相关理论基础. 展开更多

关键词 甲磺酸培氟沙星 大肠杆菌recq解旋酶 生物活性 构象

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苯甲酸雌二醇对大肠杆菌RecQ解旋酶生物学活性的影响 被引量：1

15

作者 段丽霞 许厚强 +1 位作者 陈祥 骆衡 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第15期1146-1150,共5页

目的研究体外苯甲酸雌二醇对大肠杆菌RecQ解旋酶生物学活性的影响及作用机制。方法运用荧光偏振技术和ATPase检测技术分析苯甲酸雌二醇对大肠杆菌RecQ解旋酶活性、DNA结合活性和ATPase活性的影响。结果苯甲酸雌二醇对RecQ解旋酶活性、DN... 目的研究体外苯甲酸雌二醇对大肠杆菌RecQ解旋酶生物学活性的影响及作用机制。方法运用荧光偏振技术和ATPase检测技术分析苯甲酸雌二醇对大肠杆菌RecQ解旋酶活性、DNA结合活性和ATPase活性的影响。结果苯甲酸雌二醇对RecQ解旋酶活性、DNA结合活性及ATPase活性均有弱抑制作用,对RecQ解旋酶活性抑制常数Ki为5×10-3 nmol.L-1,对dsDNA和ssDNA结合活性的Ki分别为5×10-2和0.5 nmol.L-1。结论在体外苯甲酸雌二醇对大肠杆菌RecQ解旋酶生物学活性具有弱抑制作用,二者至少有两个作用位点。 展开更多

关键词 苯甲酸雌二醇 recq解旋酶 解旋酶活性 DNA结合活性 ATPASE活性

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乳腺癌干细胞BLM、RecQ4蛋白表达变化及意义 被引量：2

16

作者 鲁媛 葛章文 刘杰麟 《山东医药》 CAS 北大核心 2017年第4期17-20,共4页

目的探讨乳腺癌干细胞BLM、RecQ4蛋白表达变化及其临床意义。方法采用无血清培养法从乳腺癌MDA-MB-435细胞中分离乳腺癌干细胞(以下称干细胞),并鉴定。观察MDA-MB-435细胞裸鼠及干细胞成瘤能力,RT-PCR法检测二者ATP结合盒膜转运蛋白G2(A... 目的探讨乳腺癌干细胞BLM、RecQ4蛋白表达变化及其临床意义。方法采用无血清培养法从乳腺癌MDA-MB-435细胞中分离乳腺癌干细胞(以下称干细胞),并鉴定。观察MDA-MB-435细胞裸鼠及干细胞成瘤能力,RT-PCR法检测二者ATP结合盒膜转运蛋白G2(ABCG2)mRNA相对表达量,Western blotting法和免疫组化法检测二者BLM、RecQ4蛋白表达。结果干细胞膜表面CD44+CD24-/low比例明显高于、CD44+CD24+比例明显低于MDA-MA-435细胞(P均<0.05);两种细胞膜表面CD44-CD24+、CD44-CD24-比例比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。裸鼠成瘤实验结果显示,与接种相同密度MDA-MB-435细胞比较,接种干细胞的裸鼠成瘤时间早、肿瘤体积大;干细胞ABCG2 mRNA相对表达量为0.753±0.025,MDA-MB-435细胞为0.563±0.112;两者比较P<0.05。干细胞BLM蛋白表达低、RecQ4蛋白表达高于MDA-MB-435细胞(P均<0.05)。结论乳腺癌干细胞成瘤能力强;细胞BLM蛋白表达降低、RecQ4蛋白表达升高可能为其机制。 展开更多

关键词 乳腺癌 无血清培养 乳腺癌干细胞 recq家族解旋酶

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RECQ1的生物学特性在多发性骨髓瘤化疗中的意义 被引量：2

17

作者 张祝 黄德斌 高开波 《广东医学》 CAS 2018年第11期1749-1751,1754,共4页

RECQ1系ATP依赖性DNA解旋酶,其表达特征与人类肿瘤性疾病有明显相关性,在多种肿瘤细胞迁移与侵袭中具有调控效应,并证实RECQ1在多种肿瘤化疗中能明显增强和诱导肿瘤对药物的耐药性,与多发性骨髓瘤(MM)的发病机制有关。本文从近年对RECQ... RECQ1系ATP依赖性DNA解旋酶,其表达特征与人类肿瘤性疾病有明显相关性,在多种肿瘤细胞迁移与侵袭中具有调控效应,并证实RECQ1在多种肿瘤化疗中能明显增强和诱导肿瘤对药物的耐药性,与多发性骨髓瘤(MM)的发病机制有关。本文从近年对RECQ1生物学特性的研究及其与MM相关性予以分析,认为RECQ1解旋酶的靶向抑制剂可能成为抗MM药物研究和治疗的新架构、新趋势和新靶点。 展开更多

关键词 recq1 多发性骨髓瘤 DNA损伤修复 化疗与耐药 抗MM药物

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Bacillus subtilis RecQ酶精氨酸突变体表达纯化及活性检测

18

作者 吴海丽 张三军 +2 位作者 杜冰 钱旻 任华 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期29-34,共6页

RecQ解旋酶是生物分子代谢过程中重要的大分子物质,对保持遗传物质的稳定性具有重要作用。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)RecQ解旋酶中精氨酸可能在其对ATP水解和结合中起到重要的作用。通过PCR以Bacillus subtilis 168中抽提的基因组... RecQ解旋酶是生物分子代谢过程中重要的大分子物质,对保持遗传物质的稳定性具有重要作用。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)RecQ解旋酶中精氨酸可能在其对ATP水解和结合中起到重要的作用。通过PCR以Bacillus subtilis 168中抽提的基因组DNA为模板扩增得到大小为1.5kb的RecQ基因片段,并用重叠PCR定点突变法将该RecQ基因中的精氨酸残基(arg319和arg322)分别进行单突变和双突变,并将野生型和突变型基因克隆入原核表达载体pET24a(+)中,转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,所有目的蛋白主要以可溶形式存在于菌体中。优化表达条件后,经镍柱螯合亲和层析纯化获得纯度大于90%的目标蛋白质,检测野生型和突变型蛋白的ATP水解活性。结果表明,Bacillus subtilis RecQ解旋酶具有DNA依赖性和蛋白浓度依赖性的ATP水解活性。其arg319和arg322突变后,RecQ酶的ATP水解活性明显减弱,表明这两个精氨酸残基参与RecQ酶与ATP的相互作用。实验为RecQ解旋酶家族其他重要成员的活性功能研究提供了理论依据和重要参考。 展开更多

关键词 recq解旋酶 枯草芽孢杆菌 蛋白表达 蛋白纯化

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结肠癌组织中BLM、RECQ4的表达水平及临床意义 被引量：5

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作者 郑艺 刘杰麟 +1 位作者 韩莹 冯江龙 《贵州医科大学学报》 CAS 2018年第10期1217-1220,1231,共5页

目的:检测结肠癌组织中BLM解旋酶和RECQ4解旋酶的表达水平,分析其与结肠癌临床病理特征的关系。方法:选取手术切除的结肠癌组织及其癌旁结肠组织标本54对,采用免疫组织化学染色的方法检测结肠癌组织及癌旁组织中BLM及RECQ4蛋白的表达,... 目的:检测结肠癌组织中BLM解旋酶和RECQ4解旋酶的表达水平,分析其与结肠癌临床病理特征的关系。方法:选取手术切除的结肠癌组织及其癌旁结肠组织标本54对,采用免疫组织化学染色的方法检测结肠癌组织及癌旁组织中BLM及RECQ4蛋白的表达,比较不同TNM临床分期和分化程度的结肠癌患者癌组织中BLM和RECQ4蛋白水平。结果:BLM和RECQ4蛋白在结肠癌及癌旁组织中均有表达,但在癌组织中BLM和RECQ4蛋白表达水平高于癌旁组织(P <0. 05); BLM和RECQ4蛋白在Ⅲ期结肠癌组织中的表达水平高于Ⅱ期和Ⅰ期结肠癌组织(P <0. 05),低分化结肠癌组织中BLM和RECQ4蛋白的表达水平高于中分化和高分化结肠癌组织(P <0. 05)。结论:BLM和RECQ4在结肠癌组织中高表达,且与TNM临床分期和组织病理学分型相关,可作为结肠癌诊断和预后判断的指标。 展开更多

关键词 recq解旋酶类 结肠肿瘤 癌 肿瘤分期 免疫组织化学染色

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甘蓝型油菜BnaC.RECQ4B基因的生物信息学与组织表达分析

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作者 丁鹏 高月 +1 位作者 谭小力 朱克明 《江苏农业科学》 北大核心 2023年第12期57-64,共8页

RECQ解旋酶是机体分子代谢途径中重要的调控蛋白,本研究为了探究甘蓝型油菜减数分裂中解旋酶RECQ的功能及其表达模式。首先,运用RT-PCR技术克隆获得1个甘蓝型油菜RECQ基因,并命名为BnaC.RECQ4B,运用PCR技术克隆获得BnaC.RECQ4B的启动子... RECQ解旋酶是机体分子代谢途径中重要的调控蛋白,本研究为了探究甘蓝型油菜减数分裂中解旋酶RECQ的功能及其表达模式。首先,运用RT-PCR技术克隆获得1个甘蓝型油菜RECQ基因,并命名为BnaC.RECQ4B,运用PCR技术克隆获得BnaC.RECQ4B的启动子序列,命名为Pro.BnaC.RECQ4B;并对该基因编码的蛋白以及启动子序列进行生物信息学分析;最后,运用qRT-PCR技术对甘蓝型油菜不同组织进行基因表达量分析。结果表明,BnaC.RECQ4B开放阅读框(ORF)长度为3477 bp,编码1158个氨基酸,分子质量为18086 u,等电点为8.38,属于亲水性不稳定碱性蛋白,可能是非分泌蛋白,蛋白质二级和三级结构显示无规则卷曲和α-螺旋所占比例较高,BnaC.RECQ4B与拟南芥的氨基酸序列相似性达到74%,该基因启动子不仅包含多种响应逆境胁迫的顺式元件,还包含大量的光反应与光响应相关调控元件,BnaC.RECQ4B在花苞、花中表达量较高,分别是根中的11.94、11.19倍;在叶、茎、角果中也有较高表达,分别是根中的10.50、4.73、5.93倍。上述结果初步表明,BnaC.RECQ4B具有解旋酶功能,可能参与植物体的DNA损伤修复等功能,为进一步探讨甘蓝型油菜BnaC.RECQ4B基因表达调控及作用机制提供了理论支持与实践基础。 展开更多

关键词 甘蓝型油菜 recq解旋酶 生物信息学 克隆 基因表达量

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