目的：为了探讨Rap2c基因与肺癌发生的关系，克隆人Ras家族小G蛋白Rap2c的cDNA，构建其真核表达质粒并在人肺癌细胞株A549和H1299中表达。方法人骨肉瘤细胞株U2OS提取细胞总RNA，经逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）逆转录成cDNA，PCR扩增Ra...目的：为了探讨Rap2c基因与肺癌发生的关系，克隆人Ras家族小G蛋白Rap2c的cDNA，构建其真核表达质粒并在人肺癌细胞株A549和H1299中表达。方法人骨肉瘤细胞株U2OS提取细胞总RNA，经逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）逆转录成cDNA，PCR扩增Rap2c，酶切后插入pcDNA3．1（＋）构建真核表达质粒 pcD-NA3．1（＋）-Rap2c，采用酶切及测序鉴定。重组质粒转染A 549和H 1299细胞，Western blot 检测其目的基因表达。结果双酶切及测序结果显示重组质粒pcDNA3．1（＋）-Rap2c成功构建，Werstern blot 检测到 A549和H 1299细胞有相应蛋白表达。结论成功构建人Rap2c基因真核表达质粒，为后续研究奠定了基础。展开更多
文摘目的：为了探讨Rap2c基因与肺癌发生的关系，克隆人Ras家族小G蛋白Rap2c的cDNA，构建其真核表达质粒并在人肺癌细胞株A549和H1299中表达。方法人骨肉瘤细胞株U2OS提取细胞总RNA，经逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）逆转录成cDNA，PCR扩增Rap2c，酶切后插入pcDNA3．1（＋）构建真核表达质粒 pcD-NA3．1（＋）-Rap2c，采用酶切及测序鉴定。重组质粒转染A 549和H 1299细胞，Western blot 检测其目的基因表达。结果双酶切及测序结果显示重组质粒pcDNA3．1（＋）-Rap2c成功构建，Werstern blot 检测到 A549和H 1299细胞有相应蛋白表达。结论成功构建人Rap2c基因真核表达质粒，为后续研究奠定了基础。
