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月季AP2/ERF转录因子RcERF4和RcRAP2-12的克隆及功能分析
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作者 杨娟 冯慧 +4 位作者 吉乃喆 孙丽萍 王赟 张佳楠 赵世伟 《生物技术通报》 北大核心 2026年第1期150-160,共11页
【目的】AP2/ERF(APETALA2/ethylene-responsive factor)转录因子家族在调控植物生长发育、类黄酮合成和响应逆境胁迫等方面发挥重要作用。克隆RcERF4和RcRAP2-12基因并分析其功能,为揭示AP2/ERF转录因子调控月季花色中的作用奠定基础... 【目的】AP2/ERF(APETALA2/ethylene-responsive factor)转录因子家族在调控植物生长发育、类黄酮合成和响应逆境胁迫等方面发挥重要作用。克隆RcERF4和RcRAP2-12基因并分析其功能,为揭示AP2/ERF转录因子调控月季花色中的作用奠定基础。【方法】首先,通过RT-PCR技术从月季‘夏洛特夫人’中克隆RcERF4和RcRAP2-12,并进行生物信息学、表达模式、亚细胞定位的分析及检测;进一步,采用农杆菌介导的叶盘转化法创制转RcERF4和RcRAP2-12基因烟草阳性植株,观察转基因烟草表型;最后,利用酵母双杂交和双分子荧光互补试验验证RcERF4和RcRAP2-12蛋白之间的相互作用关系。【结果】RcERF4的ORF(open reading frame)区为795 bp,编码264个氨基酸,RcRAP2-12的ORF区为1179 bp,编码392个氨基酸;RcERF4和RcRAP2-12蛋白均含有1个AP2结构域,属于ERF亚族,与玫瑰、野草莓进化关系较近,蛋白同源性较高;RcERF4和RcRAP2-12主要在月季花瓣、雄蕊及子房中表达,属于花特异性表达基因,RcERF4在‘夏洛特夫人’花发育初期表达量较高,RcRAP2-12在整个花发育时期呈现出上调表达趋势;RcERF4和RcRAP2-12蛋白均定位于细胞核;在烟草中过量表达RcRAP2-12会提高烟草花冠中花青素含量和NtANS、NtUFGT、NtAN2的表达;RcERF4和RcRAP2-12存在相互作用关系。【结论】RcERF4和RcRAP2-12为细胞核定位的ERF类转录因子,RcRAP2-12可能在月季花色形成与调控中具有潜在功能。 展开更多
关键词 rcerf4 RcRAP2-12 生物信息学分析 表达模式 亚细胞定位 转基因 蛋白互作 花色
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